VEGF和P53在三阴性乳腺癌中的表达及临床意义

栗艳松

乳腺癌是当今世界上严重危害女性健康的恶性肿瘤之一，全世界每年新发现的病例超过100万，在我国乳腺癌发病率呈逐步上升趋势。其中三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer，TNBC)是指雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和人表皮生长因子受体2(Her-2)均为阴性的乳腺癌，约占全部腺癌的10%～20.8%［1］。三阴性乳腺癌与其他类型乳腺癌相比较，具有侵袭性强、预后差的特点［2，3］，并且缺乏内分泌及特异性靶向治疗靶点［4，5］。血管内皮生长因子(VEGF)是肿瘤血管生成的主要因子，很多研究已经证实高表达VEGF的乳腺癌患者生存期往往较短［6］。P53基因是目前肿瘤界研究最活跃的基因之一，它对于细胞周期以及细胞程序化死亡的调控起重要作用。P53基因突变与乳腺癌的发生发展密切相关。据报道在人类乳腺癌中P53基因的突变率为15%～60%［7］。本研究通过免疫组织化学的方法分析VEGF、P53在三阴性乳腺癌中的表达，了解它们与病理特征和预后的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集我院病理科2008年1月至2013年12月有完整标本档案的TNBC 67例和NTNBC 125例临床资料。所有病例未接受术前辅助化疗，患者均为女性。

1.2 检测方法 采用免疫组化SP法，第一抗体VEGF、P53及SP通用试剂盒均购自福州迈新生物技术开发有限公司，操作步骤按试剂盒说明书进行。用已知阳性切片作阳性对照，PBS缓冲液代替一抗作阴性对照。

1.3 阳性判定标准 阳性物质为棕黄色，ER、PR、P53阳性信号位于细胞核;Her-2按照乳腺癌Her-2检测指南(2009版)标准判定［8］，细胞膜阳性(+++)视为阳性。VEGF蛋白阳性染色主要位于细胞浆，胞浆棕黄色颗粒沉着为阳性细胞。阳性细胞＜30%为表达阴性，≥30%为表达阳性。

1.4 统计学分析 应用SPSS 13.0统计软件，计数资料采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 VEGF、P53在乳腺癌中的表达比较VEGF、P53在TNBC及NTNBC中阳性率差异有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

表1 VEGF、P53在乳腺癌中的表达比较 例(%)

2.2 VEGF、P53的表达与TNBC临床病理参数的关系VEGF、P53在TNBC中的表达与年龄、肿瘤大小、淋巴结转移、病理类型及病理学分级无关。见表2。

表2 VEGF、P53表达与TNBC临床病理参数的关系例(%)

2.3 VEGF、P53在TNBC中的表达P53阳性表达定位于细胞核，VEGF阳性表达定位于细胞浆。见图1。

图1 VEGF和P53在TNBC中的表达

3 讨论

肿瘤血管的形成受到多种细胞因子的调控，1989年发现的VEGF是最重要的促进肿瘤血管形成的因子［9］。VEGF是一种高度特异性有丝分裂原，能直接刺激新生血管的形成，被认为是最重要和最强的促血管生成因子，在肿瘤血管形成过程中发挥重要作用，也是重要的促淋巴管生成因子，促进肿瘤组织淋巴管的生成［10］。VEGF具有双重功能:一方面通过其受体直接刺激血管内皮细胞增殖，并诱导产生蛋白水解酶、间质胶原酶和组织因子促进血管形成;另一方面提高血管通透性，促进血浆蛋白、纤维蛋白原外渗导致肿瘤间水肿，引起细胞外基质改变，从而为肿瘤的浸润及转移提供合适的基础。大量研究表明VEGF在正常组织呈低水平表达，在多种恶性肿瘤中过度表达，在肿瘤发生、发展和转移过程中起重要作用［11］。本研究显示乳腺癌总体VEGF的阳性表达率为45.8%，其中TNBC的阳性表达率为70.1%，非三阴性乳腺癌的阳性表达率为32.8%，二者差异有统计学意义，与Linderholm等［12］的研究一结果一致。

P53基因位于17号染色体短臂上，由11个外显子和10个内含子组成，转录产生2.5kb mRNA，翻译生成的蛋白质由393个氨基酸残基组成，相对分子质量为53KD，故名P53。P53基因分为野生型P53基因和突变型P53基因。野生型P53基因是肿瘤抑制基因，它能保护细胞DNA免受射线和药物的袭击，并通过协同作用阻止细胞增殖、刺激DNA修复和促进凋亡细胞的死亡以起到保护作用。野生型P53蛋白的半衰期很短，浓度很低，难以测出。突变型P53蛋白则半衰期延长，浓度增加，可用免疫组织化学方法测出。因此，一般测出的P53是突变型P53，P53阳性者预后较差［13］。研究显示50%～70%的乳腺癌患者有突变型P53蛋白的表达［14］。本研究结果显示，P53在TNBC组中的阳性率为67.2%，在NTNBC组中的阳性率为47.2%，二者差异有统计学意义，提示TNBC具有更强的增殖活性，分化更差，侵袭性更强。

总之，本研究显示VEGF、P53在TNBC中过表达，联合检测VEGF、P53免疫组化情况对乳腺癌的恶性程度、肿瘤的增殖能力具有重要意义，可以做为判断TNBC预后的重要指标。

1 Bauer KR，Brown M，Gress RD，et al.Descriptive analysis of estrogen receptor(ER)-negative，progesterone receptor(PR)-negative，and HER2-negative invasive breast cancer，the so-called triple-negative phenotype:a population-based syudy from the California cancer Registry.Canaer，2007，109:1721-1728.

2 张晓娟，栗红蕊，崔岩，等.重组人生长激素对人乳腺癌细胞生长的影响及机制的研究.中国全科医学，2013，16:2012-2014，2018.

3 Dent R，Trudeau M，Pritchard KI，et al.Triple-negative breast cancer:clinical features and patterns of recurrence.Clin Cancer Res，2007，13:4 429-4 434.

4 Cleator S，Heller W，Coombes RC.Triple-negative breast cancer:therapeutic options.Lancet Oncol，2007，8:235-244.

5 Rakaha EA，El-Sayed ME，Gteen AR，et al.Prognostic markers in Triplenegative breast cancer.Lancet Oncol，2007，109:25-32.

6 Shivakumar S，Prabhakar BT，Jayashree K，et al.Evaluation of serum vascular endothelial growth factor(VEGF)and microvessel density(MVD)as prognostic indicators in carcinoma brest.J Cancer Res Clin Oncol，2009，135:627-636.

7 肖晓光，王晶，刘新元.应用PCR-SSCP法检测乳腺癌患者血中P53基因突变.大连医科大学学报，2006，28:414-416.

8 乳腺癌Her-2检测脂南(2009版)编写组.乳腺癌Her-2检测脂南(2009版).中华病理学杂志，2009，38:836-840.

9 Hicklin DJ，Ellis LM.Role of the vascular endothelial growth factor pathway in tumor growth and angiogenesis.J Clin Oncol，2005，23:1011-1027.

10 Hirakawa S，Brown LF，Kodama S，et al.VEGF-C-induced lymphangiogenes is in sentinel lymph nodes promotes tumor metastasis to dist ant sites.Blood，2007，109:1010-1017.

11 Sharma G，Mirza S，Parshad R，et al.Clinical significance of Maspin promoter methylation and loss of its protein expression in invasive ductal breast carcinoma:correlation with VEGF-A and MTAL expression.Tumour Biol，2011，32:23-32.

12 Linderholm BK，Hellborg H，Johansson U，et al.Significantly higher levels of vascular endothelial growth factor(VEGF)and shorter survival times for patients with primary operable triple-negative breast cancer.Ann Oncol，2009，20:1639-1646.

13 王玉，王晋芬.ER、PR、Ki-67、P53在乳腺癌中表达的相关分析及临术意义.山西医药杂志，2008，37:320-321.

14 张雁瑞，黄犁，姜辉，等.P53在三阴性乳腺癌中的表达及其意义.中国医药导报，2012，9:24-25.