杨梅色素苷的提取及抗氧化性研究

范　芳，陈媛嫔

(广东石油化工学院化学与生命科学学院,广东 茂名525000)

杨梅富含多种营养物质，具有抗氧化等多种特性。但杨梅在贮藏过程中常出现色泽变化，影响杨梅质量。杨梅色泽变化与花色素苷降解密切相关。杨梅色素苷作为一种天然色素，具有无毒无害等优点，具有抗过敏、抗病毒、抗炎、扩张血管等多种生理活性[1]，在杨梅果汁抗氧化方面起着重要作用，且在自然界中分布广泛，原料容易获得，近年来受到广泛关注。

作者在提取杨梅色素苷的基础上，重点研究杨梅色素苷的抗氧化能力，拟为天然色素的开发、杨梅色泽的控制、杨梅保健食品的开发提供理论依据。

1　实验

1.1　材料、试剂与仪器

杨梅，贵州省凯里市雷山县，市售。

工业乙醇，华中农业大学设备科；浓硫酸，信阳市化学试剂厂；邻苯三酚、盐酸、甲醇、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、邻二氮菲、铁氰化钾、三氯乙酸、氯化铁、硫酸亚铁、Tris、抗坏血酸、过氧化氢，国药集团化学试剂有限公司；以上试剂均为分析纯。

数显鼓风干燥箱，上海博讯实业有限公司医疗设备厂；分光光度计，上海精密科学仪器有限公司；电子天平，上海绿宇精密仪器制造有限公司；数显恒温水浴锅，金坛富华仪器有限公司；冰箱，海尔集团；冷冻离心机，上海诚铭有限公司；真空抽滤机，上海申胜生物技术有限公司。

1.2　方法

1.2.1杨梅色素苷的提取

分别采用浸提法、热煮法、粉碎法提取杨梅色素苷。

1)浸提法

取25 g冷冻杨梅果实解冻后，去核匀浆，用125 mL的1％盐酸多次浸提，直至果实无红色，然后用滤纸过滤提取液，于4 000 r·min-1离心10 min，取上清液。

2) 热煮法

取冷冻杨梅果实解冻去核后，将杨梅渣25 g加入125 mL经稀盐酸调制的pH值为3的40％乙醇水溶液中，在50 ℃下搅拌40 min，于4 000 r·min-1离心10 min，取上清液。

3)粉碎法

取25 g冷冻杨梅果实解冻去核后，加入125 mL蒸馏水，置于实验圆筒内，用实验压榨机粉碎样品，用滤纸过滤提取液，于4 000 r·min-1离心10 min，取上清液。

1.2.2最大吸收波长的确定

取1 mL浸提法提取液稀释至10 mL，在波长460～560 nm范围内测定吸光度，确定最大吸收波长。

1.2.3不同方法提取杨梅色素苷含量的比较

取浸提法、热煮法、粉碎法提取的杨梅色素苷提取液各1 mL，加水稀释至10 mL，在最大吸收波长处测定吸光度。吸光度值越大，表明色素苷含量越多。

1.2.4杨梅色素苷抗氧化性的测定

1.2.5杨梅色素苷与抗坏血酸还原力的比较

分别取0.25 mL浓度分别为10.0 mg·mL-1、12.0 mg·mL-1、18.0 mg·mL-1、24.0 mg·mL-1、30.0 mg·mL-1的抗坏血酸和杨梅色素苷提取液，加入2.5 mL 0.2 mol·L-1磷酸缓冲溶液(pH值6.6)和2.5 mL 1％铁氰化钾，在50 ℃下保温20 min，然后加入2.5 mL 10％的三氯乙酸、5 mL H2O和1 mL 0.1％氯化铁，于700 nm波长处测定吸光度。吸光度值越高，表明还原力越强[4]。每组实验测定3次，取平均值。

2　结果与讨论

2.1　杨梅色素苷最大吸收波长的确定(图1)

图1　杨梅色素苷在可见光区的吸收光谱

由图1可知，在波长为460～560 nm区间内，杨梅色素苷的吸光度随着波长的增大先增大后减小，在510 nm处达到最大值。因此，确定杨梅色素苷的最大吸收波长为510 nm。

2.2　不同方法提取杨梅色素苷含量的比较(图2)

图2　不同方法提取杨梅色素苷含量的比较

由于提取过程中的压力、温度、溶剂等因素的不同，使得不同提取方法得到的杨梅色素苷含量不同。由图2可知，浸提法提取的杨梅色素苷吸光度最大，在510 nm处测得的吸光度为0.198；其次是热煮法，吸光度为0.121；最小是粉碎法，吸光度为0.054。3种方法提取的杨梅色素苷含量大小为:浸提法>热煮法>粉碎法。

2.3　不同方法提取的杨梅色素苷对清除率的比较(图3)

图3　不同方法提取的杨梅色素苷对清除率的比较

2.4　不同方法提取的杨梅色素苷对·OH清除率的比较

·OH是已知的最强氧化剂，反应性极强，但作用半径小，仅能和附近的分子反应。邻二氮菲是一种杂环化合物，可与Fe2+螯合后在水溶液中呈红色，当其中的Fe2+被氧化成Fe3+后，其吸光度降低幅度与Fe2+的氧化量成正比，因而可以用来测定·OH的含量。不同方法提取的杨梅色素苷对·OH清除率的比较见图4。

图4　不同方法提取的杨梅色素苷对·OH清除率的比较

由图4 可知，3种方法提取的杨梅色素苷对·OH均有一定的清除作用，清除率大小为：浸提法>热煮法>粉碎法。

2.5　不同方法提取的杨梅色素苷还原力的比较(图5)

图5　不同方法提取的杨梅色素苷还原力的比较

由图5可知，3种方法提取的杨梅色素苷的还原力大小为：浸提法>热煮法>粉碎法。

2.6　不同浓度杨梅色素苷对的清除作用(图6)

图6　杨梅色素苷浓度对清除率的影响

2.7　杨梅色素苷与抗坏血酸还原力的比较(图7)

由图7可以看出，杨梅色素苷的吸光度显著高于抗坏血酸，说明其具有极强的还原力。并且杨梅色素苷的还原力具有浓度效应，浓度越大还原力越强。

一般来说，还原力和抗氧化能力存在着一定的协同作用[5]。Tanaka等[6]认为植物组织抗氧化能力是随着还原力的增强而提高的。本实验结果进一步证实了这一观点。

图7　杨梅色素苷与抗坏血酸还原力的比较

3　结论

(1)杨梅色素苷的最大吸收波长为510 nm。浸提法、热煮法、粉碎法等3种方法提取杨梅色素苷的含量大小依次为：浸提法>热煮法>粉碎法。

(3)杨梅色素苷与抗坏血酸的还原力都随浓度的增大而提高，且在相同浓度下，杨梅色素苷的还原力高于抗坏血酸。

杨梅色素苷的抗氧化能力较强，为天然抗氧化剂的很好材料，可成为天然色素与抗氧化剂结合的环保食材。

参考文献：

[1]胡子龙.用彝族杨梅酱消肿止痛[J].中国民族，2002，(2)：72.

[2]龚建武,王晓春.山楂水提液清除氧自由基作用的研究[J].实用预防医学，2005，12(3):568-569.

[3]金鸣，蔡亚欣，李金荣，等.邻二氮菲-Fe2+氧化法检测H2O2/Fe2+产生的羟自由基[J].生物化学与生物物理进展，1996，23(6):553-555.

[4]YEN G C,DUH P D.Antioxidative properties of methanolic extracts from peanut hulls[J].Journal of the American Oil Chemists′ Society，1993，70(4)：383-386.

[5]DUH P D,YEN G C.Antioxidative activity of three herbal water extracts[J].Food Chemistry,1997，60(4)：639-645.

[6]TANAKA M,KUEI C W,NAGASHIMA Y,et al.Application of antioxidative Maillard reaction products from histidine and glucose to sardine products[J].Nippon Suisan Gakkaishi,1988,54(8)：1409-1414.