复方葛根片中4种有效成分的薄层色谱法鉴定

2014-04-21贾永慧于燕莉范云飞

实用医药杂志 2014年6期

贾永慧，于燕莉，范云飞

复方葛根片为笔者所在医院传统制剂，在医院临床应用已30余年，2002年被《中国人民解放军医疗机构制剂规范（2002年版）》增补本收编。由葛根、丹参、茵陈、延胡索四味药材组合而成，具有活血化瘀、行气止痛、生津养心的功效，临床用于治疗冠心病、心绞痛和心肌梗死［1］。为了更好地控制该药的质量，笔者在原质量标准基础上，用薄层色谱方法对方中四味药材葛根、丹参、茵陈、延胡索均进行了鉴定。

1 仪器与试药

1.1 仪器电子天平（BS223S型），紫外透射反射分析仪（ZF－A型），超声清洗器（AS－3120）。

1.2 试药复方葛根片（济南军区总医院制剂室提供，批号：20110330，20110526）；葛根素对照品购自中国药品生物制品检定研究院，批号：110752－200511；丹参酮IIA对照品购自中国药品生物制品检定研究院，批号：110766－200112；绿原酸对照品由中国药品生物制品检定所提供，批号：110753－200413；四氢帕马丁对照品由中国药品生物制品检定所提供，批号：110726－200409；氢氧化钠、薄层层析硅胶、碘、95%乙醇、纯化水、甲醇、醋酸丁酯、甲酸、乙醚、乙酸乙酯、石油醚（60～90℃）、浓氨试液、甲苯、丙酮、三氯甲烷，上述所用液体试剂除色谱纯甲醇、化学纯甲苯外，其余均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 性状该品为浅棕色片，气微香，味苦，微辛凉。

2.2 薄层鉴别鉴别方法主要参照2010年版《中国药典》（一部）项下的鉴别方法对葛根、丹参、茵陈、延胡索进行薄层鉴别从而进行定性分析。

2.2.1 葛根的薄层鉴别［2，3］分别取批号为 20110330和20110526的复方葛根片内容物各2 g，研成细粉，分别加甲醇10 ml，放置2 h，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5 ml使溶解，作为供试品溶液1及供试品溶液2。另按处方比例称取除去葛根的其他中药，按复方葛根片的制备工艺制成阴性对照样品，然后按制备供试品溶液的方法制成阴性对照溶液［4］。再取葛根素对照品，加甲醇制成1 mg／ml的溶液，作为对照品溶液。参照2010年版《中国药典》（一部）附录相关薄层试验方法进行测定，分别吸取10 μl供试品溶液1、供试品溶液2、对照品溶液及阴性对照溶液，滴于同一硅胶G薄层板上，使成条状，以三氯甲烷－甲醇－水（7∶2.5∶0.25）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯（365 nm）下检视。在于对照品色谱斑点相应的位置上，供试品1与供试品2的色谱显相同颜色的荧光斑点，而阴性对照色谱相应的位置上无斑点且无干扰，见图1。

2.2.2 丹参的薄层鉴别［2］分别取批号为20110330和20110526的复方葛根片内容物1.5 g，分别加乙醚7.5 ml，振摇，放置1 h，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1 ml使溶解，作为供试品溶液1及供试品溶液2。另按处方比例称取除去丹参的其他中药，按复方葛根片的制备工艺制成阴性对照样品，然后按制备供试品溶液的方法制成阴性对照溶液［4］。再取丹参酮IIA对照品，加乙酸乙酯制成2 mg／ml的溶液，作为对照品溶液。参照2010年版《中国药典》（一部）附录相关薄层试验方法进行测定，分别吸取5 μl供试品溶液1、供试品溶液2、对照品溶液及阴性对照溶液，滴于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90℃）－乙酸乙酯（4∶1）为展开剂，展开，取出，晾干。在于对照品色谱相应的位置上，供试品1与供试品2的色谱显相同颜色的斑点，而阴性对照色谱相应的位置上无斑点且无干扰，见图2。

图1 葛根的薄层鉴定

图2 丹参的薄层鉴定

2.2.3 茵陈的薄层鉴定［2］取批号为20110330和20110526的复方葛根片内容物1.5 g，分别加50%甲醇20 ml，超声处理30 min，离心，取上清液作为供试品溶液1及供试品溶液2。另按处方比例称取除去茵陈的其他中药，按复方葛根片的制备工艺制成阴性对照样品，然后按制备供试品溶液的方法制成阴性对照溶液［4］。再取绿原酸对照品，加甲醇制成0.1 mg／ml的溶液，作为对照品溶液。参照2010年版《中国药典》（一部）附录相关薄层试验方法进行测定，分别吸取2 μl供试品溶液1、供试品溶液2、对照品溶液、阴性对照品溶液，滴于同一硅胶G薄层板上，以醋酸丁酯－甲酸－水（7∶2.5∶2.5）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯（365 nm）下检视。在于对照品色谱斑点相应的位置上，供试品1与供试品2的色谱显相同颜色的荧光斑点，而阴性对照色谱相应的位置上无斑点且无干扰，见图3。

2.2.4 延胡索的薄层鉴定［2］取批号为20110330和20110526的复方葛根片内容物1.5 g，分别加甲醇50 ml，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水10 ml使溶解，加浓氨试液调至碱性，用乙醚振摇提取3次，10 ml／次，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解作为供试品溶液1及供试品溶液2。另按处方比例称取除去延胡索的其他中药，按复方葛根片的制备工艺制成阴性对照样品，然后按制备供试品溶液的方法制成阴性对照溶液［4］。再取四氢帕马丁对照品，加甲醇制成0.5 mg／ml的溶液，作为对照品溶液。参照2010年版《中国药典》（一部）附录相关薄层试验方法进行测定，分别吸取2～3 μl供试品溶液1、供试品溶液2、对照品溶液、阴性对照溶液，滴于同一用1%NaOH溶液制备的硅胶G薄层板，以甲苯－丙酮（9θ2）为展开剂，展开，取出，晾干，置碘缸中约3 min后取出，挥尽板上吸附的碘后，置紫外灯（365 nm）下检视。在于对照品色谱斑点相应的位置上，供试品1与供试品2的色谱显相同颜色的荧光斑点，而阴性对照色谱相应的位置上无斑点且无干扰，见图4。