慢性前列腺炎患者前列腺液中IILL--1177的表达及与TNF-α、IL-8、IL-6、IILL--1100相关性分析*

曹志彬王元天薛 蔚郑贯忠黄旭元黄翼然**

1. 嘉定区中心医院泌尿外科（上海 201800）; 2. 上海交通大学医学院附属仁济医院

慢性前列腺炎患者前列腺液中IILL
--1177的表达及与TNF-α、IL-8、IL-6、IILL--1100相关性分析*

曹志彬1王元天2薛 蔚2郑贯忠1黄旭元2黄翼然2**

1. 嘉定区中心医院泌尿外科（上海 201800）; 2. 上海交通大学医学院附属仁济医院

目的通过测定并对比不同类型慢性前列腺炎（CP）患者前列腺液（EPS）中IL-17、TNF-α、IL-8、IL-6、IL-10的含量并分析其相关性，了解IL-17在CP中的作用及与其他细胞因子的关系。方法通过尿常规、EPS常规检查、两杯法尿液细菌培养和美国国立卫生研究院慢性前列腺炎症状评分指数（NIH-CPSI），将110例CP患者按NIH前列腺炎诊断标准进行分型。采用双抗体夹心ELISA法检测患者及30例正常对照组EPS中的IL-17、TNF-α、IL-8、IL-6、IL-10含量。用SPSS for Windows 12.0统计软件对测量数据进行统计学分析。结果Ⅱ型、Ⅲ-a型和Ⅲ-b型CP患者EPS中IL-17水平升高，与对照组差异有统计学意义（P＜0.01）；Ⅱ型和Ⅲ-a型IL-17水平无统计学差异（P＞0.05）；但两者与Ⅲ-b型IL-17水平存在统计学差异（P＜0.05）。IL-17水平与NIH-CPSI评分呈正相关（r =0.462，P＜0.05）。IL-17与IL-10存在正相关（r =0.289，P＜0.05）。IL-17与IL-6存在正相关（r =0.26，P＜0.05）。结论CP患者EPS中IL-17表达变化提示它参与了前列腺的炎症反应。IL-17不仅是评价CP严重程度的一项指标，也是潜在的治疗CP新的突破口。

T淋巴细胞亚群; 白细胞介素17; 前列腺炎; 细胞因子

Key woorrddssT-Lymphocyte Subsets; Interleukin-17; prostatitis; cytokine

慢性前列腺炎（chronic prostatitis, CP）是男科临床中最常见的难治性疾病之一，大多病因不清,发病机制不明。近年来，对CP的研究已深入到细胞因子水平。前列腺液（EPS）中的细胞因子TNF-α、IL-8、IL-6、IL-10在CP中的作用已有报道[1,2]。最近，TH17细胞的发现将CD4+T细胞亚群更新为三类—TH1、TH2和TH17细胞。TH17细胞以其分泌白介素-17（interleukin-17，IL-17）而得名。已知IL-17在宿主防御、自身免疫性疾病发病以及肿瘤中发挥重要的作用，相关研究已渐成为医学及免疫学研究的热点[3-5]。本研究试图通过测定并对比不同类型CP患者和正常人EPS中IL-17、TNF-α、IL-8、IL-6、IL-10的含量并分析其相关性，了解IL-17在CP中的作用。加深对CP的认识，为CP的诊断、治疗提供参考。

材料与方法

一、临床资料

收集2010年9月至2012年9月在我院泌尿外科及男科门诊就诊的有明显CP症状、符合美国国立卫生研究院（NIH）前列腺炎诊断标准的110例患者的EPS作为研究对象。患者年龄在18～58岁，平均30.6岁。研究对象按NIH有关前列腺炎分类标准分为3组：（1）Ⅱ型CP组（慢性细菌性前列腺炎）34例；（2）Ⅲ-a型组（炎症性慢性骨盆疼痛综合征）36例；（3）Ⅲ-b型组（非炎症性慢性骨盆疼痛综合征）40例。另外，选取门诊以健康查体检或婚前体检、无任何临床症状的30人作为对照组，年龄在21～38岁，平均27.4岁，体格检查、EPS常规、尿常规以及按摩前后尿细菌培养均无异常。

二、方法与步骤

（一）病史询问及症状评分

所有的患者均详细询问病史，包括药物服用史及性生活情况，均进行美国国立卫生研究院慢性前列腺炎症状评分指数（NIH-CPSI）统计，并排除可能引起类似症状的其他相关疾病，如尿道炎、附睾炎以及精索静脉曲张、直肠及肛周病变等。

（二）标本的收集及保存

研究对象及对照组均要求禁欲3～5d，取标本前清洗消毒阴茎头及尿道外口，分别取前列腺按摩前后尿液行尿常规及尿细菌培养检查。取前列腺液时嘱患者胸膝位，行前列腺肛诊检查并按摩出前列腺液，将开始流出的EPS收集于1.5ml离心管中，2h内送-20℃冰冻保存、待检。尿道口剩余的一滴EPS滴于载玻片上行EPS常规镜检，高倍镜下（×400）观察5个视野并计算白细胞平均计数。

（三）EPS中的细胞因子检测

用购自上海易利生物科技有限公司的酶联免疫检测试剂盒，灵敏度为30pg/ml，采用双抗体夹心ELISA法检测EPS中IL-17、TNF-α、IL-8、IL-6、IL-10的含量。

（四）统计方法

数据应用SPSS for Windows 12.0统计软件进行统计学分析，应用单因素方差分析各组之间年龄、白细胞计数、NIH-CPSI评分、IL-17、TNF-α、IL-8、IL-6、IL-10之间水平差异，若方差不齐，则采用非参数检验比较各组水平差异。应用Pearson相关性分析方法分析IL-17、TNF-α、IL-8、IL-4、IL-10、EPS白细胞计数、NIH-CPSI评分之间的相关性。P＜0.05认为差异有统计学意义。

结 果

一、EEPPSS镜检结果

1. Ⅱ型CP组EPS镜检白细胞≥10个/HP，卵磷脂小体≤++，前列腺按摩前中段尿细菌培养及镜检均为阴性，按摩后初段尿细菌培养阳性，其中大肠杆菌14例，表皮葡萄球菌8例，金黄色葡萄球菌5例，变形杆菌6例，淋球菌1例。

2. Ⅲ-a型组按摩前、后尿液细菌培养均为阴性，EPS镜检白细胞≥10个/HP，卵磷脂小体≤++，细菌培养阴性。

3. Ⅲ-b型组前列腺按摩前、后尿液细菌培养均为阴性，EPS镜检白细胞数≤10个/HP，卵磷脂小体≤++～+++。

Ⅲ-b型组患者EPS中白细胞计数较对照组高，存在统计学差异（P＜0.05）；Ⅱ型组与Ⅲ-a型组患者EPS中白细胞计数均明显高于对照组和Ⅲ-b型组，差异均具统计学意义（P＜0.05），但这两组白细胞计数差异无统计学意义（P＞0.05）。

二、NIH--CCPPSSII症状评分

CP各组间NIH-CPSI症状评分差异无统计学意义，见表1。Ⅲ-b型组患者排尿症状评分较高，但并未与另外两组CP患者出现统计学差异，可能与病例数目较少有关。

表1 各组CP患者及对照组NIH--CPSI症状评分(±s）

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三、EEPPSS中各细胞因子含量及其相关性

（一）EPS中各细胞因子的含量

表2 各组CP患者及对照组EPS中细胞因子的含量（pg/ml）（s）

表2 各组CP患者及对照组EPS中细胞因子的含量（pg/ml）（s）

与对照组比较,*为P＜0.01,**为P＜0.05; 与Ⅲ-b型组比较,△为P＜0.01,△△为P＜0.05

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由表2可见CP各组和对照组EPS中细胞因子含量。

1. IL-17：Ⅱ型、Ⅲ-a型和Ⅲ-b型患者EPS中IL-17水平升高，与对照组比较差异均有统计学意义（P＜0.01)。Ⅱ型和Ⅲ-a型IL-17水平无统计学差异（P＞0.05），但两者与Ⅲ-b型IL-17水平存在统计学差异（P＜0.05）。IL-17水平与NIHCPSI呈正相关（r =0.462，P＜0.05）。

2. TNF-α：Ⅱ型和Ⅲ-a型患者EPS中TNF-α水平明显高于Ⅲ-b型和对照组，差异有统计学意义（P＜0.01）；而Ⅱ型和Ⅲ-a型组间比较及Ⅲ-b型与对照组之间比较，EPS中TNF-α水平差异均无统计学意义（P＞0.05）。

3. IL-8：Ⅱ型、Ш-a型CP患者前列腺液中IL-8水平明显高于对照组和Ш-b型CP患者，差异有统计学意义（P＜0.01）。

4. IL-6：Ⅱ型、Ⅲ-a型和Ⅲ-b型患者EPS中IL-6水平升高，与对照组差异有统计学意义（P＜0.01），但三组患者间EPS中IL-6水平无统计学差义（P＞0.05）。

5. IL-10：Ⅱ型和Ⅲ-a型患者EPS中IL-10水平与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05），但Ⅱ型和Ⅲ-a型组间及Ⅲ-b型与对照组之间EPS中的IL-10含量差异无统计学意义。EPS中lL-10水平和患者NIH-CPSI疼痛症状评分之间呈正相关性（r =0.549，P＜0.01）。

（二）各细胞因子之间的相关性

CP患者EPS中lL-10水平和患者NIH-CPSI疼痛症状评分之间呈正相关性（r =0.549，P＜0.01）。细胞因子相关性分析显示，lL-10与TNF-α之间存在正相关（r =0.26，P＜0.05）。IL-17与IL-10存在正相关（r =0.289，P＜0.05）。IL-17与IL-6存在正相关（r =0.26，P＜0.05）。

讨 论

TH17细胞是近年来新发现的一类CD4+T细胞，主要通过IL-17发挥生物学效应[6]。

本研究发现IL-17水平与NIH-CPSI评分呈正相关（r=0.462，P＜0.05）。有资料表明IL-17能够诱导IL-6、IL-1β、TNF-α等细胞因子产生；特别是IL-6，能够通过正反馈进一步促进TH17细胞分化。神经生长因子（NGF）与疼痛的严重程度相关，IL-6、IL-8在炎症过程中引导IL-10的表达，IL-10的表达增高导致NGF表达增高，引起会阴区疼痛不适[7]。本研究也发现IL-10与CP患者的疼痛症状评分呈正相关（r =0.549，P＜0.01），提示检测患者IL-10的浓度可能成为一个判断CP疗效的指标，且针对IL-10的细胞因子阻断治疗也许能改善患者的疼痛症状[7]。

本研究显示IL-17、TNF-α、IL-8、IL-10、IL-6在Ⅱ型、Ⅲ-a型CP患者EPS中的表达，差异无统计学意义，推测Ⅱ型、Ⅲ-a型CP的病理改变和炎症反应可能相同，病因发病机制可能相似。事实上，部分诊断为Ⅲ-a型CP患者的发病可能与目前常规方法未能培养出或尚未被认识的微生物感染有关，对CP患者EPS和前列腺按摩后初始尿液中的内毒素水平测定或EPS中革蓝氏阴性菌16SrRNA的PCR的方法检测的研究结果也证实这一点[8]。临床上使用抗生素可使约40%的Ⅲ-a型CP患者症状得到缓解，间接说明感染在Ⅲ-a型CP发病中的作用。

Ⅲ-b型CP患者与对照组EPS中TNF-α、IL-8、IL-10水平差异无统计学意义，但与Ⅱ型、Ⅲ-a型CP患者差别有统计学意义，推测Ⅲ-a型、Ⅲ-b型CP可能是两种不同发病机制的疾病。Ⅲ-b型CP的前列腺的本身病变可能较小，相关症状可能主要是由于围绕膀胱颈部和前列腺尿道的肌肉张力增高或协调失调，精神异常及心里紧张引起自主神经功能紊乱，导致α-肾上腺素受体兴奋性升高，引起或加重膀胱及后尿道神经肌肉功能障碍，使排尿时前列腺部尿道压力增大，产生排尿异常、会阴部疼痛不适等症状，这些症状反过来又会加重患者的情绪反应，造成恶性循环。临床上使用α-肾上腺素受体阻滞剂、镇静剂或抗焦虑药物来治疗Ⅲ-b型CP，患者获得了良好的疗效，进一步说明精神心理因素、盆腔神经肌肉功能失调在Ⅲ-b型CP的病因中的作用[2,9]。本研究结果中Ⅲ-b型患者排尿症状评分较高进一步说明了这一点。

实验表明，通过可溶性IL-17R及特异性抑制剂阻断内源性IL-17的作用，可以减轻自身免疫、胶原或佐剂诱发关节炎的关节损伤程度，降低类风湿性关节炎滑膜及骨组织IL-6和I型胶原降解标志物（C-telopeptide）释放量[10-12]。K-阿片拮抗剂、环孢霉素A及甲基强的松龙对类风湿性关节炎有一定治疗作用，其中机制之一即为下调IL-17mRNA的表达[12]。故IL-17不仅是评价关节炎症状严重程度的一项指标，也是治疗关节炎新的突破口。由此，我们可以推断通过抑制IL-17的生成，中和IL-17或IL-17R，抑制IL-17作用于靶细胞所产生的致病物质等各种途径均可减轻IL-17对前列腺组织的病理作用，这对前列腺炎的治疗具有积极的意义。

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6 施沛青, 朱书, 钱友存. IL-17的信号传导及功能研究. 中国细胞生物学学报 2011; 33(4)∶ 345-357

7 Miller LJ, Fischer KA, Goralnick SJ, et a1. Interleukin-10 levels in seminal plasma∶ implications for chronic prostatitis chronic pelvic pain syndrome. J Urol 2002; 167(2 Pt 1)∶ 753-756

8 Hochreiter WW, Duncan JL. Schaeffer AJ. Evaluation of the bacterial fl ora of the prostate using a 16S rRNA gene based polymerase chain reaction. J Urol 2000; 163 (1)∶127-130

9 曹志彬. 细胞因子在慢性前列腺炎中的作用与调节. 中国男科学杂志 2013; 27(2)∶ 70-72

10 陈颖. Thl7细胞在炎性疾病中的作用. 国际检验医学杂志 2009; 30(12)∶ 1176-1177, 1180

11 Yamada H. Current perspectives on the role of IL-17 in autoimmune disease. J Infl amm Res 2010; 3∶ 33-44

12 Lubberts E. Th17 cytokines and arthritis. Semin Immunopathol 2010; 32(1)∶ 43-53

（2013-09-12收稿）

Correlation analysis of IL-17 expression and TNF-α, IL-8, IL-6, IL-10 in EPS of patients with chronic prostatitis＊

Cao Zhibin1, Wang Yuantian2, Xue Wei2, Zheng Guanzhong1, Huang Xuyuan2, Huang Yiran2**
1. Department of Urology, Jia-Ding District Center Hospital, Shanghai 201800, China 2. Department of Urology, Renji Hospital, School of Medicine, Shanghai Jiaotong University

ObjectiveeTo determine the levels of IL-17, TNF-α, IL-8, IL-6, IL-10 in prostatic secretions of different types patients with chronic prostatitis and analyze their relevance, as well as better understand the role of IL-17 in the development of chronic prostatitis.Metthhooddssa total of 110 patients with chronic prostatitis were classifi ed by NIH prostatitis diagnostic criteria including urine routine, routine examination of the prostatic secretions, two glasses of urine culture, and the NIH-CPSI score. The levels of IL-17, TNF-α, IL-8, IL-6 and IL-10 were detected by double antibody sandwich ELISA assay in prostatic secretions of all patients and 30 normal controls. Data analysis was performed by SPSS statistical software.RessuullttssThe levels of IL-17 in TypeⅡ, Ⅲ-a-and Ⅲ-b-type CP patients were signifi cantly higher than those of the control group (P＜0.01); There was no statistical difference in IL-17 level betweenⅡ-and Ⅲ-a type (P＞0.05); but both groups had signifi cant difference with Ⅲ-b-type in IL-17 level (P＜0.05). IL-17 level was positively correlated with NIH-CPSI score (r =0.462, P＜0.05; r =0.571, P＜0.01), IL-10 (r =0.289, P＜0.05), and IL-6(r=0.26, P＜0.05).ConcluussiioonnThe levels of IL-17 in patients with chronic prostatitis suggests that it may be involved in prostate infl ammation.IL-17 is not only the evaluation marker for the severity of chronic prostatitis, but also a new treatment target for chronic prostatitis.

∶ Huang Yiran, E-mail∶ hyrrenji2@yahoo.com.cn

R 697.33

资助∶ 嘉定区卫生系统科研项目（NO.KYXM2010-12-04）；上海市科委科研计划项目资助（编号09411950300）

**通讯作者, E-mail∶ hyrrenji2@yahoo.com.cn

ddooii∶10.3969/j.issn.1008-0848.2014.02.013