人参皂苷Rd-羟丙基-β-环糊精包合物的制备和表征

郝秀华，姬海婷，杨孝来，陈玉玲，刘昕※

(1．吉林大学药学院，长春130021；2．甘肃省人民医院药剂科，兰州730000)

人参皂苷Rd(Ginsenoside Rd)是从人参和三七中提取出来的三萜皂苷类单体，是二者的主要活性成分之一[1]，对心脑血管系统、中枢神经系统等具有独特的保护作用[2]。但由于其在水中溶解度小、生物利用度低，一定程度上影响了人参皂苷Rd在临床上的应用[3]。羟丙基-β-环糊精是水溶性环糊精衍生物，具有水溶性好、安全无毒等优点[4]，本实验将人参皂苷Rd与羟丙基-β-环糊精包合可提高药物在水中溶解度，对人参皂苷Rd新剂型的研制和临床上应用具有重要参考价值。

1 仪器与材料

人参皂苷Rd(广东泰禾医药科技公司)，羟丙基-β-环糊精(山东新大精细化工有限公司)，乙腈、甲醇(色谱纯，江苏汉邦科技有限公司)，其余试剂为分析纯。

LC-20AT高效液相色谱仪、SPD-20A型紫外检测器(日本岛津公司)，BT125D电子天平(德国赛得利斯公司)，DF-101S集热式恒温加热磁力搅拌器(上海豫康科教仪器设备有限公司)，R-201旋转蒸发仪(上海申顺生物科技有限公司)，Christ ALPHA 1-4 LSC冷冻干燥机(北京格瑞德曼仪器设备有限公司)，VERTEX 80v傅里叶变换红外光谱仪(德国布鲁克公司)，DSC-60型差示分析仪(日本Shimadzu公司)，倒置相差显微镜(CK2型，日本Olympus公司)。

2 实验方法

2.1人参皂苷Rd含量测定

2.1.1色谱条件色谱柱：Agilent TC C18(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：乙腈-水(V∶V=40∶60)；流速：0.8mL/min；进样量：10μL；柱温：30℃；检测波长：203nm。

2.1.2标准曲线的绘制精密称取人参皂苷Rd 14.5mg，置于25mL容量瓶中，甲醇溶解定容至刻度，配制成浓度为580μg/mL的溶液，作为储备液备用。精密移取上述储备液0.2mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL，置于25mL容量瓶中，甲醇定容至刻度，依次进样10μL，重复进样3次，以峰面积(A)对质量浓度(C)进行线性回归，得回归方程A=3856.9C+5397.9，r=0.9999，说明人参皂苷Rd在4.64μg/mL～92.8μg/mL范围内线性关系良好。

2.1.3精密度试验精密移取储备液适量，甲醇稀释成浓度为46.4μg/mL的溶液，连续进样6次，得日内精密度，RSD为0.48%；连续测定6d，得日间精密度，RSD为0.93%，说明该方法精密度良好。

2.1.4包合物中人参皂苷Rd的含量测定精密称取包合物16.0mg，置于25mL容量瓶中，甲醇溶解定容至刻度，摇匀，进样10μL，重复进样3次，代入标准曲线，计算得出包合物中人参皂苷Rd的含量。

2.1.5人参皂苷Rd包合前后溶解度的测定取过量的人参皂苷Rd原料药和包合物，加蒸馏水，分别配成25℃和37℃下的过饱和溶液，恒温搅拌2h，取上清液过滤，滤液用甲醇稀释适当倍数后进样10μL，记录峰面积，代入标准曲线求出溶解度。

2.2包合物的制备

取2.0g羟丙基-β-环糊精，置于三颈瓶中，加入10mL水溶解，60℃水浴，通入N2保护，按照摩尔比为1∶1称取人参皂苷Rd，用无水乙醇溶解，不断搅拌的条件下逐滴滴入到羟丙基-β-环糊精水溶液中，反应5h，冷却至室温继续搅拌3h，旋转蒸发蒸去溶剂，过滤，用蒸馏水洗涤滤饼，所得滤液冷冻干燥得白色粉末，即为人参皂苷Rd-羟丙基-β-环糊精包合物。

2.3包合物的表征方法

2.3.1差示扫描量热法(DSC)[5]测试条件：分别取人参皂苷Rd、羟丙基-β-环糊精、人参皂苷Rd与羟丙基-β-环糊精的物理混合物(以下简称物理混合物)以及包合物1mg～3mg，N2保护，铝质坩埚，温度范围30℃～300℃，升温速率为10℃/min。

2.3.2红外光谱法(FIR)[6]测试条件：分别取人参皂苷Rd、羟丙基-β-环糊精、物理混合物以及包合物适量，与KBr压片，相同条件下进行红外检测，扫描范围为4000cm-1～500cm-1。

2.3.3显微镜法[7]测试条件：分别取人参皂苷Rd、羟丙基-β-环糊精、物理混合物以及包合物适量，均匀分散在载玻片上，置于显微镜下观察。

3 结果与讨论

3.1包合物中人参皂苷Rd的含量

包合物中人参皂苷Rd的含量=测得的人参皂苷Rd的量/包合物质量×100%，根据测定结果计算得到包合物中人参皂苷Rd的含量为7.53%。

3.2人参皂苷Rd包合前后的溶解度

按照“2.1.5”项下方法测定人参皂苷Rd在25℃的溶解度为0.165mg/mL，37℃的溶解度为0.292mg/mL，而包合物25℃的溶解度为4.01mg/mL，增大了24.3倍，37℃的溶解度为63.97mg/mL，增大了219倍，增溶效果较好。

3.3包合物的表征结果分析

3.3.1差示扫描量热法图1的4条曲线依次为人参皂苷Rd-羟丙基-β-环糊精包合物、羟丙基-β-环糊精、物理混合物和人参皂苷Rd的DSC谱图。在物理混合物的谱图(图1c)中，人参皂苷Rd在250℃左右的放热峰依然存在，而在包合物的谱图(图1a)中该放热峰已经消失，这是因为人参皂苷Rd已经嵌入羟丙基-β-环糊精的疏水空腔中，主药峰被掩盖，说明包合物已经形成。

3.3.2红外光谱法图2的4条曲线依次为羟丙基-β-环糊精、包合物、人参皂苷Rd和物理混合物的红外谱图。在人参皂苷Rd的红外谱图(图2c)中，3404cm-1附近为-OH的伸缩振动峰，2943.2cm-1附近和2896.7cm-1附近分别为-CH3和-CH2的伸缩振动峰，1198cm-1附近为C-O的伸缩振动峰；在物理混合物的红外谱图(图2d)中，-CH2的伸缩振动峰仍然存在，而在包合物的红外谱图中，该峰已经消失；物理混合物的红外谱图可以看成是羟丙基-β-环糊精和人参皂苷Rd红外谱图的叠加，而包合物的红外谱图和羟丙基-β-环糊精的红外谱图非常接近，说明包合物已经形成。

3.3.3显微镜法包合物的形成使得晶格排列发生变化，可通过显微镜观察其形态的变化[8]。图3为人参皂苷Rd、羟丙基-β-环糊精、物理混合物、包合物在显微镜下观察到的形貌特征。从图中可以看出，羟丙基-β-环糊精为球形结构，物理混合物呈现不规则形态，是人参皂苷Rd和羟丙基-β-环糊精吸附在一起的结果，而人参皂苷Rd-羟丙基-β-环糊精包合物呈现不同于以上3种物质的形态特征，说明形成了新的物相，包合物已经形成。

图3人参皂苷Rd、羟丙基-β-环糊精、物理混合物、包合物的显微镜特征

Fig.3MicroscopiccharacteristicsofHP-β-CD,ginsenosideRd,physicalmixtureandinclusioncomplex

4 结论

(1)采用溶剂-搅拌法[9]制备人参皂苷Rd-羟丙基-β-环糊精包合物，由于人参皂苷Rd水溶性差，选用无水乙醇作为溶媒将其溶解，再与羟丙基-β-环糊精包合。对得到的包合物溶液进行冷冻干燥，与真空干燥相比，冷冻干燥得到的包合物外观疏松，包合物得率高，且水溶性更好[10]。采用DSC、FIR和显微镜法对包合物进行表征，结果均表明包合物已经形成。

(2)人参皂苷Rd在水中溶解度小，与羟丙基-β-环糊精包合后，25℃溶解度从原来的0.165mg/mL增大到4.01mg/mL，增加了24.3倍，37℃溶解度从原来的0.292mg/mL增大到63.97mg/mL，增加了219倍，大大增加了人参皂苷Rd在水中的溶解度，有利于人参皂苷Rd制成口服和注射等剂型，对其在临床上的应用具有重要意义。

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