免疫抑制法检测患者血清CK-MB假性升高原因分析

李瑞，许召杰，赵鼎，宋银森

(1、郑州市儿童医院检验科，河南 郑州 450053；2、郑州人民医院，河南 郑州 450000)

肌酸激酶CK是由M型和B型两种单型亚单位组成的二聚酶，同工酶CK-MB作为心肌酶的生化标志物，测定方法很，包括电泳法、离子交换层析法、免疫抑制法和放射免疫法。因免疫抑制法简便、快速、灵敏度高，而被普遍应用于临床检测，笔者在检测过程中，发现CK-MB活性常会出现假性增高，其活性大于等于总CK活性，甚至接近CK活性2倍的现象，给临床对AMI的诊断造成很大的困难甚至误诊。笔者就2011年10月至2013年7月两年内在某一综合医院就诊的患者血清CKMB/CK比值大于30%的114例患者结果进行了统计分析，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料 2011年10月至2013年7月在某一综合医院就诊患者中，血清CK-MB/CK比值>30%的患者114例，年龄9月～78岁，平均年龄48岁，男65名，女49例，其中恶性肿瘤患者51例，2型糖尿病患者13例，心脑血管疾病26例，类风湿性疾病患者4例，小儿支气管炎患者4例，其余患者17例。

1.2 仪器与试剂 ROCHE MODULAR全自动生化分析仪及配套试剂盒，CK－MB测定采用免疫抑制法；CK测定采用速率法。CK-MB参考范围为0～24U/L，CK参考范围为0～190U/L。

1.3 方法 早晨空腹促凝管抽取静脉血3ml，静置10min，离心分离血清上机检测。

1.4 数据处理 计算CK-MB/CK比值，活性及CKMB/CK比值以均值表示，按疾病类型分别统计CK-MB/CK>30%的例数和所占比例；以CK-MB/CK比值>1.7认为CK-MB活性接近CK活性2倍。

2 结果

2.1 血清CK-MB假性升高的疾病构成比 114例血清CK-MB假性升高患者中，恶性肿瘤51例，占44.7%；其次为心脑血管疾病26例，占22.8%；其余疾病17例，占总数的15%；在51例CK-MB假性升高的恶性肿瘤患者中，其中有37例患者CKMB>CK，甚至有5例患者CK-MB活性接近CK总活性的2倍，而在其他类型疾病中，未有患者CKMB活性接近CK总活性的2倍。

2.2 血清CK-MB假性升高患者的CK、CK-MB平均活性及CK-MB/CK平均比值 114例血清CKMB假性升高患者的CK、CK-MB平均活性和CKMB/CK平均比值，分别得到152.4U/L、156.8U/L和1.03。其中以恶性肿瘤最高，CK、CK-MB平均活性和CK-MB/CK平均比值分别为195.2U/L、238.9U/L和 1.22。

3 讨论

在114例CK-MB假性升高的患者血清中，恶性肿瘤占绝大多数，占总数的44.7%，与马骢[1]等报道一致，其中CK-MB>CK有37例，占了恶性肿瘤患者比例的72%；甚至有5例患者血清中，其CKMB活性接近总CK活性的2倍，而在其他CK-MB假性升高疾病中均未出现CK-MB活性到接近总CK活性2倍的病例，结果显示当CK-MB活性接近总CK活性的2倍时，应高度警惕恶性肿瘤的可能。其次为心脑血管疾病，占22.8%。

免疫抑制法测定血清CK-MB出现假性升高的原因，由于方法学原理，笔者认为有以下原因：(1)方法学的选择对检测结果的影响。首先，免疫抑制法测定CK-MB方法设计的前提是CK-BB忽略不计，其次是抗M抗体将M亚基完全抑制(ROCHE厂方标示CK-M亚基可以抑制至99.6%)，测B亚基活性，结果乘以2即得CK-MB活性，但如果存在 CK-BB就会使结果偏高，即测得CK-MB活性等于CK-MB加2CK-BB。由于结果要乘以2，这样2CK-BB加CK-MB大于CK-BB加CK-MB加CK-MM，即得出了CK-MB活性高于总CK活性的结果。所以，CK-MB高于CK是可能的，但高于2倍则不可能[2]。显而易见，凡可使CK-BB升高的疾病或抗M抗体质量均可使CKMB结果假性升高。

(2)巨CK干扰[3]。巨CK是巨分子酶，正常情况下相应的酶有着高分子团，不被抗CK-M抗血清所抑制，表现为血清中CK-MB占总CK活力50%以上，而CK活力正常、轻度或中度增高。巨CK大部分情况下是酶与免疫球蛋白的结合物，称巨肌酸激酶1(巨CK1)，通常免疫球蛋白是IgA和IgG，偶见IgM，当形成复合物时，CK-MB试剂中的抗M抗体不但不能抑制CK-M，而且因计算时结果乘以2，更加扩大了误差。而巨肌酸激酶2(巨CK2)是一种不正常低聚的线粒体CK(CK-MT)。CK-MT抗原性与CK-M不同，抗M抗体不能抑制CK-MT，故形成CK-MB的假性升高。

(3)CK-BB增高。在某些恶性肿瘤患者、脑神经损伤或严重平滑肌损伤患者血清中可有CK-BB增高，或发现巨CK2或巨CK1。此种情况下免疫抑制法测得的CK-MB由于CK－BB的异常而使结果假性升高，甚至大于总CK。

(4)样本溶血的影响。溶血样本因含高水平腺苷酸激酶，ATP和葡萄糖-6-磷酸，干扰分析，使CK-MB结果假性升高，这一分析在林其燧[4]等编写的书籍中有提及。

笔者认为在分析免疫抑制法检测CK-MB活性结果时，应注意以下几点[5]：(1)CK-MB<16U/L时属阴性，不用计算占总CK的比值；(2)CK-MB/CK比值参考范围在4%～25%，至多也不大于30%；(3)要按公式计算CK-MB占总CK的%值，并判断其影响因子；若CK-MB/CK比值大于>25%，表明存在着心肌梗死以外的因素，即说明有异常同工酶存在，包括CK-BB或巨CK1、CK2。(4)结合其他指标如肌钙蛋白(cTnI)、心电图等联合分析；(5)改用电泳法或质量法检测CK－MB进行相互验证。综上所述,应用免疫抑制法检测CK-MB,因血液中有巨CK、CK-MT等干扰导致结果偏高,存在一定的临床假阳性。因此,在发现用免疫抑制法检测CKMB活性高于CK总活性时,切不可轻易发出错误报告,建议用电泳法和CK-MB单克隆抗体免疫法,因与免疫抑制法有互补作用,可最终确定有无CKBB或巨CK的干扰,力争使检测结果达到“真值”,避免方法学原因导致检验差错[6]。另外，检验医师应与临床医生多沟通,消除临床医生对检验结果的误解,同时为其提供检验方面知识,避免造成错误诊断。

[1]马骢,李艳君,王海东,等.血清CK-MB/CK大于30%的病因分析[J].现代检验医学杂志,2003,18(3):63-64.

[2]王洋,褚福楼,王 欢,等.恶性肿瘤患者血清肌酸激酶同工酶高于肌酸激酶异常结果的探讨[J].中国民康医学,2012,24(4):385-386.

[3]王爱华,顾鹏飞,樊笑霞,等.巨分子酶在常规检验中的“干扰”及其鉴别方法[J].上海医学检验杂志,2002,17(5):274-276.

[4]林其燧,文庆成.临床化学诊断方法大全[M].北京:北京大学出版社,1990：750-754.

[5]韩志钧,黄志锋,卢业成,等.临床化学常用项目自动分析法[M].第3版.沈阳:辽宁科学技术出版社,2005:785-786.

[6]叶应妩,王毓三,申子瑜.全国临床检验操作规程[M].第3版.南京:东南大学出版社,2006:447.