地喹氯铵含片含量测定分析

刘佳琪

(武汉市中医医院，湖北 武汉 430010)



地喹氯铵含片含量测定分析

刘佳琪

(武汉市中医医院，湖北 武汉 430010)

目的：采用HPLC法测定地喹氯铵含片中的地喹氯铵含量。方法：选用Phenomenex/Luna C18(250mm×4.6mm，5μm)色谱柱，流动相为甲醇-己烷磺酸钠溶液(pH3.8)(3∶7)，进样体积为20μL，流速为1mL/min，检测波长为240nm。结果：地喹氯铵在4.970～14.910μg/mL浓度范围内与其峰面积呈良好的线性关系；精度实验中，地喹氯铵峰面积RSD为0.36%；稳定性实验中，地喹氯铵峰面积RSD为0.70%；重复性实验中，地喹氯铵峰面积RSD为0.99%，均符合要求。结论：采用HPLC法测定地喹氯铵含片中地喹氯铵含量精密度高，能有效分离主峰和干扰峰，且稳定性、重复性及耐用性均较好，可广泛推广和使用。

地喹氯铵；HPLC；含量测定

地喹氯铵为非抗生素药物，其对革兰氏阳性菌及阴性菌等均具有显著的抑制作用，还可有效清除真菌及抗酸杆菌，且不会对机体产生刺激作用，临床常用于治疗咽喉细菌感染等[1]。地喹氯铵又名克菌定，是双季铵盐表面活性剂的一种，其作用机理为其能与真菌和细菌细胞胞浆膜内的磷酸根产生很强的结合作用，改变细胞膜的通透性，从而有效抑制病原体的糖酵解和呼吸作用，使细胞内代谢物渗出，改变菌体蛋白质性质，进而杀死细菌[2]。目前，测定地喹氯铵含量的常用方法包括毛细管电泳法、共振光散射光谱法、高效液相色谱法及荧光分析法等。本研究在EP5.0(欧洲药典)的基础上，对色谱条件进行了改进，有效地将地喹氯铵峰从杂质峰中分离出来，现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

日本岛津生产的高效液相色谱仪，型号为SPD-10Avp/LC-10ATvp；上海精密科学仪器有限公司生产的紫外-可见光分光光度计，型号为756C；德国Sartorius天平，型号为BT25S；上海大普仪器有限公司生产的精密酸度计，型号为PHS-3C。

1.2 试药

已烷磺酸钠、甲醇为色谱纯，其余试剂为分析纯；抽取3种规格为0.25mg的地喹氯铵含片作为测定对象；对照品为日本明治果生产的含量为99.8%的地喹氯铵(DCWS-65-1)；空白对照为珠海生物化学制药厂提供的空白辅料。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

选择Phenomenex/Luna C18(250mm×4.6mm，5μm)色谱柱，流动相为甲醇-己烷磺酸钠溶液(浓度为0.67%，配制方法：于300g纯水中加入己烷磺酸钠2g，完全溶解后，采用冰醋酸将其pH调至3.8)(3∶7)，进样体积为20μL，流速为1mL/min，检测波长为240nm。

2.2 对照品溶液制备

称取适量对照品(称取前需将地喹氯铵置于105℃下进行干燥，待总重量无变化后方可称取)，加入磷酸-甲醇-水溶液(1∶15∶5)，充分溶解后将其稀释为10μg/mL地喹氯铵溶液，即得。

2.3 样品溶液制备

取10片待测样品，将其研磨成粉末，精密称定0.25mg，加入适量磷酸-甲醇-水溶液(1∶15∶5)适量，超声处理5min，待冷却后用磷酸-甲醇-水溶液将其稀释至25mL，摇匀过滤后即得。

2.4 测定方法

精密吸取样品溶液及对照溶液各20μL，注入液相色谱仪中，采用外标法，根据样品峰面积计算地喹氯铵含量。

2.5 专属性考察

分别取地喹氯铵对照品溶液和空白辅料溶液各20μL，按照上述色谱条件注入液相色谱仪，测定结果表明空白辅料不会干扰样品的色谱测定结果，如图1所示。

2.6 线性关系考察

精密称取干燥后的地喹氯铵对照品9.94mg，采用流动相将其稀释至100mL(浓度99.400μg/mL)，放入容量瓶中备用。采用移液管分别吸取上述溶液1.5mL、1.25mL、1.0mL、0.75mL、0.5mL，置于10mL容量瓶内，加流动相稀释至刻度，分别得到14.910μg/mL、12.425μg/mL、9.940μg/mL、7.455μg/mL、4.970μg/mL的地喹氯铵溶液，依次进样测定。以地喹氯铵浓度(C)为横坐标，峰面积积分(A)为纵坐标，进行线性回归，结果表明地喹氯铵在4.970～14.910μg/mL浓度范围内与其峰面积呈良好的线性关系。

图1 地喹氯铵空白辅料(上)及地喹氯铵对照品(下)液相色谱

2.7 精密度试验

取浓度为9.940μg/mL对照品溶液6份，按照上述色谱条件依次进样，结果表明地喹氯铵峰面积RSD为0.36%，说明该测定方法具有较高的精密度。

2.8 稳定性试验

取浓度为9.940μg/mL的对照品适量，分别放置0h、1h、2h、4h、6h、8h、12h、24h后进样测定，结果表明地喹氯铵峰面积RSD为0.70%，说明该对照品溶液在24h内具有较高的稳定性。

2.9 重复性试验

分别配制6份同批次的地喹氯铵样品溶液，进样测定，结果表明地喹氯铵平均含量为标示量的97.9%，峰面积RSD为0.99%，说明该测定方法具有良好的重复性。

2.10 样品测定

取10片待测样品，将其研磨成粉末，精密称取0.25mg，加入适量磷酸-甲醇-水溶液(1∶15∶5)溶解，超声处理5min，待冷却后用磷酸-甲醇-水溶液将其稀释至25mL，摇匀过滤。精密吸取20μL样品溶液进样测定，采用峰面积归一化法计算地喹氯铵含量，结果表明地喹氯铵平均含量为标示量的97.9%，符合要求。见图2。

图2 地喹氯铵含片液相色谱

3 讨论

地喹氯铵是常用的阳离子表面活性剂之一，其产生的阳离子可改变细胞膜结构及通透性，从而有效抑制病原体的糖酵解和呼吸作用，使细胞内的代谢物渗出，改变菌体蛋白质性质，进而杀死细菌。地喹氯铵对碱金属离子具有较强的络合能力，可建立碱金属离子渗透通道，将离子顺利输送至膜内，从而增加膜内渗透压，造成细胞膜破损，起到杀菌作用。

3.1 检测波长选择[3]

对稀释后的地喹氯铵溶液进行紫外扫描，波长范围为200～400nm，结果表明地喹氯铵在240nm波长处吸光度最大，因此选择240nm为检测波长。

3.2 流动相选择

采用国家药品标准规定的含量测定方法，即流动相为0.005mol/L庚烷磺酸钠溶液-甲醇-乙腈-三乙胺(20∶60∶20∶0.5)进行含量测定，不论是改变流动相比例、pH值，还是更换色谱柱，地喹氯铵主峰仍不能与溶剂峰分开，因此笔者参照EP5.0的流动相条件，并对流动相比例和pH值进行优选[4]，得出最佳色谱条件为：0.67%己烷磺酸钠溶液-甲醇(30∶70)。结果表明，采用优化后的色谱条件，主峰与杂质分离效果良好，峰形对称，保留时间适宜，适用于地喹氯铵含片含量测定。

3.3 耐用性考察

采用多种品牌、不同国家生产的十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱测定同一样品，测定结果间相差较小，说明该法具有较好的耐用性。

综上所述，采用HPLC法测定地喹氯铵含片中地喹氯铵含量精密度高，能有效分离主峰和干扰峰，且稳定性、重复性及耐用性均较好，可广泛推广和使用。

[1] 李超,黄永旺.复方地喹氯铵含片临床应用[J].天津药学,2002,14(4):54-55.

[2] 白若琬,李永春,朱建东,等.HPLC法测定洛度沙胺氨丁三醇滴眼液的含量[J].食品与药品,2005,7(7):42-44.

[3] 张琳,薛荣奇,董金凤. 地喹氯铵喷雾剂治疗急性咽炎30例[J]. 陕西医学杂志,2006,35(10):1344-1345.

[4] 王敬风.奥美拉唑钠肠溶片中奥美拉唑钠含量测定方法的改进[J]. 河北化工,2011,34(1):46-47.

(责任编辑：尹晨茹)

2014-04-29

刘佳琪(1990-)，男，湖北省武汉市中医医院药师，研究方向为医院药学。

R927.2

A

1673-2197(2014)16-0028-02