自身抗体检测在早期诊断原发性胆汁性肝硬化的研究进展

门翼君，马顺高，秦红群

（1. 大理学院基础医学院，大理 671000；2. 云南省大理州人民医院检验科，大理 671000）

原发性胆汁性肝硬化（primary biliary cirrhosis, PBC）是一种病因不明，以肝内胆管上皮细胞进行损伤为主要特征的自身免疫性疾病。多见于中年女性。病理学特点为非化脓性的小叶间胆管炎、汇管区淋巴细胞聚集甚至形成淋巴滤泡，有非干酪样肉芽肿形成，最终小叶间胆管消失，可导致肝细胞破坏、肝纤维化、肝硬化和肝衰竭[1,2]。其临床诊断主要是根据临床表现，生化指标，自身抗体检测以及病理学检查。PBC患者的临床表现主要为疲乏无力，瘙痒，黄疸，其临床表现缺乏特异性。PBC诊断根据2009年欧洲肝病学会和美国肝病学会诊断标准[3,4]，符合以下3项中的至少2项：（1）碱性磷酸酶大于2倍正常值上限或γ-谷氨酰转移酶大于5倍正常值上限，（2）抗线粒体抗体或抗线粒体抗体M2亚型阳性，（3）特征性小胆管损害的病理学改变。病理学改变的确诊需要进行肝活检，其操作危险性也较高，所以病人对于病理活检接受程度较差，而在对没有肝脏疾病临床表现的PBC患者的长期随访观察显示，相关的自身抗体可在PBC开始出现临床症状的几年甚至十几年之前在患者的血清中被检测到[5]。故自身抗体检测在早期诊断PBC有着重要意义。本文就自身抗体检测在诊断PBC的研究进展作以综述。

1 抗核抗体（Antinuclear antibodies, ANA）的检测

ANA是一种广泛存在于血清中的抗体，可见于多种自身免疫性疾病，而在健康老年人中也可见低滴度抗核抗体[6]。ANA是诊断PBC的重要标志之一。ANA检测方法有很多种，医院中常用的方法为间接免疫荧光法，免疫印迹法和酶联免疫吸附法。作为PBC的初筛实验，我们一般采用间接免疫荧光法，间接免疫荧光法具有快速，价格较低等优势。通过间接免疫荧光法检测ANA在PBC患者中可出现多种荧光核型，如核膜型，核点型，细胞胞浆型和着丝点型。据国内刘红虹等[7]对123例PBC患者实验室检测指标进行了分析，54例ANA阳性的PBC患者中，有33例为核膜型，约占61%。血清AMA检测在PBC患者中的阳性率可以达到90%～95%，是诊断PBC的重要免疫学指标。然而仍有5%～10%的PBC患者因AMA检测阴性而被延误诊断与治疗。故相关的ANA检测对AMA阴性的PBC患者的诊断十分关键。

1.1 抗-核包膜蛋白gp210

抗gp210抗体是一种抗核包膜蛋白抗体，为诊断PBC的高度特异性抗体。抗gp210抗体在PBC患者的特异性可高达99% ，但敏感性仅为10%～41%[8]。抗gp210抗体的荧光染色型为核膜型。抗gp210抗体的靶抗原为位于核孔复合物上的210kD跨膜糖蛋白，其所识别的表位是gp210羧基末端上15个氨基酸残基。国外相关文献报道[9]，抗gp210抗体也存在于20%～47%的AMA阴性PBC患者中。这对于AMA阴性的PBC患者的早期诊断至关重要。相关文献表示，抗gp210抗体还可提示疾病预后[10]，其阳性的PBC患者与阴性者相比，更容易发展为肝衰竭，说明抗gp210抗体还可以作为PBC患者的独立预后指标，对患者的进展及预后的判断具有重要价值。

1.2 抗-可溶性酸性磷酸化核蛋白Sp100

spl00是一种核蛋白，是一种分子量100kDa的可溶性酸性磷酸化核蛋白质，点状分布于细胞核内。抗gp210抗体的荧光染色型为多核点模型。spl00抗体诊断PBC特异性较高，尤其在大部分AMA阴性PBC患者血清中可被检测到。国外相关研究[11,12]显示，抗核点抗体sp100不仅对PBC诊断特异性高，可达到为97%[13]，且对疾病监测、预后判断很有价值[14]，Muratori等[12]报道，老年人更容易表达spl00抗体。据国内潘盈等人的研究[15]表示，该抗体阳性的PBC患者出现肝硬化的几率显著增高，血清中胆红素升高，患者病情进展速度快，预后较差。说明抗SP100抗体对于PBC患者疾病的进展与预后有着十分重要的意义。然而抗sp100抗体对于诊断PBC的敏感性较低，我们可以进行多种自身抗体的联合检测，将抗gp120抗体与抗sp100抗体、AMA进行联合检测，从而同时提高诊断PBC的特异性和敏感性。

1.3 抗着丝点抗体（Anticentromere antibodies, ACA）

ACA的靶抗原是着丝点蛋白A、B和C，其中着丝点蛋白B是最主要的靶抗原。ACA不仅可见于硬皮病，其在PBC患者血清中也有较高的阳性率。史旭华等[16]人研究显示，ACA在PBC患者中的阳性率为53.5%，尤其是高滴度的ACA，可作为PBC的另外一种免疫学标志。Nakamura等[17]研究显示，ACA阳性PBC患者与ACA阴性患者相比。门静脉高压表现更为突出.。ACA阳性代表的门脉高压型PBC患者的临床特点为无进展性黄疸的静脉曲张。

1.4 其它抗核抗体

抗PML抗体是快速诊断急性早幼粒细胞白血病的重要免疫学标志，但也可见于PBC患者血清中。国外相关研究[18]显示，约19%的PBC患者血清中可检测到抗PML抗体，并且抗PML抗体和抗sp100抗体经常相伴出现。

抗酿酒酵母菌抗体（Anti-Saccharomyces cerevisiae Antibodies，ASCA）是针对酿酒酵母菌细胞壁甘露聚糖成分的一种抗体。既往研究报道显示，ASCA主要见于克罗恩病患者血清中，是克罗恩病患者血清中的特异性自身抗体[19]。该抗体还可见于乳糜泄[20]等多种自身免疫性疾病患者的血清中。ASCA分为IgA和IgG两种亚型，根据国内胡朝军等人的研究[21]显示ASCA-IgA在PBC患者中的阳性率为24.2%，ASCA-IgG在PBC患者中的阳性率为13.6%，在PBC患者ASCA不同亚型的阳性和阴性组与肝功能分析结果显示ASCA-IgA与PBC患者的病情发展密切相关，较ASCA-IgG在PBC中有更重要的临床意义。ASCA是PBC患者血清中存在的自身抗体，并且ASCA在中国人群的PBC患者中阳性率高于国外的文献报道。

抗p62抗体，抗板层素抗体与抗LBR抗体均属于抗核包膜蛋白抗体。抗p62抗体又称抗核心蛋白抗体，抗p62抗体的靶抗原是位于核孔复合物上的62 kDa跨膜蛋白，LBR抗体又称抗核板层B受体抗体，LBR抗体的靶抗原是由60个氨基酸组成的核内膜多肽蛋白，李永哲等[22]研究显示通过ELISA检测PBC患者血清结果显示，抗p62抗体与抗LBR抗体阳性率分别为30.9%和5.9%。但抗p62抗体与抗LBR抗体仅在PBC患者血清中检测出，其特异性为100%。其极高的特异性提示抗p62抗体与抗LBR抗体可能与疾病的病理生理过程有关。抗板层素抗体又称抗核纤层抗体，并不是PBC患者血清中特有的自身抗体，能在多种疾病患者血清中检测到如自身免疫性肝炎、系统性红斑狼疮。根据靶抗原不同分为抗板层素A抗体、抗板层素B、抗体和抗板层素C 抗体三种亚型。一般情况下，PBC患者血清中能检测到抗板层素抗体A和C，抗板层素抗体的临床意义有待于深入研究。

2 抗线粒体抗体（Antimitochondrial antibody, AMA）检测

AMA是一种以线粒体为靶抗原，无种属和器官特异性的自身抗体，主要针对线粒体两层生物膜蛋白。该抗体主要是IgG。线粒体存在于多种组织细胞胞浆中，故其荧光模型为胞浆颗粒型。线粒体的靶抗原位于线粒体内外膜，AMA作为一种自身抗体可进入细胞，直接与线粒体靶抗原发生中和作用，导致组织细胞的损伤[23]。1965 年Walker 等[24]首次采用间接免疫荧光法，发现PBC患者血清中存在一种物质，经鼠肝线粒体预处理后可阻断这种间接免疫荧光反应，证实该物是AMA。

AMA是诊断PBC最重要的特异性抗体，将近95%的PBC患者AMA阳性[25]。此抗体的出现可早于临床症状出现前若干年，具有十分重要的早期诊断价值。根据线粒体内外膜上能与AMA反应的9种自身抗原，将AMA分为9 种亚型（Ml～M9），不同的亚型其临床意义存在差异，与PBC诊断相关的是M2、M4、M8 和M9亚型。

2.1 AMA-M2抗体检测

AMA-M2是目前辅助诊断PBC主要检查项目。AMA-M2对PBC检测的敏感性达93%以上，特异性几乎为100%[26]。AMA-M2的靶抗原主要是线粒体内膜上的丙酮酸脱氢酶复合体（PDC-E2）、酮戊二酸脱氢酶复合体(OGDC-E2)和支链二氧酸脱氢酶复合体(BCOADC-E2)。

AMA-M2的主要检测方法有：间接免疫荧光法、免疫印迹法、酶联免疫吸附试验(ELISA)法，不同方法的敏感性和特异性不同。间接免疫荧光法是检测AMA-M2的经典检测方法，国内相关研究[26]表明根据其滴度水平越高，对PBC诊断更具意义，但AMA-M2抗体滴度水平与疾病严重程度之间无相关性。但是其结果判断主要依赖于检验人员的熟悉程度，尤其当AMA滴度较低时容易造成漏诊。而免疫印迹法与ELISA可将三个靶抗原PDC—E2、OGDC-E2和BCOADC-E2与天然M2抗原形成的复合体（M2-3E/BPO）作为检测抗原，国外相关文献[27]报道，对于3个靶抗原的检测重组成的三联体蛋白，使其诊断PBC的敏感性和特异性都会升高。82%的PBC患者血清皆与这个三联体抗原反应，在正常人群中却没有与该抗原反应的抗体[28]。这表明M2-3E 对PBC 的诊断有较强的特异性。

国内相关研究[29,30]表明，AMA-2，AMA-4，AMA-9联合检测在诊断PBC中的意义并不优于单独检测AMA-M2,而检测的成本明显增高。

2.2 AMA-M4抗体检测

AMA-M4所针对的抗原是亚硫酸氧化酶（PDC-E1），AMA-M4是分子量为52 kDa 的单抗原。统计既往国内文献[30～32]显示该抗体阳性率在42.6%～53.3%。现为AMA-M4是一个重要的判断病情程度的抗体，提示疾病处于进展期，或者是病人病情较重、预后不佳[33]。因此对M2亚型阳性患者可再做M4亚型检测，以作判断病情进展。

2.3 AMA-M8抗体检测

AMA-M8针对的抗原位于线粒体外膜。AMA-M8只与AMA-M2同时出现，但并非所有AMA-M2阳性时都出现ANAM8阳性。若AMA-M2，AMA-M4，AMA-M8的同时存在PBC患者血清中，可说明疾病处于活动期。

2.4 AMA-M9抗体检测

AMA-M9针对的抗原为糖原磷酸化酶(胞浆酶)，包含四个分子量为98kDa的亚单位[34]。欧蒙公司质控显示M9亚型抗体在PBC病人的阳性率为9%～37%。AMA-M9可于AMAM2阴性的PBC患者血清中检测呈阳性。Klein等[35]研究认为与AMA-M4相反，AMA-M9被认为是提示处于病情早期或病情预后乐观的抗体，AMA的分型能够提示预后。而Joshi等[36]则认为AMA的分型对于估计预后是否乐观没有帮助，Vleggaar等[37]也认为AMA的分型没有预后意义。

综上所述，自身抗体检测不仅在早期诊断PBC上有着重要意义，对PBC疾病进展，疾病分期，治疗以及预后也有着不可缺少的作用。随着方法的不断改进，研究的不断深入，越来越多新的与PBC相关的自身抗体会被发现，同时提高对于PBC的特异性和敏感性，从而成为新的免疫学指标。

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