密骨打老儿丸对 去卵巢骨 质 疏松 大鼠 腰 椎 和肾 脏维 生 素 D受 体 m RNA表达的影响

武密山， 赵素芝， 任立中， 王 茹， 白 霞， 韩红伟， 李 彬

（1.河北中医学院基础医学院方剂学教研室， 河北 石家庄 050200； 2.石家庄市桥东区胜北社区卫生服务中心， 河北 石家庄 050041； 3.河北医科大学第一医院骨科， 河北 石家庄 050031； 4.河北医科大学生物化学教研室，河北 石家庄 050017）

密骨打老儿丸对 去卵巢骨 质 疏松 大鼠 腰 椎 和肾 脏维 生 素 D受 体 m RNA表达的影响

武密山1， 赵素芝2*， 任立中3， 王 茹1， 白 霞1， 韩红伟1， 李 彬4

（1.河北中医学院基础医学院方剂学教研室， 河北 石家庄 050200； 2.石家庄市桥东区胜北社区卫生服务中心， 河北 石家庄 050041； 3.河北医科大学第一医院骨科， 河北 石家庄 050031； 4.河北医科大学生物化学教研室，河北 石家庄 050017）

目的 探讨密骨打老儿丸 (打老儿丸加淫羊藿、 骨碎补、 补骨脂、 菟丝子等) 对去卵巢骨质疏松大鼠生化指标的影响。 方法 72 只 SD雌性大鼠, 随机分为 6 组: 假手术组、 模型组、 维生素 D3(2 mg/kg) 组和密骨打老儿丸小、中、大剂量组。假手术组仅行假手术,其余5组分别行卵巢切除术。术后1周分别灌胃给予密骨打老儿丸和维生素 D33 个月 。 采用 酶 联 免疫吸附 法检测血清 1,25-二羟 基 维生素 D3(1,25(OH)2D3) 水 平。 测 定股 骨 骨 密 度, 采 用实时荧光 RT-PCR测定第 2 腰椎和肾脏组织维生素 D受体 (VDR)mRNA表达。 结果 与假手术组相比, 模型组股骨骨密度 、 血清和 肾 脏 1,25(OH)2D3、 腰椎和 肾 脏 组 织 VDR mRNA表 达 均 下 降 。 与 模 型 组 比 较, 密 骨 打 老 儿 丸 中 、大剂量组和维生素 D3组均可使股骨骨密度、 血清和肾脏 1,25(OH)2D3、 腰椎和肾脏组织 VDRmRNA表达增加。 结论 密骨打老儿丸和维生素 D3显著提高去卵巢大鼠腰椎和肾脏组织 VDR mRNA表达, 促进肠钙吸收与成骨细胞活性,增强骨质量。

骨质疏松症； 密骨打老儿丸； 骨密度； 1,25-二羟基维生素 D3； 维生素 D受体； 大鼠

骨质疏松症 (Osteoporosis) 是以骨量减少、骨组织显微结构退化 (松质骨骨小梁变细、 断裂、 数量减少,皮质骨多孔、变薄)为特征,以致骨的脆性增高及骨折危险性增加的一种全身骨病。前期研究表明,密骨打老儿丸在抑制骨丢失,改善骨密度,增强骨生物力学抗压性能方面有明显疗效［1］。 本实验采取切除卵巢建立骨质疏松模型,观察密骨打老儿丸对大鼠股骨骨密度、 血清和肾脏 1,25-二羟基维生素 D3［1,25(OH)2D3］ 水平、腰椎和肾脏维生素D受体 (vitamin D receptor,VDR)mRNA表达的 影响,探讨密骨打老儿丸防治去卵巢骨质疏松大鼠骨丢失和骨质量下降的作用机理。

1 材料与仪器

1.1 动物 3 月龄 SPF级雌性 SD大鼠共 72 只,体质量 (265 ±15)g, 实验动物由河北省实验动物 中 心 提 供 ［ 许 可 证 号:SCXK( 冀)2003-1-003］。

1.2 仪器与试剂 Lunar-XR型双能 X线骨密度测定仪 (美国 Lunar公司产品),ALCYON 300i型全自动生化仪 (美国 Abbott Laboratories公司产品), J 2—SH高速冰冻离心机 (中国杭州华亭公司产品),D-800 LS 智能药物溶出仪 (天津大学无线电公司产品),GENIOS 多功能酶标仪 (奥地利 TECAN公司),RG-3000 Real-time PCR仪 (澳 大 利亚 Corbett Research 公 司), 美 国 MIS—2000 SP型 3 Y显 微 图 像 分 析 仪,3 Y分 析 软 件 (Pro,Ver, 4.0),1,25(OH)2D3酶 联 免 疫 试 剂 盒 ( 英 国 IDS公司),SYBR Green Ⅰ 荧光染料 (美国 Biotium公司),Trizol总 RNA 提 取 试 剂 盒 (Takara公 司), cDNA逆转录试剂盒 (Fermentas公司),Taq DNA聚合酶、 dNTP(MBI公司)。 维生素 D滴剂 (厦门星鳖制药有限公司, 国药准字 H 35021450, 产品批号 2914002), 每粒含 维生素 D3400 单 位, 用双蒸水配 制 成 0.5 μg/100 mL溶液, 溶 液配制好后分装小试剂瓶内,避光低温保存备用。

1.3 中药制备 打老儿丸来源于 《万氏家抄方.卷四》, 组成是石菖蒲、 干山药、 川牛膝、远志、巴戟天、川续断、五味子、楮实子、杜仲、山萸肉、茯神、熟地黄、小茴香、肉苁蓉、枸杞子各等分。打老儿丸加上本课题前期研究具有促进成骨作用的 淫 羊 藿［2］、 骨 碎补［3］、补 骨 脂［4］、 菟 丝 子［1］各等分,组成密骨打老儿丸,饮片一次性购自石家庄市乐仁堂,按处方配伍后,加8倍量水,共同浸泡 40 min, 煮沸后文 火 煎 煮 60 min, 滤 出 药 液 ；药渣加 2 倍水量继续煎煮 40 min, 合并两次滤液,水浴浓缩, 每1 mL药 液 含 生 药 5.5 g, 相 当 于 临 床用量的 20 倍。 小剂量密骨打老儿丸灌胃剂量为1.25 m L/kg, 中 剂 量密骨打 老 儿丸 灌 胃 剂 量 为 2.5 mL/kg, 大剂量密骨打老儿丸灌胃剂量为 5mL/kg。

2 方法

2.1 实验造模与分组 健康 3 月龄 SD雌性大鼠72只, 随机分为 6 组: 假手术组、 模型组、 对照药物维生素 D3组和密骨打老儿丸小、 中、大剂量组, 每组 12只。将动物乙醚麻醉, 腰背部两侧剪毛,75%乙醇消毒, 假手术组大鼠从背部切口, 找到卵巢后,只切除少量脂肪组织后缝合；其他各组均参照本实验室的背驮式方法［2］从背侧切口摘除双侧卵巢,缝合伤口,然后涂以红霉素软膏抗感染,于卵巢切除 1周后,给大鼠灌胃给药:密骨打老儿丸 小 剂量组 大 鼠 灌 胃 给 予 1.25 m L/kg密 骨打老儿丸混悬液,密骨打老儿丸中剂量组大鼠灌胃给予 2.5mL/kg密骨打老儿丸混悬液, 密骨打老儿丸大剂 量 组大鼠灌胃 给 予 5 mL/kg密 骨 打 老 儿 丸混悬液,对照组大鼠灌胃给予对照药物维生素 D3混悬液 (2 mg/kg), 假 手 术 组 和 模 型 组 分别 灌 胃给予与密骨 打 老 儿丸大剂 量 组 等 体 积 (5 mL/kg)的蒸馏水,连续给药 3个月后,腹主动脉取血,离心,分离出血清；取肾脏同一部位小部分组织于冻存管中 -70 ℃保存；取大鼠的第 2 腰椎和股骨,小心剥离,去除表面软组织,保留完整骨膜,冷生理盐水纱布冷藏保存。

2.2 骨密度 （BMD） 测定 取右侧股骨, 按文献［8］ 分别测出股骨整体、股骨近端 (为股骨近侧干骺端 1/3), 股骨远端 (为股骨远侧干骺端 1/4)骨密度,最终以平均值计。

2.3 血清和肾脏组织 1，25（OH）2D3水平的测定将肾组织室温复融后用生理盐水洗净去杂、称定质量、 剪碎 至 10 mL的组织匀浆 器 中, 按 1 g组织加入 5 mL PBS 缓 冲 液 的 比 例 进 行 组 织 匀 浆, 将 组 织匀 浆液 移 入 5 mL离心管中 20 ℃ 5 000 r/min 离心15 min, 取 上 清 后 再 10 000 r/min 离 心 10 min 后取上清备用。 血清和肾脏组织 1,25(OH)2D3水平检测操作过程按照试剂盒说明书进行。

2.4 腰椎和肾脏组织 VDRmRNA表达的检测 引物由上海博亚生物工程公司依据 Genebank 数据库获得基因序列合成。 VDR引物序列: 上游 5′-GTG ACT TTG ACC ACG ATT TC-3′, 下 游 5′-ATC ATC TCC CTC CCTCTG GT-3′, 扩增片 段 长度为 285 bp。β-actin 引 物序列: 上 游 5′-TTG ATG TCA CGCGGC ACG TG-3′, 下游 5′-TGT CCC TGT ATG TTA CGC TG-3′, 扩增片段长度为 216 bp。

① 总 RNA提取: 采用 Trizol一步法分别提取腰椎、 肾脏组织中总 RNA, 紫外分光光度计测定总 RNA浓度,A260/A280均在 1.8 ～2.0。总 RNA浓度 =OD260值 ×8( μg/μL), 用 前 调 整 质 量 浓 度至1 μg/μL。 ② 在逆转录酶 M-MLV的作用下, 将mRNA 逆 转 录 成 cDNA 分 子, 反 应 体 系:H2O 5.5 μL,Oligo(dT 18)1.0 μL,tRNA 6.0 μL, Rnasin 0.5 μL,5 × buffer 4.0 μL,10 mmol/L dNTP 2.0 μL,RT ase 1.0 μL, 反 应 条 件:42 ℃ 60 min,95 ℃ 5 min。 ③ 荧 光定量 PCR反应体系: cDNA 1 μL,10 × buffer 5.0 μL,MgCl2(25 mmol/L)7.0 μL,10 mmol/L dNTP 1.0 μL, Primer F(20 pmol/μL)0.8 μL,Primer R(20 pmol/μL)0.8 μL,SYBR Green Ⅰ1 μL,Taq 酶(5 U/μL)0.5 μL。 反 应 条 件:94℃ 30 min, 94 ℃ 30 s、53 ℃ 30 s、 72 ℃ 30 s,50 个 循 环 。Cycle threshold(Ct) 值 的 计 算 分 析: 待 测 样 品 相对值 =2-ΔΔCt, ΔCtβ=Ct阴性对照 -Ct待测样品, ΔΔCt=ΔCtβ-actin-ΔCt待测样品。

3 结果

3.1 对股骨骨密度 （BMD）， 血清和肾脏组织1，25（OH）2D3水平的影响 见表 1。 与假手术组比较, 模 型 组 股 骨 BMD、 血 清 和 肾 脏 组 织1,25(OH)2D3水平降 低 (P＜0.01)。 与 模 型 组 比较,密骨打老儿丸中剂量组、密骨打老儿丸大剂量组、 维生素 D3组的股骨 BMD、血清和肾脏组织1,25(OH)2D3水平显 著 增 加 (P＜0.01)； 密 骨 打老儿丸小剂量组的股骨 BMD、 血清和肾脏组织1,25(OH)2D3水平无 显 著 增 加 (P＞0.05)。密 骨打老儿丸中、大剂量组与维生素 D3组之间比较无明显差异 (P＞0.05)。

3.2 对肾脏组织维生素 D受体 （VDR） mRNA表达的影响 见表 2。与假手术组比较,模型组肾脏组织 VDRmRNA表达降低 (P＜0.01)。 与模型组相比,密骨打老儿丸中剂量组、密骨打老儿丸大剂量组、 维生素 D3组的肾脏组织 VDR mRNA表达显著增加 (P＜0.01)；密骨打老儿丸小剂量组的肾脏组织 VDRmRNA表达无显著增加 (P＞0.05)。密骨打老儿丸中、 大剂量组与维生素 D3组之间比较无明显差异 (P＞0.05)。

表 1 密骨打老 儿 丸 对去卵 巢 骨质疏松 大 鼠 股骨骨 密 度 、 血清 和 肾脏组 织 1，25（OH）2D3水平的 影 响 （， n=12）Tab.1 Effects of M igu Dalao’ er Pills on BMD of femur and 1，25 （ OH）2D3contents of serum and renal of ovariectom ized osteoporosis rats（， n=12）

表 1 密骨打老 儿 丸 对去卵 巢 骨质疏松 大 鼠 股骨骨 密 度 、 血清 和 肾脏组 织 1，25（OH）2D3水平的 影 响 （， n=12）Tab.1 Effects of M igu Dalao’ er Pills on BMD of femur and 1，25 （ OH）2D3contents of serum and renal of ovariectom ized osteoporosis rats（， n=12）

注:与假手术组比较,**P ＜0.01； 与模型组比较,▲▲P＜0.01

组 别 骨密度/(g.cm-2) 1,25(OH)2D3血 清 /(pg.m L-1) 肾脏 组织 /(pg.g-1) 0.258 ±0.017 141.25 ±34.23 710.28 ±130.48模型组 0.223 ±0.016** 90.32 ±32.81** 523.42 ±128.09**维生素 D3组 0.251 ±0.017▲▲ 142.26 ±33.01▲▲ 725.21 ±131.52▲▲密骨打老儿丸小剂量组 0.237 ±0.019 122.07 ±30.12 601.28 ±129.73密骨打老儿丸中剂量组 0.249 ±0.017▲▲ 139.18 ±31.42▲▲ 714.32 ±128.16▲▲密骨打老儿丸大剂量组 0.253 ±0.018▲▲ 143.15 ±30.97▲▲ 726.38 ±131.78假手术组▲▲

表 2 密骨打老儿丸对去卵巢骨质疏松大鼠肾脏组织 VDR mRNA表达的影响 （， n=12）Tab.2 Effect of M igu Dalao’ er Pills on the expression of kidney vitam in D receptor m RNA of ovariectom ized osteoporosis rats（， n=12）

表 2 密骨打老儿丸对去卵巢骨质疏松大鼠肾脏组织 VDR mRNA表达的影响 （， n=12）Tab.2 Effect of M igu Dalao’ er Pills on the expression of kidney vitam in D receptor m RNA of ovariectom ized osteoporosis rats（， n=12）

注:与假手术组比较,**P ＜0.01； 与模型组比较,▲▲P ＜0.01

组 别 肾 脏组织 VDRmRNA Ct值 β-actin 荧光 定量 PCRCt值 -ΔΔCt 2-ΔΔCt28.97 ±1.42 28.23 ±1.46 0.79 ±0.15 1.82 ±0.17模型组 26.84 ±1.54 26.15 ±1.53 0.59 ±0.14 1.51 ±0.15**维生素 D3组 28.86 ±1.45 28.16 ±1.48 0.77 ±0.13 1.83 ±0.14▲▲密骨打老儿丸小剂量组 27.85 ±1.34 27.12 ±1.52 0.65 ±0.14 1.68 ±0.18密骨打老儿丸中剂量组 28.87 ±1.53 28.17 ±1.54 0.78 ±0.13 1.84 ±0.16▲▲密骨打老儿丸大剂量组 29.36 ±1.51 29.06 ±1.47 0.79 ±0.15 1.85 ±0.18假手术组▲▲

3.3 对腰椎维生素 D受体 （VDR） mRNA表达的影响 见表 3。与假手术组比较, 模型组腰椎VDRmRNA表达降低 (P＜0.01)。 与模型组相比,密骨打老儿丸中剂量组、密骨打老儿丸大剂量组、维生 素 D3组 的 腰 椎 VDR mRNA表 达 显 著 增 加(P＜0.01)；密骨打老儿丸小剂量组的腰椎 VDR mRNA表达无显著增加 (P＞0.05)。 密骨打老儿丸中、 大剂量组与维生素 D3组之间比较无明显差异 (P＞0.05)。

表3 密骨打老儿丸对去卵巢骨质疏松大鼠腰椎 VDR mRNA表达的影响 （， n=12）Tab.3 Effect of M igu Dalao’ er Pills on the expression of the second lumbar vitam in D receptor m RNA of ovariectom ized osteoporosis rats（， n=12）

表3 密骨打老儿丸对去卵巢骨质疏松大鼠腰椎 VDR mRNA表达的影响 （， n=12）Tab.3 Effect of M igu Dalao’ er Pills on the expression of the second lumbar vitam in D receptor m RNA of ovariectom ized osteoporosis rats（， n=12）

注:与假手术组比较,**P＜0.01； 与模型组比较,▲▲P ＜0.01

组 别 腰 椎 VDR mRNA Ct值 β-actin 荧光定量 PCR Ct值 -ΔΔCt 2-ΔΔCt22.98 ±1.24 22.13 ±1.16 0.67 ±0.15 1.61 ±0.13模型组 20.74 ±1.21 20.35 ±1.14 0.46 ±0.17 1.42 ±0.16**维生素 D3组 22.86 ±1.27 22.24 ±1.15 0.69 ±0.16 1.62 ±0.17▲▲密骨打老儿丸小剂量组 21.72 ±1.24 21.18 ±1.18 0.53 ±0.18 1.54 ±0.16密骨打老儿丸中剂量组 22.83 ±1.25 22.23 ±1.17 0.67 ±0.14 1.62 ±0.15▲▲密骨打老儿丸大剂量组 22.98 ±1.26 22.26 ±1.21 0.68 ±0.19 1.64 ±0.17假手术组▲▲

4 讨论

无论 是 通 过 小 肠 吸 收 的 维 生 素 D3(Vit D3),还是皮肤光合作用合成的 Vit D3, 首先必须通过特异的维 生 素 D 结 合 蛋 白 (vitamin D binding proteins,DBP) 转运到肝脏中, 在肝细胞微粒体和线粒 体 25-羟 化 酶 的 作 用 下,Vit D3脱 氢 生 成25(OH)D3。 随后进入肾脏, 在肾小管细胞线粒体 1-α羟化酶催化下,25(OH)D3转化成 Vit D的最终活性 形 式 1,25(OH)2D3, 成为具有 最 大 生 物活性的维生素 D代谢产物,然后转运到肠道、 肾脏、 骨等靶器官中,与靶组织中的维生素 D受体(VDR) 结合,VDR是介导1,25(OH)2D3发挥生物效应的核内生物大分子, 为类固醇激素/甲状腺激素受体超 家族的成员, 其与 1,25(OH)2D3激 素 信号分子在靶细胞结合后形成激素-受体复合物, 该复合物 再 与 视 黄 醛 x受 体 (Retinoid X receptor, RXR) 形成杂二聚体, 后与维生素 D反应元件(vitamin D responsive element,VDRE) 结合, 对 靶基因的转录和翻译进行调控,进而实现调节钙磷代谢的生物学功能。

1,25(OH)2D3是 重 要 的 骨 代 谢 调 节 激 素 (D激素), 是肾脏分泌的一种激素, 在骨发育、 分化、成熟过程中起着重要作用,其水平的表达和调节与甲状旁腺激素、钙磷浓度、胰岛素样生长因子-Ⅰ和降钙素水平等因素有关［9］。 1,25(OH)2D3在体内有多方面活性,如调节肾小管中的钙结合蛋白(Calbindin binding proteins,CaBP)［10］, 促 进 肾 调钙素结合 蛋 白 (Calmodulin binding proteins,CaMBPs) 的合成［11］, 调控Ⅰ型胶原、 金属蛋白酶、 骨唾液酸蛋白 (Bone sialoprotein,BSP) 等成 骨细胞外基 质 成 分［12-13］, 影 响 成 骨 细 胞 的 矿 化、 凋 亡等［14］。在缺乏 VitD和钙的老年患者中, 补充 Vit D和钙可改善神经肌肉的功能和协调性,增强肌肉的力量, 降低髋部和其他非脊 柱的骨折率［15］。 小肠黏膜上 皮 细胞中存在 VDR,1,25(OH)2D3通 过影响钙从小肠进入细胞外液的主动转运而实现对肠钙吸收的调节［16］。VDR是细胞核激素受体, 其不仅存在 于 成 骨 细 胞 (osteoblasts,OB), 也 存 在 于破骨细胞 (osteoclasts,OC),VDR 本 质 上反 映 了1,25(OH)2D3的功能, 位于骨组 织上的 VDR作用是双向的, 成骨细胞上的 VDR可调节位于破骨细胞上的 VDR,VDR是一种依赖配体的核转录因子,对骨的合成和分解代谢起着双向调节作用。

来源于 《万氏家抄方.卷四》的打老儿丸是抗衰老的著名方剂。研究证实,打老儿丸中地黄活性成分梓 醇 可 以 提 高 成 骨 细 胞 增 殖 和 分 化 能 力［5］,川续断的有效成分川续断皂苷 VI可诱导大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞方向分化［6］, 牛膝引经入肝肾［7］。 根据张元素 “运气不齐, 今古异轨,古方新病不相能也”, 本课题组认为:21 世纪的今天, 与内经时代蓝天白云的 “自然环境”、 上古天真淳朴的 “人文环境”、 和谐的 “社会环境” 有很大变化。 今日之 “天”, 很少出现内经时代之蓝天白云:工业文明使数千亿吨的烟尘废气涌入大气层,再加过度的森林砍伐,作为地球之 “肾” 的绿地沼泽枯涸,肾水不足,产生的温室效应,沙尘暴贼风数起,使清阳不能上升而为天,人处于天地“气交” 之中,就五行而言:水不足、火旺。 今日之 “地”: 在城市, 高楼林立, 大树减少, 在有限的园林空地上种植占地多的草坪,使土壤板化；在乡村,农作物庄稼多依靠化肥提高产量,农药杀虫,丢撒的农药渗满遍地,化工污浊垃圾横倾江河,作为万物之母的脾土失去健运,必然痰湿浊阴内生。就五行而言:土不足,金旺。今日之“人”: 职业升迁竞争剧烈, 争强好胜之心日盛,心理承受能力不堪重负,肝气郁结者日多,日久必致血瘀； 再加一有小病恙, 无暇服中药使 “火郁发之”,多服寒凉抑遏的抗生素对症治疗, 伤及阳气,使邪气内陷于里,与痰瘀毒邪纠缠互结,遂有锢结而不可解之势。就五行而言:木郁,肝阳不足。综观天、地、人呈现的五行太过与不及,本课题组在打老儿丸基础上加入具有促进成骨作用的淫羊藿［2］、 骨碎补［3］、 补骨脂［4］、 菟丝子各等分组成密骨打老儿丸,方中以川牛膝、巴戟天、川续断、楮实子、杜仲、山萸肉、熟地黄、肉苁蓉、枸杞子补肾水以降火；山药补脾,五味子敛肺；小茴香温肝,石菖蒲、远志、茯神养心安神,化痰行瘀。全方共奏补肾壮骨、健脾温肝、养心敛肺之功, 体现五脏并调。 本实验模型组 BMD、 血清和肾脏组 织 1,25(OH)2D3水 平 降 低, 腰 椎 和 肾 脏VDR mRNA表达降低, 表明大鼠腰椎和肾脏维生素D受体分泌减少。与模型组相比,密骨打老儿丸中剂量组、密骨打老儿丸大剂量组、 维生素 D3组的 BMD、 血 清 和 肾 脏 组 织 1,25(OH)2D3水 平升高、 腰椎和肾脏组织 VDRmRNA表达显著增加,表明密骨打老儿丸中、 大剂量组和活性 Vit D3组均能提高去卵巢骨质疏松骨密度, 通过1,25(OH)2D3与靶器官 (骨、 肾) 组织细胞核上的 VDR作用,对含有 VDRE基因的转录和翻译进行调控, 实现调节钙磷的代谢,详细的机理尚待进一步深入研究。

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Effect of M igu Dalao'er Pills on vitam in D receptor m RNA expression of lum bar vertebra and kidney in rat w ith osteoporosis caused by ovariectom y

WU Mi-shan1, ZHAO Su-zhi2*, REN Li-zhong3, WANG Ru1, BAI Xia1, HAN Hong-wei1, LIBin4
(1.Deptof Formulaology,BasicMedical College,HebeiUniversity of ChineseMedicine,Shijiazhuang 050091,China； 2.Qiaodong District Shengbei Community Health Centre of Shijiazhuang,Shijiazhuang 050041,China； 3.Dept of Orthopaedic,The First Hospital of HebeiMedical University,Shijiazhuang 050031,China； 4.Dept of Biochemistry,HebeiMedical University,Shijiazhuang 050017,China)

AIM To explore the influence of Migu Dalao'er Pills(Epimedii Herba,Drynariae Rhizoma, Psoraleae Fructus,Cuscutae Semen,etc.)on vitamin D receptormRNA expression of the second lumbar vertebra and kidney tissue in rats with osteoporosis caused by ovariectomy.METHODS Seventy-two Sprague Dawley female rats were randomly divided into six groups:the sham group,the model group,alfacalcidol treated group, and Migu Dalao'er Pills treated groups of low 1.25 mL/kg,middle and high doses.The sham group was only sham operated and the other five groups were ovariectomized respectively.One week after ovariectomy,the rats were consecutively given Migu Dalao'er Pills and alfacalcidol by intragastric administration for three months.ELISA was used to determine 1,25(OH)2D3contents of renal tissue and serum.The thighbone was taken out to determine bonemineral density(BMD).Real-time fluor-PCR was used for quantitative analysis of the vitamin D receptormRNA expression of second lumbar vertebra and renal tissue.RESULTS Compared with the sham group, BMD of femur,and 1,25(OH)2D3level and the expression of vitamin D receptormRNA significantly decreased in themodel group.Compared with the model group,middle and high doses of Migu Dalao'er Pills groups and the alfacalcidol group showed increased BMD,1,25(OH)2D3level,and vitamin D receptor mRNA expression. CONCLUSION Migu Dalao'er Pills could significantly stimulate vitamin D receptormRNA expression to accelerate intestinal calcium absorption and osteoblastactivity and reinforce the quality of bones.

osteroporosis； Migu Dalao'er Pills； bone mineral density(BMD) ； 1,25(OH)2D3； vitamin D receptor(VDR) ； rats

R285.5

:A

:1001-1528(2014)06-1133-06

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.06.005

2013-04-05

国家自然科学基金资助项目 (81073074,30472200)； 河北省自然科学基金项目 (H2013206005)； 河北省留学人员科技活动项目择优资助项目 (200828)

武密山 (1966—), 男, 博士, 教授, 硕士生导师, 研究方向: 补肾中药治疗骨质疏松症作用机制。 Tel:(0311)89926089, E-mail:sjzwms1966@hotmail.com

*通信作者: 赵素芝 (1966—), 女, 副主任医师, 研究方向: 中西医结合治疗风湿骨病。 Tel:(0311)86858146,E-mail:okgood888@ 163.com