氨基酸纸色谱实验的改进

黄 敏，陈明迎，舒建德

（连州卫生学校，广东 连州 513400）

1 材料

1.1 器材

培养皿一套、表面皿（或酒精瓶内盖）、中速色谱滤纸、毛细吸管、显色用喷雾器、电吹风、电烤箱。

1.2 试剂

0.2mol/L磷酸氢二钠溶液（50ml）：精密称取1.42 g磷酸氢二钠固体，用蒸馏水溶于小烧杯中，再转移到50ml容量瓶中定容。

0.2mol/L磷酸二氢钠溶液（50 ml）：精密称取1.2 g磷酸二氢钠固体，用蒸馏水溶于小烧杯中，再转移到50ml容量瓶中定容。

pH 7.4的磷酸缓冲溶液：取0.2 mol/L磷酸氢二钠溶液40.5m l与0.2 mol/L磷酸二氢钠溶液9.5 m l混匀，加蒸馏水至1 000m l。

0.1mol/L丙氨酸溶液：精密称取0.891 g丙氨酸固体，溶于少量pH7.4的磷酸缓冲溶液中，以1 mol NaOH调至pH7.4后，加磷酸缓冲溶液至100m l。

0.1mol/L谷氨酸溶液：精密称取0.735 g谷氨酸固体，溶于少量pH7.4的磷酸缓冲溶液中，以1 mol NaOH调至pH7.4后，加磷酸缓冲溶液至50ml。

混合氨基酸溶液：取丙氨酸与谷氨酸溶液各5m l混合。

0.1%茚三酮乙醇溶液：精密称取0.1 g茚三酮固体，用少量95%乙醇溶解，加95%乙醇至100m l。

饱和苯酚-水溶液（展开剂）：将适量的苯酚溶液溶于适量的水中，得到浑浊液，置于分液漏斗中，静置8小时，待下层溶液清晰透明，取下层溶液。

2 方法

2.1 准备

取一张边长为11 cm的正方形中速色谱滤纸，在滤纸上画一直径为5.5 cm的圆，以该圆的圆心为定点，1 cm为半径再画一同心圆，在小圆内过圆心作两条相互垂直的线，两条垂线两端分别与小圆连接，见图1。

2.2 点样

如图1所示，在1、3两处用毛细吸管分别点上丙氨酸和谷氨酸溶液各3滴，在2、4两处点上混合氨基酸溶液，注意点样痕迹不宜扩散较宽。每一次点完用电吹风吹干，重复点3次即可。

图1 纸色谱实验的层析滤纸准备

2.3 层析

取一张同类滤纸（1.5 cm×1.5 cm），将下半剪成须状，卷成圆筒。将少量的饱和苯酚-水溶液倒入表面皿中，溶液加至距表面皿边缘0.5 cm处，将表面皿置于培养皿正中。在点好样的滤纸圆心处打一个小孔（铅笔尖大小），将卷好的圆筒滤纸的上端插入小孔（不要让顶端突出）呈灯芯状，再将点好样的滤纸平放到培养皿上，“灯芯”浸入展开剂中。将同样大小的培养皿反扣在上面以防展开剂挥发，见图2。约30分钟后取出滤纸，用铅笔画出展开剂边缘，再放在60℃电烤箱中烘干。

图2 层析装置示意图

2.4 显色

烘干后的滤纸展开剂挥发，用喷雾器喷上0.1%茚三酮乙醇溶液，再放到60℃电烤箱中烘干，可见紫色同心弧斑出现。

2.5 测量计算

用铅笔画出色斑的中心，用尺量取各色斑中心到原点的距离、原点到试剂前缘的距离，并记录，计算出它们各自的Rf值。分析各色斑是何种氨基酸。

3 讨论

分析化学纸色谱实验是将色谱滤纸悬挂于盛展开剂的色谱缸顶端饱和，10分钟后再行展开。色谱缸空间较大，滤纸悬挂顶端不便操作。本实验改进为水平型纸色谱，器材简易，易于获取和操作。实验结果与教材相同，效果满意。

氨基酸水平型纸色谱实验能使学生更好地通过实践来理解实验原理，激发学生对分析化学的学习兴趣和求知欲望，锻炼学生的动手能力。■