酸枣的茎段培养

杨敏

摘 要：以野生酸枣的一年生幼嫩茎段为外植体，以基本培养基和生长调节剂为主要影响因素。通过正交试验筛选出酸枣茎段初代培养的优化培养基为：WPM+6-BA 2.0 mg/L +NAA 0.3 mg/L +IBA 0.2mg/L+蔗糖 30 g/L+琼脂 5.8 g/L，并获得无菌试管苗，这对酸枣的快繁有重要意义。

关键词：酸枣；茎段；组织培养

中图分类号：G632 文献标识码：B 文章编号：1002-7661（2014）02-393-01

酸枣，生长于山坡、山谷、沟边、路旁，延安酸枣产地范围为延安市宝塔区、吴旗、志丹等12个县（区）现辖行政区域及黄龙县石堡、范家卓子、界头庙、红石崖、白马滩、柏峪、三岔、崾等8个乡（镇）现辖行政区域[1]。

酸枣仁能养心、安神、敛汗生津；用于治疗神经衰弱、失眠、多梦、盗汗等症为传统镇静安神良药[2]；酸枣是作枣树砧木及育种的原始材料[3]。由于茎段培养是以芽生芽的方式进行繁殖，具有易成功、变异小、繁殖速度快等优点，成为植物组织培养中应用最普遍的方法[4]。

酸枣是一种野生状态极具开发潜力的果树资源，但存在发芽率低、长势弱的缺点。酸枣适应性强，耐旱，根系发达，是一种优良的水土保持树种[6]。酸枣的栽培化已成发展趋势，良种苗木快繁迫在眉睫。目前，对于酸枣的研究文献主要集中在栽培技术、病虫害防治、贮藏加工等应用技术方面，通过组培快繁优异种质，是达到产业化栽培生产的必由之路。在已有酸枣组培快繁研究中，已经实现了植株再生[7-9]。对枣的组培快繁已有较多报道，但是关于酸枣的组培快繁研究的还很少，而关于酸枣的茎段培养的更少[5-7]。

本试验主要以酸枣茎段为材料，通过组织培养技术，期望建立酸枣茎段的培养系统，为建立其组培快繁及育种奠定基础。

一、材料与方法

1、材料

于本年度3-4月份采回一年生带腋芽的酸枣茎段作为试验材料。

2、试验方法

（1）试验设计

按常规方法配制灭菌备用。正交设计表头见表1。

表1 L16（45）正交试验因素水平表头设计

水平 因素

基培（A） 6-BA（B，mg/l） NAA（C，mg/l） IBA（D，mg/l）

1 MS 0.5 0 0

2 CY4 1.0 0.2 0.2

3 WPM 1.5 0.3 0.3

4 MS 2.0 0.4 0.4

（2）外植体的选择和预处理 采集健康酸枣植株上一年生茎段，用流水冲洗10-15min，以0.1%的洗洁精浸泡30min后，用自来水反复冲洗干净，再用15%的巴氏消毒液浸泡15min后用蒸馏水冲洗3-4遍，每15-20个茎段放入盛有3/4V蒸馏水的小烧杯（V<500mL）中进行水培发芽，待水培芽长至2-3cm左右剪下作外植体，确保每个外植体带有一个腋芽。

（3）外植体的消毒与接种 设计两种消毒方法：（1） 75%C2H5OH 75s + 0.1% HgCl2 8min；（2） 75%C2H5OH 90s + 0.1% HgCl2 10min。再将外植体随机接种于各设计培养基中，每种处理接种50瓶。

（4）培养与调查方法 接种好的外植体然后放入培养室培养，培养温度为24-27℃，相对湿度为60%-70%，光照强度为1500-2000 Lx，光照时间为12 h.d-1。培养至25d调查其培养结果，以污染率、存活率、萌发率作为衡量指标。

二、结果与分析

1、不同的消毒处理对污染率和成活率的影响

通过对外植体进行不同消毒时间表明，用75%C2H5OH 75s + 0.1% HgCl2 8min的消毒方法极显著优于用75%C2H5OH 90s +0.1% HgCl210min的消毒方法，而且用前者的消毒方法使外植体的平均成活率（87.3%）极显著高于用后者的消毒方法的外植体的平均成活率（42.7%）。

2、不同类型的外植体对成活率的影响

通过对水培芽的茎段和无水培芽的茎段分别进行培养，水培芽的茎段的平均存活率（86%）显著高于无水培芽的茎段的存活率（30%），污染率（10%）和褐化率（4%）显著低于无水培芽茎段的污染率（46%）和褐化率（24%）。

3、各因素对茎段培养的影响

通过极差分析显示，各因子萌发率的极差（R）分别为基培24.5，6-BA 23，NAA 6.5，IBA 14.3，对茎段培养萌发率的影响主次顺序为：基本培养基-6-BA-IBA-NAA。

经过多重比较q检验分析筛选出酸枣茎段初代培养的优化培养基为：A3B4C3D2，即WPM+6-BA 2.0 mg/L +NAA 0.3 mg/L +IBA 0.2mg/L+蔗糖 30 g/L+琼脂5.8 g/L。

三、讨论

实验结果表明，通常选取三月份的带菌少的幼嫩茎段更适合酸枣快繁材料。用75%C2H5OH 75s+0.1%HgCl2 8min的消毒方法显著优于用75%C2H5OH 90s+0.1%HgCl210min的消毒方法，消毒时间不同结果也不同。

通过正交设计筛选出的酸枣茎段初代培养（见图1、2）的优化培养基为：WPM+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L +IBA 0.2mg/L+蔗糖 30 g/L+琼脂5.8 g/L。生长调节物质的种类和配比水平也与自身需求有关，所以选了6-BA 2.0mg/L+NAA0.3mg/L+IBA0.2mg/L的激素水平。

图1 WPM+6-BA1.5mg/L+IBA0.2mg/L下培养15天的酸枣茎段

图2 WPM+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L下培养15天的酸枣茎段

参考文献：

[1] 中国果业信息网. 2008，（25）：1.

[2] 四川医学院主编.中草药学.北京： 人民卫生出版社.