筋骨草皮肤抑菌液中苦参素含量测定

宋 强，谢 平，李政鑫

(1.西藏正源生物科技有限公司，西藏 拉萨850000；2.西藏自治区药检所，西藏 拉萨850000；3.西藏格创药业有限公司，西藏 拉萨850000)



筋骨草皮肤抑菌液中苦参素含量测定

宋 强1，谢 平2，李政鑫3

(1.西藏正源生物科技有限公司，西藏 拉萨850000；2.西藏自治区药检所，西藏 拉萨850000；3.西藏格创药业有限公司，西藏 拉萨850000)

目的：对筋骨草皮肤抑菌液中苦参素的含量进行测定。方法：配制不同浓度梯度的苦参素标准品溶液，采用紫外分光光度计法测定其吸光度值，制作标准曲线，根据标准曲线方程求得待测筋骨草皮肤抑菌液中苦参素的含量。结果：经检测求得筋骨草皮肤抑菌液中苦参素的含量为59.01μg/mL。结论：该方法简便、快速、准确，可用于筋骨草皮肤抑菌液中苦参素含量的测定。

筋骨草皮肤抑菌液；砂生槐；苦参素；含量测定

筋骨草皮肤抑菌液是已故西藏自治区著名藏医专家、西藏自治区藏医药研究院院长、西藏自治区藏医院副院长次仁巴珠教授的临床经验方，由苞叶筋骨草、砂生槐、铁棒锤、大籽蒿等藏药材组成，对痹症疼痛、各种神经性疼痛均有明显缓解作用，对风湿性关节炎、类风湿性关节炎、痛风等红肿炎症皮肤具有消炎止痛显著疗效。本文为了增强筋骨草皮肤抑菌液的质量控制，对其所含有的苦参素含量进行了测定。

1 实验材料和仪器

1.1 实验材料

筋骨草皮肤抑菌液是本实验室自主研发的新产品。苦参素标准品来源于中国食品药品检定研究院。

1.2 实验仪器

实验HF-2.0B 型超声波循环提取机(上海锐元机械设备有限公司)、UV-2000 紫外-可见分光光度计(上海尤尼柯)与pH计(上海精密科学仪器有限公司)等。

1.3 化学试剂

溴麝香草酚蓝、盐酸、三氯甲烷、氢氧化钠与95%医用乙醇均购于双双化工。蒸馏水为实验室自制。

2 实验方法

2.1 筋骨草皮肤抑菌液及标准品溶液配制

供试品溶液的配制：取实验室自制的浓度为10mg/mL的筋骨草皮肤抑菌液10mL，用蒸馏水定容至100mL待测。1mg/mL的苦参素标准品溶液的配制：称取苦参素标准品100mg，溶于100mL蒸馏水中即得。

2.2 苦参素含量测定

本实验采用紫外-分光光度法对筋骨草皮肤抑菌液中的苦参素含量进行测定。一般情况下，紫外-分光光度法是将溶液调至某一固定酸碱度(配制的标准品溶液)后再对所含的某物质的含量进行测定，然后将所得到的结果作为衡量标准进行比较。 鉴于此，本实验在pH7.6条件下，在220nm 波长处测定苦参素标准品的吸光度值(A值)，然后制成标准曲线，求出A值与苦参素含量的关系。测定筋骨草皮肤抑菌液在220nm 波长下的A值后，将其代入到标准曲线关系式中，即可得出筋骨草皮肤抑菌液中苦参素的含量。

2.2.1 苦参素标准曲线绘制 采用微量进样器依次吸取制成的1mg/mL苦参素标准品溶液0、20、40、60、80μL，分别加入到50mL的磨口锥形瓶中，将其置于80℃水浴中进行蒸干，加入pH7.6的1.75×10-4mol/L溴麝香草酚蓝缓冲溶液5.5mL，然后加入氯仿5.5mL，闭塞剧烈振摇3.5 min，分别倒入50mL的分液漏斗中，静置1.5h，当氯仿层与水层之间完全分层之后，打开分液漏斗开关，放掉水层，将氯仿层放入准备好的磨口试管里，采用紫外-可见分光光度计于220nm 波长下测定准备好的标准样品的吸收度(A值)。将测得的吸收度(A值)作为纵坐标，苦参素标准品的浓度作为横坐标，采用Excel 2010软件绘制出标准曲线。

2.2.2 筋骨草皮肤抑菌液中苦参素含量测定 空白管测定：取40μL蒸馏水置于容量为50mL的三角瓶中，加入溴麝香草酚蓝缓冲液5.5mL使PH=7.6，再加入氯仿5.5mL，在220nm 波长处采用紫外-分光光度计测定样品的吸光度值(A值)，即为A0。取配制好的筋骨草皮肤抑菌液40μL置于容量为50mL的三角瓶中，加入溴麝香草酚蓝缓冲液5.5mL使PH=7.6，再加入氯仿5.5mL，在220nm 波长处采用紫外-分光光度计测定出A值，减去A0即为样品的吸光度值(A值)，将A值代入到标准曲线方程中便可以求出其中所含有的苦参素含量。

3 实验结果

3.1 标准曲线制作

苦参素标准曲线见图1。

图1 苦参素的标准曲线

3.2 筋骨草皮肤抑菌液中苦参素含量测定结果

经过三次平行检测后求均值，结果显示样品A=0.55。代入到标准方程中求得筋骨草皮肤抑菌液中苦参素的含量为59.01μg/mL。

4 讨论

苦参素是一种生物碱，又名氧化苦参碱、注射用苦参素等，是从砂生槐子、苦豆子等药材中提取出来的一种生物碱。苦参素注射液现已在临床上广泛使用[2]。目前，很多植物与中药中均发现有苦参素的存在，因此为了中药的全面开发与利用，有必要检测其所含有的苦参素的含量。在药典[3]中，苦参素含量的测定通常可以采用比色法、薄层扫描法、HPLC 法和高效毛细管电泳法等进行测定。资料显示，有人采用高效液相色谱法测定了苦参的根、茎、叶中所含有的苦参素含量，结果显示苦参素在根中的含量较多，茎中含量最少。有学者于2005年采用高效液相色谱法测定苦参素注射液中所含有的苦参素含量，结果显示该方法简便，重现性好，可用于苦参素的含量测定。有学者于2004年建立了苦参素含量的高效液相色谱测定方法，结果显示220nm为苦参素的测定波长，且采用高效液相色谱测定苦参素方法稳定可靠[4]。另有学者于2005年也建立了采用高效液相色谱法测定苦参素胶囊中的苦参素含量的方法，结果显示该法可靠性较强，可以用于苦参素的质量控制。另有学者于2012年建立了采用HPLC法测定苦参素中氧化苦参碱含量的方法，结果显示HPLC法可以用于测定苦

参素中氧化苦参碱的含量，且其准确性较强，专属性较好，灵敏度比较高，非常适用于苦参素中氧化苦参碱的含量测定[5]。纵观这些研究发现，HPLC是一种检测苦参素含量的较好方法，但是其费用高、硬件要求高，而紫外分光光度计法费用低，且比较稳定，因此比较实用。

砂生槐是西藏特有高原生物资源，在藏语中称为“吉瓦”，或称为西藏狼牙刺，属于豆科槐属，为多年生灌木植物。该植物生长在海拔2 800～4 400m的雅鲁藏布江中段流域中的山坡、河谷与沙滩上。西藏砂生槐资源储存量大，为当地老百姓的一种薪火植物。据中国科学院考察发现，经估算砂生槐生长面积约在200万亩以上，每年可生产出种子3～6万吨左右。砂生槐种子属于藏医常用药材，收载于《部颁标准 藏药》(1995年版)，藏医认为该药物具有一定的消炎解毒、催吐的功效，因此在藏医中常被用于治疗湿热黄疸、白喉、痢疾、赤巴病、消化不良、虫病等病。现代研究证明砂生槐含有的生物碱活性成分主要包括氧化苦参碱(Oxymatrine，C15H24N2O2)、苦参碱(Matrine，C15H24N2O)，其中氧化苦参碱又名苦参素。兰州大学生命科学院李玉祥等人曾报道，砂生槐种子中被检测出含有17种氨基酸，且总量均高达24.53%，分别是西藏小麦和青稞的1.57倍和2.55倍。同时，砂生槐原植物是典型的深根树种，防沙固沙能力很强，对西藏生态保护具有重要生态价值。砂生槐主根穿透力极强，平均渗入地下3m，侧根在距地表0.7～1.5m处形成了稳定的固沙层，是很好的固沙植物。砂生槐生物碱是医药中间体，也是消毒剂与生物农药的重要原料，西藏正源生物科技有限公司已建成砂生槐生物碱生产线，对砂生槐产业发展具有积极示范意义。

[1] 张胜, 赵垦田, 向瑞.西藏砂生槐研究综述[J]. 内蒙古林业科技， 2009，35(1): 57-59.

[2] 狄天云, 张芦燕, 王坤. HPLC法测定苦参素中氧化苦参碱含量的方法学研究[J]. 宁夏医学杂志, 2013, 35(8): 714-715.

[3] 中华人民共和国药典委员会. 中国药典[S]. 北京：中国医药科技出版社, 2010: 188-189.

[4] 陈玉华.高效液相色谱法对苦参素注射液的含量测定[J]. 中医药学报, 2008, 36(6): 41-42.

[5] 张萍，杨璐，王耀欣.高效液相色谱法HPLC测定自采苦参根茎和根中5个生物碱的含量[J].药物分析杂志,2012,32(3):512-513.

(责任编辑：魏 晓)

2014-03-31

宋强(1979-)，西藏正源生物科技有限公司质量工程师、执业药师，研究方向为藏药新药和传统藏药的二次研究与开发。

R284.2

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1673-2197(2014)13-0029-02