LC-MS/MS法测定动物源食品中呋喃它酮代谢物试验

2014-04-20陈国花

中国畜牧兽医文摘 2014年8期

陈国花

（山东诸城畜牧兽医局，山东诸城 262200）

硝基呋喃类药物（Nitrofurans）是一类合成的抗菌药物，它们作用于微生物酶系统，抑制乙酰辅酶A，干扰微生物糖类的代谢，从而起抑菌作用。目前，临床应用较多的药物包括：呋喃它酮、呋喃西林、呋喃妥因和呋喃唑酮。硝基呋喃类药物很不稳定，很容易生成代谢物，由于代谢物比较稳定且有致癌作用，所以，在动物源性食品安全的检测中需要检测硝基呋喃代谢物。本文介绍了呋喃它酮代谢物AMOZ残留量检测，并分析了不确定度情况。

1 检测方法

称取试样2 g（±0.01 g）于50 ml离心管中，加入10 ml 0.2 mol/L 盐酸溶液和100 μl0.1 mol/L衍生试剂（邻硝基苯甲醛），均质60 s，37 ℃恒温振荡水解16 h（过夜）。用氢氧化钠溶液和盐酸溶液调节pH值至7.0～7.5，3 000 r/min离心10 min。上清液移入50 ml离心管中，分别用10 ml乙酸乙酯提取两次，合并提取液，取10 ml提取液在50 ℃下用氮气吹干，残渣用0.1%甲酸水定容到1 ml后，再用3 ml乙腈饱和正己烷脱脂，下层水相过0.20 μm滤膜后，滤液供高效液相色谱-串联质谱测定。

2 不确定度的评定及合成

2.1 重复测量样品产生的相对不确定度Urel（A）

在2.00 g阴性样品中，加入0.1 ml 10 ng/ml的AMOZ制成加标样，添加水平为0.5 μg/kg。加标样10次重复测定的结果见表1。

2.2 标准溶液引入的相对不确定度u rel（B1）

标准溶液配制过程：分别准确称取5.00 mg、5.00 mg、6.60 mg 和7.45 mg的AOZ标准品，分别用甲醇溶解后定容到10 ml棕色容量瓶，该标准储备液浓度为500 μg /ml；分别吸取0.2 ml标准储备液至10 ml棕色容量瓶中，用甲醇定容，该混合标准中间液浓度为10 μg/ml。从混合标准中间液中吸取0.1～10 ml棕色容量瓶中，用甲醇定容，该混合标准工作液浓度为100 ng/ml，再用混合标准工作液配制成适宜浓度的校正曲线。

2.3 标准品称量引入的相对不确定度u rel（m）

用十万分之一的数显天平称量5.00mg、7.45 mg、6.60 mg 和5.00 mg的AMOZ标准品，其误差极限值为±0.01 mg，按照均匀分布则其不确定度为0.01/31/2＝0.005 8，则标准品称量引入的相对不确定度分别为：urel（m-AMOZ）＝0.005 8/5.00＝0.001 16；

2.4 配制标准溶液体积引入的相对不确定度u rel（V）

（1）用10 ml容量瓶定容标准储备液至10 ml，根据玻璃量器检定规程10 ml容量瓶的容量允差误差为±0.04 ml，按照均匀分布则u（V1）＝0.04/31/2＝0.023；

（2）用0.2 ml的刻度吸管吸取0.2 ml的标准储备液，根据玻璃量器检定规程0.2 ml刻度的容量允差误差为±0.006 ml，按照均匀分布则u（V2）＝0.006/31/2＝0.003；

（3）用10 ml容量瓶定容标准储备液至10 ml，根据玻璃量器检定规程10 ml容量瓶的容量允差误差为±0.04 ml，按照均匀分布则u（V3）＝0.04/31/2＝0.023；

（4）用0.2 ml的刻度吸管吸取0.1 ml的标准中间液，根据玻璃量器检定规程0.2 ml刻度的容量允差误差为±0.006 ml，按照均匀分布则u（V4）＝0.006/31/2＝0.003；

（5）用10 ml容量瓶定容标准储备液至10 ml，根据玻璃量器检定规程10 ml容量瓶的容量允差误差为±0.04 ml，按照均匀分布则u（V5）＝0.04/31/2＝0.023；

则配制标准溶液体积引入的相对不确定度分别为：

2.5 标准溶液引入的相对不确定度urel（2）的合成

根据上述urel（STD）、urel（m）、urel（V）三个项目分别进行合成，则标准溶液引入的相对不确定度分别为：urel（B1-AMOZ）＝（urel（STD）2＋＋urel（V）2）1/2＝（0.0022＋0.001162＋0.03382）1/2＝0.0339。

2.6 样品称量引入的相对不确定度urel（B2）

样品称取2 g，称样天平（赛多利斯2202S）称量不确定度主要为称量变动性，根据电子天平技术参数，其变动性标准标准偏差为0.01 g，实际操作过程中控制在0.02 g，按照均匀分布则其不确定度为为0.02/31/2＝0.011 5，则样品称量的相对不确定度为：urel（B2）＝0.011 5/2.00＝0.005 8。