电针对缺血性脑卒中后神经行为学评分及ERK1/2通路影响研究

叶晓倩，杨珊莉，江一静

(1.福建中医药大学，福建 福州 350122；2.福建中医药大学附属康复医院，福建 福州 350003)



电针对缺血性脑卒中后神经行为学评分及ERK1/2通路影响研究

叶晓倩1，杨珊莉2，江一静2

(1.福建中医药大学，福建 福州 350122；2.福建中医药大学附属康复医院，福建 福州 350003)

目的：观察电针曲池、足三里穴对大鼠神经行为学评分的影响及其与ERK1/2信号通路的关系。方法：采用随机数字表法，将30只大鼠分为3组，分别为假手术组、模型组、电针组，每组各10只。造模后待缺血再灌注2h后予以神经行为学评估，每天1次；造模后第1天对电针组大鼠进行电针干预，30min/次/天，疗程为3天，其余两组大鼠不作任何处理； Western Blot检测大鼠ERK1/2、p-ERK1/2表达情况并观察ERK1/2通路激活情况。结果：电针干预3天后，电针组大鼠神经行为学评分显著低于模型组(P<0.05)，差异具有统计学意义； Western Blot示电针组大鼠p-ERK1/2蛋白水平显著高于模型组(P<0.05)，差异具有统计学意义。结论：电针干预治疗后大鼠神经行为学明显改善，可能与激活ERK1/2信号通路有关。

电针；缺血性脑卒中；ERK1/2信号通路

[1] 苏芬英.中西结合治疗月经不调 233 例观察[J].中国社区医师:医学专业,2010,12(31):119.

[2] 严群.浅析中医调理妇科月经失调的好处[J].医学信息:中旬刊,2012,24(8):3798.

[3] 王岩,王晟,王万卿.中西医结合治疗慢性盆腔炎 60 例疗效观察[J].时珍国医国药,2007,18(3):752-753.

[4] 胡锦霞.中西医结合治疗月经紊乱的成果分析[J].中国医药指南,2010,8(35):278-279.

[5] 黄琼瑶.台湾地区女性月经不调的中医证候分析[D].广州:广州中医药大学,2013.

(责任编辑：尹晨茹)

池”“足三里”对促进中风患者康复有着良好的疗效[2]。本研究以造模大鼠为研究对象，探析电针曲池穴、足三里穴发挥神经保护作用的机理，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 SPF级健康雄性SD大鼠50只(250～300g)，购自上海斯莱克动物有限公司(许可证号码：假手术XX(沪)2007-0005)。

1.1.2 试剂 ERK1/2、p-ERK1/2、β-actin兔抗(Cell Signaling Technology)，HRP标记抗兔二抗(厦门鹭隆生物试剂有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 动物分组 采用随机数字表法，将30只大鼠分为3组，分别为假手术组、模型组、电针组，每组各10只，大鼠称重并编号。各组大鼠体重和鼠龄均无统计学差异(P>0.05)，具有可比性。

1.2.2 动物造模 术前实验动物均禁食12h，腹腔注射3mL/kg水合氯醛进行麻醉，参照Zea-Longa线栓法[3]制备大鼠大脑动脉缺血再灌注模型：所有大鼠均选择左侧大脑中动脉区作为梗死侧，假手术组大鼠仅分离动脉，不结扎、插线。动物放置于室温(25℃)环境下苏醒，正常饮食。

1.2.3 神经行为学评分 使用Zealonga 5评价方法[3]，根据大鼠缺血再灌注模型的神经症状将神经损伤程度分为0～4分，1～3分表明造模成功。

1.2.4 电针干预 ①假手术组：麻醉后大鼠回笼饲养，不予以任何治疗；②模型组：造模后大鼠回笼饲养，不予以任何治疗；③电针干预组：电针干预组大鼠取患侧“曲池”“足三里”穴，选用G6805电针仪连接针灸针体，使用疏密波，以肢体轻轻抖动为度； 30min/1次/天，疗程为3天，术后第1天开始。1.2.5 Western Blot 取大鼠左侧皮质脑组织提取蛋白200mg，等量蛋白(50μg)上样，SDS-PAGE电泳，转膜后，5%脱脂奶粉封闭2h，分别加入抗ERK1/2、p- ERK1/2抗体孵育，4℃过夜，加入相应HRP标记抗兔二抗室温放置1h。将PVDF膜置于化学发光成像仪上，避光条件下将配置好的ECL显色液覆盖于PVDF膜上，采用Bio-Rad Image软件分析处理成像图片。

1.3 统计学分析

2 结果

2.1 三组大鼠神经行为学评分比较

对三组大鼠的神经行为学进行评估，再灌注2h后，模型组大鼠神经行为学评分与电针组比较差异无统计学意义(P>0.05)；再灌注3天后，电针组大鼠神经行为评分显著低于模型组(P=0.000<0.01)，差异具有统计学意义。详见表1。

表1 三组大鼠神经行为学评分比较 ±s)

注：与模型组比较，*P<0.0。

2.2 三组大鼠ERK1/2信号通路表达比较

如图1所示，各组大鼠t-ERK1/2含量比较差异无统计

学意义(P>0.05)；电针组大鼠p-ERK1/2表达量显著高于模型组和假手术组(P<0.05)，差异具有统计学意义。电针组、模型组大鼠β-actin水平显著高于假手术组(P<0.05)，差异具有统计学意义，详见图1。

图1 电针对脑缺血再灌注模型大鼠ERK1/2信号通路表达影响

注：与模型组比较，*P<0.05。

3 讨论

缺血性脑卒中属于中医“中风”的范畴，其基本病机为阴阳失调、气血逆乱。祖国传统医学中素有“治痿独取阳明”之说，曲池穴、足三里穴均为阳明经穴，阳明经为多气多血之经，阳明经气血通畅，正气得以扶助，经络得以疏通，则机体功能顺利恢复。中风的病变部位主要在头部，而曲池穴属于手阳明经，足三里属于足阳明经，手、足阳明经均循行至头部，两经之气相互贯通、重合而行，协同治疗中风。大量古文献研究发现，曲池穴、足三里穴是治疗中风时使用频率较高的两个穴位。功能性磁共振成像观察也证实，针刺足三里穴可以激活大脑的大部分区域，主要包括额叶、颞叶、岛叶、顶叶、扣带回和小脑等，其中以颞叶激活最明显[4]。本研究结果显示，电针组大鼠神经行为学评分显著低于模型组(P<0.05)，差异具有统计学意义，提示电针能够改善大鼠神经行为功能。

ERK1/2通路与缺血性脑卒中的发生关系密切，其对受损大脑是发挥保护作用还是损害作用，目前尚存较大争议。尽管如此，很多证据都肯定了ERK1/2通路激活对缺血性脑卒中大脑的保护作用。当脑缺血再灌注损伤发生后，激活ERK1/2通路信号后可抑制脑组织炎性反应的发生，促进骨桥蛋白(OPN)分泌，从而减少兴奋性氨基酸释放，增强IL-20表达，促进细胞增殖，保护缺血缺氧的脑组织。本研究结果显示，电针组大鼠大脑p-ERK1/2蛋白表达量显著高于模型组，提示电针干预可能通过激活ERK1/2通路而发挥脑保护作用。

综上所述，电针干预脑缺血再灌注模型大鼠曲池、足三里穴后可降低其神经行为学评分，保护缺血缺氧的大脑组织，其机制可能与激活ERK1/2信号通路有关。

参考文献：

[1] 中华医学会神经病学分会脑血管病学组急性缺血性脑卒中诊治指南撰写组.中国急性缺血性脑卒中诊治指南2010[J].中国全科医学,2011,14(35): 4013-4017.

[2] 张成岗,李伟光,孙长青,等.氧化应激调控网络在缺血缺氧性脑损伤干预治疗中的作用[J].中国药理通讯,2012,29(3):19-20.

[3] LONGA EZ,WEINSTEIN PR,CARLSON S,et al. Reversible middle cerebral artery occlusion craniectomy in rats[J].Stroke,1989(20):84-91.

[4] 肖叶玉,杜丽,洪璧楷,等.手法针灸足三里穴脑内效应磁共振成像研究[J].四川中医,2007,25(1):98-101.

(责任编辑：尹晨茹)

2014-07-09

国家自然科学基金青年科学基金项目(81102628)

叶晓倩(1986-)，女 ，福建中医药大学硕士研究生，研究方向为脑血管疾病康复。

R245.3;R255.2

A

1673-2197(2014)20-0074-02

相关统计显示[1]，约60%～80%脑卒中患者为缺血性脑卒中，其是由椎动脉狭窄或闭塞、脑供血不足导致的脑组织坏死的总称，在老年人群中的发病率和病死率极高。目前，电针被运用于治疗各种疾病中，包括改善脑卒中患者功能障碍，诸多学者也做了大量相关研究，进一步证实了针刺疗法在中风康复治疗中的有效性。 临床实践表明， 电针 “曲中医认为，在非生理期，女性冲任气血能保持相对平和，此时致病因素很难造成冲任、胞宫不足或瘀滞，因此未表现出腹痛等不适症状[5]。但在经期前后，女性机体血海慢慢充盈而后外泄，胞宫内的气血从旺盛短暂转变为虚弱，气血的急剧变化使致病因素很容易乘虚而入，造成气血运行不顺畅，阻碍胞宫内经血下行，不通则痛。此外，冲任胞宫濡养不足也会造成患者腹痛。

中药治疗月经不调注重分期辨证，月经前期调养经血，月经期间活血养血，月经后益气健脾。本研究结果表明，经过治疗，两组患者临床症状均有一定程度的缓解，观察组患者治愈率和总有效率分别为59.4%和96.9%，均显著高于对照组的40.6%和84.4%，差异具有统计学意义(P<0.05)。提示中西医结合治疗月经不调患者临床疗效显著，可将患者体内激素调整至正常水平，恢复月经周期的稳定性，优于单纯西药治疗，值得临床推广应用。