高效液相色谱法测定生骨散中柚皮苷的含量

2014-03-20赵明会付凌燕程晓英

中国中医药现代远程教育 2014年18期

赵明会付凌燕程晓英

(吉林省吉林市食品药品检验所，吉林 132001)

生骨散是由骨碎朴、续断、自然铜等16味中药制成的散剂，具有益髓生骨、养血强筋，通经止痛的作用[1]。用于 “骨蚀”中后期，肝肾不足所致的髋部疼痛，患肢活动不利明显，肉萎筋缩，腰膝酸软无力，健忘失眠，舌淡苔白，脉沉细；股骨头坏死等骨病见上证候者[2]。该制剂无含量测定方法，不能有效控制成药的质量。骨碎补为此方中主药，柚皮苷为骨碎补药材主要活性成分，也是质量控制常用的指标性成分。现采用实用、有效、普及的高效液相法测定柚皮苷的含量以提高质量标准[3-5]，以便控制其质量，给用药提供保障，结果满意，可供该制剂质量控制参考。

1 仪器与试药

岛津LC-2010C高效液相色谱仪，包括（配套的泵，柱温箱，自动进样器，紫外检测器（岛津），CLASS-VP色谱工作站），Sartorius电子分析天平；柚皮苷对照品由中国药品生物制品检定所提供，批号为110722-200309（供含量测定用）；生骨散为医院制剂样品（吉林市股骨头坏死专科医院，批号：20121101，20121102，20121103）。甲醇为色谱纯；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 Warters-C18柱（250mm×4.6mm，5μm）色谱柱；流动相为甲醇-水(33∶67)；流速 1．0mL·min-1；检测波长283nm；柱温25℃。在此条件下，柚皮苷峰形对称，分离效果良好，阴性试验无干扰。见图1。

图1生骨散HPLC色谱图

2.2 对照品溶液的制备取经五氧化二磷减压干燥12h后的柚皮苷对照品适量，加甲醇制成235μg·ml-1的对照品溶液；再加甲醇制成21.15μg·ml-1的对照品溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备取生骨散8g，精密称定，精密加入甲醇40ml，称定重量，加热回流3h，放冷后用甲醇补足减失的重量，滤液转移至50ml容量瓶中，加甲醇至刻度，取续滤液，即得[1]。

2.4 阴性样品溶液的制备依照 “2.3”项下制备缺骨碎补的阴性对照溶液。

2.5 线性精密吸取柚皮苷对照品溶液（浓度：235μg·ml-1） 3、 9、 15、 30、 45、 60ml，分别置于100ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，在上述色谱条件下各进样10μl，以浓度（C）-峰面积（A），回归方程为： A=18988.62C-3969.52， r=1.0000 （n=6）。柚皮苷在 7.05～141.00μg·ml-1范围内呈良好线性关系。

2.6 稳定性取同一批样品（批号20121101）制备后的0、1、2、4、8、12h测定，按柚皮苷的峰面积计算，RSD=0.7% （n=6），柚皮苷对照品溶液在12h内稳定。

2.7重复性取同一批样品（批号20121101），按供试品溶液的制备方法分别制备共6份，进行测定，求得柚皮苷含量的RSD=0.8% （n=6），表明重复性较好。

2.8 精密度取同一批样品（批号 20121101）10μl，按相同色谱条件，连续进样5次测定， RSD=0.3%（n=5），表明精密度较好。

2.9 回收率取同一批已知含量的生骨散（批号20121101，柚皮苷含量 103.37μg·g-1，平均袋重8.1151g·袋-1）粉末约8g，共9份，分别加入柚皮苷对照品溶液（235μg·ml-1） 4ml、 6m l、 8ml各 3 份混匀后，按 “2.3供试品溶液的制备”方法制备样品测定，结果见表1。