中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白和血清胱抑素C与妊娠高血压疾病的相关性研究

刘炳旭 魏殿军 吴璠

中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白和血清胱抑素C与妊娠高血压疾病的相关性研究

刘炳旭 魏殿军 吴璠

目的 检测妊娠高血压疾病（pregnancy-induced hypertension，PIH）患者血清中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（neutrophilgelatinase-associated lipocalin，NGAL）和血清胱抑素C（cystatin C，Cys-C），评价NGAL和Cys-C在PIH诊断中的临床价值。方法将80例PIH孕妇分为妊娠期高血压亚组、轻度子痫前期亚组、重度子痫前期亚组，子痫亚组，另同期选择40例健康孕妇作为正常对照组。两组受试者均检测血清NGAL、Cys-C和24 h尿蛋白定量水平，分析其与PIH及其严重程度的相关性。结果与正常对照组相比，PIH组24 h尿蛋白定量、血清Cys-C、NGAL水平均明显增高，差异均有统计学意义（P均＜0.05）。各组间24 h尿蛋白定量、血清Cys-C、NGAL水平比较，差异均具有统计学意义（P均＜0.05）。NGAL水平在正常对照组及PIH各亚组间两两比较，差异均具有统计学意义（P均＜0.05）。Cys-C水平在妊娠高血压亚组和子痫亚组间比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。24 h尿蛋白定量水平除在重度子痫前期亚组和子痫亚组间比较差异无统计学意义外，其他各组间两两比较，差异均有统计学意义（P均＜0.05）。血清NGAL、Cys-C水平均与PIH严重程度相关（r＝0.936，r＝0.763，P均＜0.05），受试者工作特征曲线结果显示，血清NGAL、Cys-C和24 h尿蛋白定量诊断PIH的曲线下面积分别为0.835、0.812、0.753。结论血清NGAL和Cys-C与PIH的发生及疾病严重程度高度相关，可用于PIH的早期诊断。

妊娠高血压；中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白；血清胱抑素C；24 h尿蛋白定量

妊娠高血压（pregnancy-induced hypertension syndrome，PIH）是指妊娠20w后出现的血压持续性升高伴蛋白尿、水肿以及全身炎症反应，产后即消失。血压升高和随机尿蛋白阳性是疾病发病初期的主要表现，蛋白尿进行性增加是PIH恶化的重要表现，有学者［1］指出蛋白尿合并高血压是致使胎儿发病率和病死率增加的常见病因。中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（neutrophilgelatinase-associated lipocalin，NGAL）是脂质运载蛋白家族的成员之一，于1993年由Kjeldsen等［2］在人类中性粒细胞中发现和分离出来，Cowland等［3］发现当炎症或肿瘤发生时组织内的NGAL迅速升高，NGAL是评价因炎症或肿瘤形成而导致内皮损伤严重程度的重要标志物。D＇Anna等［4］提出NGAL可能与子痫前期的发病有关，该研究认为，孕中期孕妇血清NGAL水平的升高是预测子痫前期发生的敏感指标。血清胱抑素C（cystatin C，Cys-C）是半胱氨酸蛋白酶抑制剂之一，是较理想的反映肾小球滤过率的指标［5］。有文献［6］报道，血Cys-C对高血压患者肾小球损伤的诊断具有重要意义，但其在PIH早期肾损害中的诊断价值尚有待研究。本文研究探讨NGAL和Cys-C在PIH中的诊断价值及其与疾病严重程度的相关性。

1 资料与方法

1.1 临床资料选择2013年2月-2013年8月我院产科收治入院的诊断为PIH的孕妇80例（PIH组），诊断标准参照《妇产科学》第7版［7］，其中妊娠期高血压亚组26例、轻度子痫前期亚组23例、重度子痫前期亚组19例，子痫亚组12例。平均年龄（30.09±4.52）岁。正常对照组40例，均为同期住院妊娠结局正常的孕妇。平均年龄（26.83±3.86）岁。两组均除外慢性高血压史、糖尿病史、肝肾疾病及免疫性疾病史。

1.2 标本采集受检对象均于入院24 h内清晨空腹抽取肘静脉血3ml，置于含有分离胶的真空采血管中混匀，以离心半径13.5 cm，3000 r／min离心10 min收集上层血清，置于无菌管中，-70°C冻存待测。入院第二天早上8点起收集24 h尿，于次日晨8点止，按每100ml尿加0.5ml二甲苯防腐，准确记录尿总量，混匀取5～10ml，以离心半径13.5 cm，3000 r／min离心10min，留取上清液上机检测。

1.3 仪器与试剂血清NGAL浓度检测使用NGALELISA试剂盒（美国TSZ公司），按试剂盒说明书操作（检测值范围：1～40μg／L）。Cys-C检测采用免疫比浊法，使用深圳迈瑞BS2000M全自动生化分析仪及其配套试剂进行测定。24 h尿蛋白定量采用西门子公司BnproSpec特种蛋白分析仪及原装配套试剂进行检测。

1.4 统计学处理采用SPSS 17.0统计软件对数据进行统计学分析，计量资料以表示，多组间均数比较采用单因素方差分析，采用Spearman相关性分析评价各指标与PIH严重程度的相关性，采用受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线评价各指标对PIH的诊断性能，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 PIH组和正常对照组24 h尿蛋白定量、血Cys-C、NGAL检测水平比较与正常对照组相比，PIH组24 h尿蛋白定量、血Cys-C、NGAL水平均明显增高，差异均有统计学意义（P均＜0.05），见表1。

表1 PIH组和正常对照组24 h尿蛋白定量、血Cys-C、NGAL检测水平比较（）

表1 PIH组和正常对照组24 h尿蛋白定量、血Cys-C、NGAL检测水平比较（）

NGAL（μg／L）正常对照组40 86.23±35.42 1.22±0.35 8.60±3.84 PIH组80 1172.44±297.20 1.47±0.36 18.07±9.91 t值-1.025 3.538 2.769 P值-0.001 0.001 0.007组别例数24 h尿蛋白定量（mg／24 h）Cys-C（mg／L）

2.2 正常对照组和PIH组各亚组间24 h尿蛋白定量、血Cys-C、NGAL检测水平比较各组间24 h尿蛋白定量、血Cys-C、NGAL检测水平比较，差异均具有统计学意义（P均＜0.05）。NGAL水平在正常对照组及PIH各亚组间两两比较，差异均具有统计学意义（P均＜0.05）。子痫亚组和重度子痫前期亚组的Cys-C水平均高于正常对照组，且子痫亚组高于妊娠高血压亚组，差异均具有统计学意义（P均＜0.05）。24 h尿蛋白定量水平除在重度子痫前期亚组和子痫亚组间比较差异无统计学意义外，其他各组间两两比较，差异均具有统计学意义（P均＜0.05），见表2。

2.3 血NGAL和Cys-C水平与PIH严重程度的相关性分析Spearman相关性分析结果显示，血NGAL和Cys-C均与PIH严重程度相关（r＝0.936，r＝0.763，P均＜0.05）。

2.4 ROC曲线评估NGAL、Cys-C、24 h尿蛋白定量诊断PIH的准确性NGAL诊断PIH的ROC曲线下面积为0.835（95%可信区间0.706～0.863），Cys-C诊断PIH的ROC曲线下面积为0.812（95%可信区间0.578～0.854），24 h尿蛋白定量诊断PIH的ROC曲线下面积为0.753（95%可信区间0.523～0.796）。NGAL和Cys-C ROC曲线下的面积大于24 h尿蛋白定量，且NGAL诊断PIH的准确性最好，见图1。

表2 正常对照组和PIH组各亚组间24 h尿蛋白定量、血Cys-C、NGAL检测水平比较（）

表2 正常对照组和PIH组各亚组间24 h尿蛋白定量、血Cys-C、NGAL检测水平比较（）

注：＊与正常对照组比较，P＜0.05；△与妊娠高血压亚组比较，P＜0.05；○与轻度子痫前期亚组比较，P＜0.05；＃与重度子痫前期亚组比较，P＜0.05

组别例数正常对照组40妊娠高血压亚组26轻度子痫前期亚组23重度子痫前期亚组19子痫亚组12 F值-P值-24 h尿蛋白定量（mg／24 h）Cys-C（mg／L）NGAL（μg／L）86.23±35.42 1.22±0.35 8.60±3.84 331.44±179.58＊1.34±0.39 8.81±3.80＊629.71±283.35＊△1.42±0.20 10.69±3.60＊△1834.82±312.06＊△○1.54±0.37＊15.29±5.91＊△○1893.79±413.81＊△○1.72±0.40＊△54.51±11.50＊△○＃359.136 3.814 30.656 0.000 0.013 0.000

图1 NGAL、Cys-C、24 h尿蛋白定量诊断PIH的ROC曲线

3 讨论

PIH是妊娠期特有的疾病。目前临床以血压及尿蛋白定性和24 h尿蛋白定量反映疾病的严重程度，随着疾病的进展，血压及24 h尿蛋白定量逐渐升高，24 h尿蛋白定量是反映PIH血管痉挛状态最常用的指标［8］。本文研究结果显示，PIH各亚组的24 h尿蛋白定量水平均高于正常对照组，PIH各亚组间除重度子痫前期亚组与子痫亚组间差异无统计学意义外，其他各组间两两比较，差异均有统计学意义（P均＜0.05），表明24 h尿蛋白定量水平与PIH的发生发展及严重程度相关。临床实践表明，24 h尿蛋白定量尿液收集过程繁琐，标本保存及尿总量计算存在一定的人为误差，早期的检测存在一定的滞后性，因此对肾损伤早期的检测因子NGAL和Cys-C在PIH早期表达的研究是非常有意义的。

NGAL为相对分子质量为25×103的多肽，主要存在于中性粒细胞中的过氧化物酶阴性颗粒中［9］。正常情况下，NGAL只在肾脏、肝脏、胃和结肠等组织中以极低水平表达。当炎症发生或上皮细胞受到损伤性刺激时，NGAL才被诱导而发生高表达［10］。有研究［11］证实，NGAL是早期检测肾功能衰竭和急性炎症的重要指标，具有高度的灵敏度和特异性。2008年Roberge等［12］通过前瞻性研究首次报道了子痫前期患者体内NGAL水平较正常妊娠妇女显著升高，血清NGAL可能参与子痫前期的发病过程，其机制可能与NGAL诱发的炎症反应和内皮细胞激活有关。另有研究［13］显示，尿中NGAL水平与PIH的发生发展相关，但其具体机制尚有待进一步研究。本文研究结果显示，PIH组孕妇血NGAL的水平明显高于正常孕妇。在PIH各亚组间随着疾病严重程度的增加NGAL水平亦呈明显增高趋势，且各组间两两比较，差异均有统计学意义，提示NGAL不仅参与PIH的病理生理过程，而且可能与其严重程度相关。

Cys-C是血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C大家族中的一员，是一种低分子量的非糖化蛋白，所有的有核细胞都能稳定地产生Cys-C。肾脏是清除Cys-C的唯一器官，Cys-C能够顺利通过肾小球滤过膜，在肾脏近曲小管处被重新吸收，不受肾外因素的影响。因此人体内血清Cys-C的水平由肾小球的滤过率所决定，且血清Cys-C是反映肾小球滤过率理想的生化指标［14，15］。本文研究结果显示，PIH组Cys-C水平高于正常对照组，且在PIH各亚组间其水平随疾病严重程度的增加而升高，提示Cys-C是一种较好的反映PIH早期肾损害的指标，用其诊断和长期监测妊娠期妇女特别是具有高危因素的孕妇肾功能损害，做到及早发现及早治疗，必要时适时终止妊娠，对降低孕妇和围产儿的病死率和提高产后母婴素质有极其重要的意义。

本文Spearman相关性分析结果显示，NGAL和Cys-C均与PIH的严重程度有较好的相关性，且NGAL、Cys-C和24 h尿蛋白定量用于诊断PIH的ROC曲线下面积分别为0.835、0.812和0.753，表明NGAL和Cys-C均可用于PIH的诊断，且二者对于PIH的诊断性能优于24 h尿蛋白定量。

通过以上研究表明，血清NGAL和Cys-C可以作为预测PIH疾病及其严重程度的重要指标。

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3 Cowland JB，Sorensen OE，Sehested M，et al.NeutroPhil，gelatinase-assoeiated，Lipocalin is up-regulated in human epithelial cells by IL-lb，butnotby TNF-a.JImmunol，2003，171：6630-6639.

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The correlation research of neutrophilgelatinase－associated lipocalin and serum cystatin C with pregnancy－induced hypertension

LIU Bing-xu，WEI Dian-jun，WU Fan.DepartmentofClinical Laboratory，the Second Hospitalof Tianjin MedicalUniversity，Tianjin 300211，China

ObjectiveTo detected the neutrophilgelatinase-associated lipocalin（NGAL）and serum cystatin C（Cys-C）in patientswith pregnancy-induced hypertension（PIH），and to evaluate their clinicalvalue in PIH diagnosis.Methods80 cases of PIH pregnantwomen were divided into gestational hypertension subgroup，mild preeclampsia subgroup，severe preeclampsia subgroup and eclampsia subgroup.40 cases of healthy pregnantwomen over the same period were collected as the normal controlgroup.The levels of serum NGAL，Cys-C and 24 h urine protein were detected and the resultswere analyzed statistically.ResultsThe levels of serum NGAL，Cys-C and 24 h urine protein in PIH group were allhigher than thatof controlgroup，and the differencesallhad statisticalsignificance（P all＜0.05）.Therewere statistical significance in the differencesofserum NGAL，Cys-Cand 24 h urine protein levelsamong all the groups（P all＜0.05）.Therewere statistical significance in the difference of serum NGAL level between each two groups（P all＜0.05）.Therewas statisticalsignificance in the difference ofCys-C levelbetween gestationalhypertension subgroup and eclampsia subgroup（P＜0.05）.Therewere statisticalsignificance in the differenceof24 h urine protein levelbetween each two groups except severe preeclampsia subgroup and eclampsia subgroup（P all＜0.05）.The levels of serum NGAL and Cys-Cwere all correlated with severity degree of PIH（r＝0.936，r＝0.763，P all＜0.05）.The area under receiver operating characteristic curve of serum NGAL，Cys-C and 24 h urine protein in diagnosis PIH were 0.835、0.812、0.753，respectively.ConclusionNGAL and Cys-C are correlated with the developmentand disease severity ofPIH，and can beused in theearly diagnosis.

Pregnancy-induced hypertension；Neutrophil gelatinase-associated lipocalin；Serum cystatin C；24 h urine protein

10.3969／j.issn.1674－7151.2014.04.006

2014-06-06）

（本文编辑：陈淑莲）

300211 天津市，天津医科大学第二医院检验科