HPLC在中药有效成分分析中的应用

周启仲

(广州市妇女儿童医疗中心，广东 广州 510120)



HPLC在中药有效成分分析中的应用

周启仲

(广州市妇女儿童医疗中心，广东 广州 510120)

目的：分析HPLC在中药及其制剂有效成分分析中的应用。方法：应用HPLC分析法，对中药及其制剂中有效成分的含量进行分析，研究HPLC法的应用效果。结果：白花蛇舌草中齐墩果酸含量测定的平均回收率为97.04%，RSD为2.09%；而熊果酸含量测定的平均回收率为96.79%，RSD为2.66%。采用醇提取法与酸解法分别提取中药，经HPLC分析，两种提取法提取的中药及其制剂的有效成分含量比较差异无统计学意义(P<0.05)。结论：HPLC法具有灵敏度高、选择性强、分离效果好等特点，是测定中药有效成分的有效方法。

HPLC；中药；有效成分分析

HPLC即高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography ，HPLC)，是以液体为流动相，采用高压输液系统，将不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等泵入装有固定相的色谱柱中，各成分在柱内被分离后，进入检测器中进行检测的分析方法。近年来，随着HPLC的不断完善，其在工业、农学、化学、医学等方面的应用也越来越普遍[1]。本文具体分析了HPLC在中药有效成分分析中的应用，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

仪器：高效液相色谱分析仪LC-3000(艾伦分析仪器有限公司)，色谱数据工作站V4.0+，磁力加热搅拌器(国华企业，79-1型)。

中药：中药材有枇杷叶、毛冬青、泽兰、女贞子、紫苏、茵陈、白花蛇舌草等；对照品有齐墩果酸、熊果酸(中国食品药品检定研究院)。

实验用水为二次蒸馏水，其他试剂均为分析纯。

1.2 方法

色谱条件：色谱柱：CLC-ODSC18(150mm×6.0mm，5μm)，流动相：甲醇∶水∶冰乙酸∶三乙胺(87∶13∶0.04∶0.02)，检测波长：210mm。在上述色谱条件下，齐墩果酸与熊果酸的拖尾因子均小于1.5，理论塔板数大于5 000。

(1)酸解法。精密称取山楂、枇杷叶、毛冬青、泽兰、女贞子、紫苏、茵陈、白花蛇舌草、连翘、三七等药材粉末各1.0g，并将其分别置于100mL烧瓶内，于烧瓶中加入适量盐酸及乙醇，回流提取2h。将烧瓶内溶液定量转移到容量瓶中，滴加饱和NaOH调节pH值至5.0，再采用乙醇定容、过滤，取续滤液1mL离心，取上清液进样分析。

(2)醇提法。精密称取山楂、枇杷叶、毛冬青、泽兰、女贞子、紫苏、茵陈、白花蛇舌草、连翘、三七等药材粉末各1.0g，并将其分别置于100mL烧瓶中，加入50mL无水乙醇，采用水浴法加热回流2h，提取液冷却后过滤，取续滤液进样测定分析。

(3)对照品溶液制备。本研究选择的对照品为齐墩果酸与熊果酸，精密称取齐墩果酸10mg和熊果酸15mg，分别置于50mL容量瓶中，加无水乙醇溶解稀释至刻度。

1.3 系统适应性试验

系统适应性试验包括精密度试验、重复性试验、线性试验与稳定性试验。

(1)精密度试验。精密称取6等份白花蛇舌草粉末，按醇提法提取后进样测定，结果：白花蛇舌草样品中齐墩果酸峰面积RSD为1.46%，熊果酸峰面积RSD为1.89%，表明该法精密度良好。

(2)线性试验。分别精密吸取齐墩果酸和熊果酸对照溶液各0.3、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、10.0mL，置于50mL容量瓶中，采用无水乙醇稀释至刻度，分别进样测定峰面积。以对照品浓度为横轴对峰面积积分进行线性回归。线性回归方程如下所示[2]：

A=1.513 677 7C+3.737 683 4(r=0.999 5)

A=2.353 940 09C-7.404 378 2(r=0.999 2)

(3)重复性试验。精密称取白花蛇舌草粉末适量，按照醇提法制备样品溶液，连续进样6次测定峰面积积分，结果表明齐墩果酸含量RSD为2.68%，熊果酸含量RSD为2.95%，表明该方法重复性良好。

(4)稳定性试验。采用醇提法制备白花蛇舌草样品溶液，分别于0、2、4、6、8、12、16、18、24h进样测定，结果表明齐墩果酸峰面积RSD为1.086%，熊果酸峰面积RSD为1.78%，表明样品溶液在24h内稳定性良好。

2 结果

2.1 加样回收率测定结果

精密称取已测得有效成分含量的白花蛇舌草6份，分别加入一定量的齐墩果酸与熊果酸，采用醇提法提取后进样测定，计算有效成分含量和加样回收率。结果表明，齐墩果酸的平均回收率为97.04%，RSD为2.09%，而熊果酸的平均回收率为96.79%，RSD为2.66%，均符合要求，如表1所示。

表1 回收率检测结果分析

2.2 两种提取法样品测定结果比较

分别采用醇提法与酸解提取法对本研究所选中药进行提取，并采用HPLC法测定有效成分含量，结果表明，两种方法提取所得的齐墩果酸和熊果酸含量无统计学差异(P<0.05)，如表2所示。

表1 两种提取法对样品测定结果比较 (mg/mL)

3 讨论

“色谱法”和“色谱图”这一概念首次由俄国植物化学家茨维特于1903年提出，其于研究文章中写道：“一植物色素的石油醚溶液从一根主要装有碳酸钙吸附剂的玻璃管上端加入，沿管滤下，后用纯石油醚淋洗，结果按照不同色素的吸附顺序在管内观察到它们相应的色带，就象光谱一样，称之为色谱图”。之后，随着时代的不断演变和科技的快速发展，相继又出现了薄层色谱、纸色谱、离子交换色谱等技术。直至到1990年以后，生物工程和生命科学在国内外迅速发展，高效液相色谱技术更广泛地应用于分离、纯化、制备课题中，应用前景愈加广阔[3]。

近年来，随着分离技术的发展，HPLC在中药及其制剂有效成分分析中的应用也越来越广泛。由于中药及其制剂化学成分非常复杂，为保证临床应用中药的合理性与安全性，很有必要对中药及制剂的有效成分、作用机理、特点、药物反应等进行全面、综合、科学的分析。HPLC法具有操作方便、适用范围广、分离速度快、重现性好、灵敏度高、柱效高等特点，对衡量中药及其制剂的质量是否达到要求，产品是否稳定具有十分重要的作用[4-5]。

本研究分别采用酸解提取法与醇提法提取枇杷叶、毛冬青、泽兰、女贞子、紫苏、茵陈、白花蛇舌草等中药材中的有效成分齐墩果酸和熊果酸，结果表明，两种提取方法所得的有效成分含量差异无统计学意义(P<0.05)。

综上所述，HPLC法具有高灵敏度、高选择性、高效性等优点，在测定中药及其制剂有效成分含量方面优势明显，是最常用的含量测定方法。虽然其仍存在色谱柱易污染、柱容量小等缺点，相信随着分离技术的发展，HPLC技术将会更加完善、高效、灵敏。

[1] 朱桃花,范璐,钱向明,等.HPLC分析植物油脂甘油三酯结构组成的研究现状[J].中国油脂,2011,36(5):59-63.

[2] 汤君,何彩玉,程杰,等.恩曲他滨对映异构体的合成、表征及HPLC分析[J].化学研究与应用,2014,2(2):294-297.

[3] 李南薇,钟银链.木瓜叶氨基酸提取工艺优化及组成成分的HPLC分析[J].广东农业科学,2012,11(11):119-121.

[4] 李岑,肖远灿,杨红霞,等.HPLC分析不同来源藏药当佐中4种指标成分的含量[J].中国中药杂志,2011,8(8):162-164.

[5] 颜军,侯贤灯,徐开来.柱前衍生HPLC分析银耳多糖的单糖组成[J].中国测试,2011,37(1):44-47.

(责任编辑：尹晨茹)

2014-06-04

周启仲(1968-)，男，广东省广州市妇女儿童医疗中心主管中药师，研究方向为中药材鉴定和保管。

R284.1

A

1673-2197(2014)18-0025-02