口腔鳞癌患者Ezrin蛋白与CD44v6的表达及临床意义＊

徐 清 周静萍 柳 海

（皖南医学院口腔医学院，安徽芜湖241002）

口腔鳞癌居口腔恶性肿瘤之首，病死率高，易转移导致患者死亡。Ezrin蛋白是肿瘤转移研究中新发现的一个相关因子，可调控细胞生长、抗细胞凋亡、促细胞增殖，激活后参与肿瘤细胞的运动、迁移和黏附，在肿瘤生发和转移中扮演重要角色[1]。CD44v6是细胞表面黏附分子CD44的变异体，参与细胞特异性粘连，可增强肿瘤细胞的迁移和运动能力，促进肿瘤扩散和转移。本文采用SP法分别检测口腔鳞癌中Ezrin蛋白和CD44v6的表达，探讨两者的相关性及临床意义。

1 资料和方法

1.1 标本

口腔鳞癌39例，女17例，男22例，≥60岁23例，＜60岁16例，淋巴结转移16例，无淋巴结转移23例，病理分级Ⅰ级17例、Ⅱ级14例、Ⅲ级8例。另取来自非肿瘤患者手术边缘28例正常口腔黏膜标本切片。所用病例切片随机取自附属医院近5年的口腔鳞癌手术切除标本。

1.2 试剂

S－P超敏试剂盒（鼠／兔）、DAB显色剂、鼠抗人Ezrin蛋白免疫组化单克隆抗体，均购自福建迈新生物技术开发公司；兔抗人CD44v6多克隆抗体，购自武汉博士德生物工程有限公司。

1.3 检测指标

运用免疫组织化学法对所有切片染色，每组染色设阳、阴性对照，综合阳性细胞率和染色强度的判定，检测Ezrin蛋白和CD44v6的表达。

1.4 结果判定

染色结果经2位病理科医师行双盲阅片。每张切片按Kim等[2]半定量法对阳性细胞数和染色强度进行综合评分。阳性细胞数评分：0分（无阳性细胞）；1分（阳性细胞数≤1／3）；2分（阳性细胞数占1／3～2／3）；3分（阳性细胞数≥2／3）。染色强度评分：0分（不着色）、1分（浅黄色）、2分（棕黄色）、3分（棕褐色）；将阳性细胞数和染色强度的评数相加算出总分，总分≥2分为阳性，分值2～4分是低表达（＋），分值5～6分是高表达（⧺）。低表达（＋）、高表达（⧺）均列入阳性组。

1.5 统计学方法

应用SPSS13.0统计软件进行分析。

2 结果

2.1 Ezrin蛋白和CD44v6分别在口腔鳞癌和正常口腔黏膜组织中的表达

Ezrin蛋白的阳性着色呈浅黄或棕黄色颗粒，见于细胞质和细胞膜内，在口腔鳞癌中的表达水平显著高于正常口腔黏膜组（P＜0.01）；CD44v6的阳性着色呈浅黄或棕黄色颗粒，见于细胞膜和细胞质，在口腔鳞癌中的表达水平高于正常口腔黏膜组（P＜0.05）。见表1。

表1 Ezrin蛋白和CD44v6在口腔鳞癌和正常口腔黏膜组织中的表达

2.2 口腔鳞癌中Ezrin蛋白、CD44v6的表达与临床参数之间的关系

口腔鳞癌中Ezrin蛋白的表达：与病理分级有关，病理分级越高表达水平就越高（P＜0.01）；与淋巴结转移有关，Ezrin蛋白表达水平在有淋巴结转移组高于在无淋巴结转移组（P＜0.01）；与患者的年龄、性别无关（P＜0.05）。口腔鳞癌中CD44v6的表达：与淋巴结转移有关，在有淋巴结转移组的表达水平高于无淋巴结转移组（P＜0.05）；与患者的年龄、性别、病理分级均无关（P＞0.05）。见表2、图1－4。

采用Fisher确切概率法。

表2 口腔鳞癌中Ezrin蛋白、CD44v6的表达与临床参数之间的关系（n，%）

图1 Ezrin在无淋巴结转移口腔鳞癌（SP×400）

图2 Ezrin在有淋巴结转移口腔鳞癌中的表达SP×400中的表达（SP×400）

图3 CD44V6在无淋巴结转移口腔鳞癌（SP×400）

图4 CD44V6在有淋巴结转移口腔鳞癌中的表达SP×400中的表达（SP×400）

2.3 Ezrin蛋白和CD44v6在口腔鳞癌中表达的相关性分析

经过Pearson相关分析，Ezrin蛋白和CD44v6在口腔鳞癌中的表达呈正相关（r＝0.626，P＜0.01）。见表3。

表3 Ezrin蛋白和CD44v6在口腔鳞癌中表达的相关性

3 讨论

口腔鳞癌易转移、预后差，患者5a生存率约50%，提高生存率、研究口腔鳞癌的转移是如今临床研究的关键[3]。

Ezrin蛋白是膜－细胞骨架连接蛋白，其在肿瘤细胞中发生亚细胞定位改变，之后产生信号转导和细胞黏附等功能改变，引起肿瘤转移。近年在胆管癌[4]、食管鳞癌[5]等研究中发现有Ezrin蛋白的异常表达。本文结果显示：Ezrin蛋白在正常口腔黏膜中不表达或显示为弱阳性，Ezrin蛋白在口腔鳞癌中表达显著增高（P＜0.01），并且越接近癌巢中心其表达越强，提示Ezrin蛋白可作为口腔鳞癌诊断的参考指标；Ezrin蛋白的表达水平随着口腔鳞癌病理分级的增高而增高（P＜0.01），提示其与口腔鳞癌的分化程度有关，当其表达越高，肿瘤恶性度就越高；Ezrin蛋白在有淋巴结转移的口腔鳞癌中表达水平明显高于无淋巴结转移组（P＜0.01），提示检测Ezrin蛋白可对口腔鳞癌的转移潜能进行评估。

CD44v6是最早被发现与肿瘤转移有关的CD44变异体，可使肿瘤细胞与宿主细胞及基质黏附，促进肿瘤扩散。近年研究发现，CD44v6表达异常与多种恶性肿瘤如食管癌、胃癌、乳腺癌等的发展和转移有关。本文结果显示：CD44v6在口腔鳞癌中的表达高于正常口腔黏膜（P＜0.05），提示CD44v6可能参与了口腔鳞癌的进展；口腔鳞癌中CD44v6的表达水平在有淋巴结转移者高于无淋巴结转移者（P＜0.05），提示CD44v6高表达的口腔鳞癌更容易发生淋巴结转移，患者预后较差，CD44v6高表达可作为判断患者预后不良的因素之一。

有研究发现，Ezrin蛋白与CD44v6连接，共同参与了肿瘤细胞的转移过程，尤其是Ezrin蛋白与CD44v6两者同时高表达时，常出现在肿瘤浸润和转移中。在结肠癌[6]中发现，CD44v6与Ezrin蛋白发生连接并且两者在淋巴结转移中有相互协同作用。本文结果显示：在口腔鳞癌中，Ezrin蛋白和CD44v6的表达之间呈显著正相关（r＝0.626，P＜0.01），提示两者具有协同作用共同参与了口腔鳞癌的发生和转移，当两者同时高表达时，预示着肿瘤的高侵袭性、高转移性，联合检测Ezrin蛋白和CD44v6的表达，有助于早期预测口腔鳞癌的转移情况。

本文结果显示Ezrin蛋白和CD44v6均与口腔鳞癌的生长和转移有关，且两者的阳性表达成正相关，两者均高表达的口腔鳞癌更易发生淋巴结转移。因此对Ezrin蛋白和CD44v6的联合检测可作为口腔鳞癌早期诊断及临床预后评估的有效指标。

[1]Moelatehey AI.Merlin and ERM proteins：unappreciated roles in cancer development[J].Cancer，2003，3（11）：877－884.

[2]Kim MS，Song WS，Cho WH，et al.Ezrin expression predicts survival in stageⅡB osteosarcomas[J].Clin Orthop Relat Res，2007，459（7）：229－236.

[3]Favier J，Plouin PF，Corvol P，et al.Angiogenesis and vascular architecture in pheochromocytomas：distinctive traits in malignant turmors[J].Am J Pathol，2002，161（4）：1235－1246.

[4]Zhang Y，Meng XL，Zhu LX，et al.Expression of ezrin and CD44v6in the extrahepatic cholangiocarcinoma and its relationship with cancerous invasion，metastasis and prognosis[J].Acta Universitatis Medicinalis Anhui，2009，44（1）：96－98.

[5]Liu J.Protein expression of Ezrin，E－cadherin，CD44v6in E－sophageal squamous cell carcinoma and prognostic value research[J].Jilin Medical Journal，2012，33（26）：5605－5607.

[6]Lu HQ，Zhen J.Ezrin Protein：Biological characteristic and its influence in tumor metastasis[J].Cytobiology Magazine，2005，27（3）：257－262.