Survivin、PCNA在子宫肌瘤中的表达及相关性研究

王 芳

（株洲市中心医院，湖南 株洲 412007）

Survivin、PCNA在子宫肌瘤中的表达及相关性研究

王 芳

（株洲市中心医院，湖南 株洲 412007）

目的探讨Survivin与PCNA在子宫肌瘤的表达和意义及相关性。方法用免疫组化S-P法检测30例正常子宫肌层组织和30例子宫肌瘤组织中Survivin与PCNA蛋白的表达情况。结果Survivin在子宫肌瘤组织中的阳性率明显高于正常子宫肌层组织，（χ2=7.576，P=0.006），PCNA在子宫肌瘤组织的阳性率明显高于正常子宫肌层组织（χ2=7.576，P=0.006），在子宫肌瘤组织Survivin与 PCNA的表达呈正相关性（r=0.779，P=0.000）。结论子宫肌瘤组织中Survivin与PCNA可能在细胞的增殖中发生协同作用，共同参与子宫肌瘤的发生发展。

子宫肌瘤；免疫组化；Survivin；PCNA

子宫肌瘤是女性生殖系统最常见的良性肿瘤，发病率逐年递增，其病因和发病机制尚不十分清楚。肿瘤的发生是细胞过度增殖的结果，国内外研究表明Survivin和PCNA参与多种肿瘤的发生发展。本研究采用免疫组化检测30例正常子宫肌层组织和30例子宫肌瘤组织中Survivin和PCNA表达情况，探讨Survivin和PCNA在子宫肌瘤组织发生发展中的作用与相互关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2012年1月至2012年11月在株洲市一医院因子宫肌瘤切除的子宫标本，肌瘤组织取自瘤心，正常子宫肌层组织取自肌瘤包膜外2 cm，标本经10%福尔马林固定，石蜡包埋，4 µm厚连续切片，全部研究对象术前6个月均未接受性激素治疗。

所有患者的标本均完整可靠，且手术前没有使用性激素治疗，无糖尿病、甲状腺功能亢进、甲状腺功能减低、卵巢肿块等。患者年龄最大为71岁、最小为39岁，平均年龄为（47.11±7.21）岁。

1.2 实验方法

免疫组化采用S-P法，兔抗人Survivin多克隆抗体（即用型），鼠抗人PCNA单克隆抗体（即用型）等购于福州迈新生物技术开发公司。将干净干燥的载玻片放入到多聚赖氨酸溶液内，干燥后备用。将包埋好的蜡块使用切片机做连续切片，并放在干净载玻片上，充分舒展开后捞取蜡片，常规做HE染色。脱蜡，蒸馏水清洗5 min，孵育以阻断内源性过氧化物酶活性，使用PBS冲洗后，再进行热修复抗原，PBS冲洗3次，加入封闭液后在室温下孵育，再加入一抗工作液、生物素话II抗、SABC，期间使用PBS冲洗，再加入DAB显色剂，随后使用蒸馏水做洗涤，苏木素复染，封片。

染色切片经显微镜观察，如果细胞质以及细胞核存在棕黄色颗粒，且分布情况呈弥漫片状，分布面积在10%以上，则确定为阳性。

1.3 统计学方法

此次临床研究主要采用SPSS12.0软件对数据进行统计和处理，计量资料采用t检验，计数资料采用卡方检验，以P＜0.05表示差异存在统计学意义。

2 结 果

2.1 Survivin在正常子宫肌层组织及子宫肌瘤组织中的表达

Survivin阳性染色主要定位于平滑肌细胞质，偶可见细胞质和细胞核同时着色（图1）。Survivin在正常子宫肌层组织的阳性率为30%（9/30），Survivin在子宫肌瘤组织的阳性率为66.7%，阳性率有统计学意义（χ2=7.576，P=0.006）。见表1。

图1 Survivin阳性染色

2.2 PCNA在正常子宫肌层组织及子宫肌瘤组织中的表达

在正常子宫肌层组织以及子宫肌瘤组织中，PCNA表达多在细胞核显示阳性染色（图2）。PCNA在正常子宫肌层组织的阳性率为20%（6/30），PCNA在子宫肌瘤组织的阳性率为83.3%（25/30），阳性率有统计学意义（χ2=7.576，P=0.006），见表1。

图2 PCNA阳性染色

表1 Survivin和PCNA在正常子宫肌层和子宫肌瘤组织中的表达

2.3 在子宫肌瘤组织中Survivin与PCNA的相关性Spearman等级相关分析

在子宫肌瘤中Survivin与PCNA的表达呈正相关（r=0.779，P=0.000）。

3 讨 论

3.1 Survivin在子宫肌瘤组织中的表达

对于Survivin而言，作为一种凋亡抑制蛋白，其在细胞的增殖控制以及凋亡上存在重要的作用。相关研究显示，Survivin通过对凋亡基因Caspase-3进行抑制，从而对细胞增殖和凋亡进行控制，其能够与Caspase-3进行结合，从而使其失去活性，并对其自发性激活进行抑制。而在细胞分裂以及增殖过程中，CDK4是一种细胞周期的依赖性激酶，Survivin能够与其进行结合，从而促进CD4/P21复合物释放P21，并联合线粒体Caspase对细胞凋亡进行抑制[1]。

Survivin主要在胚胎组织中表达，组织分布有较为明显的特征性，一般在人类、哺乳动物中的胚胎与发育胎儿组织中有较多的表达；在成人造血干细胞、分泌期子宫内膜、蜕膜组织、早期绒毛、生殖腺、胸腺、血管内皮细胞也会有微量表达。在分化成熟的组织中国，Survivin表达则并不明显，或者表达程度低，而在肿瘤组织内部，其表达水平则较高。可见，其表达水平与肿瘤的发展存在密切的联系[2,3]。

本实验中Survivin基因阳性率在子宫肌瘤组织中明显高于子宫肌层组织，可见，在子宫肌瘤中，Survivin的表达状态较高，对肌瘤细胞的凋亡进行抑制，从而增加肌瘤细胞的数量，导致病情发展[4,5]。

3.2 PCNA在正常子宫肌层组织及子宫肌瘤组织中的表达

PCNA在子宫肌瘤中的表达：PCNA是一种分子量为56 kd的蛋白，位于细胞核内，其含量在静止期（G0）细胞中很少，G1晚期开始增加，S期达高峰，G2期明显下降，是DNA聚合酶的辅助蛋白[6]，为DNA合成必须的原料，PCNA在核内的表达预示着细胞进入S期或G1晚期，因此，PCNA可作为细胞增殖的指标。PCNA在子宫肌瘤中的高表达提示子宫肌瘤细胞增殖活性高于正常子宫肌细胞，PCNA在子宫肌瘤的生长中起到一定作用。

经过分析可得，在子宫肌瘤中，Survivin以及PCNA蛋白在表达上存在正相关的关系，经猜测，可能是因为PCNA以及Survinvin在细胞增殖过程中的协同作用有关，二者在子宫肌瘤的病情发展中均存在参与行为。

[1] Shin S,Sunc BJ,Cho YS,et al.An anti-apoptotic protein human surviving is a direct inhibitor of caspase-3-7[J].Biochemistry,200 1,40(4):1117-1123.

[2] Suzuki A,Ito T,Kawano H,et al.Survivin initiates procapse 3/p21 complex formation as a result of interaction with Cdk4 to resist Fas-mediated cell death[J].Oncogene,2000,19(10):1346-1353.

[3] Chakravarti A,Noll E,Black PM,et al.Quantitaively determinedsurviving express levela are of prognostic value in human gliman[J].J Clin Oncol,2002,20(4):1063-1068.

[4] Koch CA,Vortmeyer AO,Diallo R,et al.Survivin:a novel neuroendocrine marker for pheochromocutoma[J].EUR J En,2002,146(3):381-388.

[5] 仇黎丽,徐青,徐昌芬,等.左炔诺孕酮下调survivin基因促进人子宫肌瘤细胞凋亡[J].基础医学与临床,2012,32(8):926-929.

[6] 李凯,刘凤英.交界性子宫平滑肌瘤临床病理特征及p53、PCNA表达的意义[J].中国医药导报,2011,8(9):16-19.

R737.33

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1671-8194（2014）14-0083-02