不同配比黄芪丹参对气虚血瘀证模型大鼠血液流变学及TXB2、6-keto-PGF1α影响的研究

朱黎霞 张英丰

1.南方医科大学珠江医院中医科，广东广州510282；2.广州中医药大学中药学院，广东广州510006

不同配比黄芪丹参对气虚血瘀证模型大鼠血液流变学及TXB2、6-keto-PGF1α影响的研究

朱黎霞1张英丰2▲

1.南方医科大学珠江医院中医科，广东广州510282；2.广州中医药大学中药学院，广东广州510006

目的探讨黄芪丹参不同配比对气虚血瘀证大鼠血液流变学及血栓素B2（TXB2）、6-酮前列腺素F1α（6-keto-PGF1α）的影响。方法将SD大鼠随机分为正常组、模型组和黄芪丹参不同配比组，每组各10只。黄芪、丹参的总给药量均为原药材15 g/kg，黄芪、丹参比例分别为5∶1、3∶1、1∶1、1∶3、1∶5。采用饥饿、游泳加皮下注射肾上腺素的方法复制气虚血瘀证大鼠模型，各组大鼠给予不同配比的水煎液冻干物，测定血液流变学指标和TXB2、6-keto-PGF1α含量。结果气虚血瘀模型组血流变参数和TXB2显著升高，6-keto-PGF1α显著降低，与正常组比较差异有高度统计学意义（P＜0.01），模型复制成功。黄芪丹参3∶1、1∶1、1∶3、1∶5配比组可改善血瘀状态，使升高的TXB2水平降低，提升6-keto-PGF1α及6-keto-PGF1α/TXB2比值，差异有高度统计学意义（P＜0.01）。结论黄芪丹参对大鼠气虚血瘀证确有疗效，其中1∶3配比组效果最佳。

丹参黄芪药对；气虚血瘀证；血液流变学；配比研究

证是中医特有概念，辨证论治是中医特色，气虚血瘀证是中医临床常见证型之一，益气活血是行之有效的治法，黄芪、丹参是常见的药对组合。本文构建了气虚血瘀证大鼠模型，探讨不同配比对气虚血瘀证大鼠模型血液流变学及血栓素B2（TXB2）、6-酮前列腺素F1α（6-keto-PGF1α）、6-keto-PGF1α/TXB2比值的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 仪器LG-R-80B型血液黏度仪（北京中勤世帝科学仪器有限公司），Anke TDL-40B（上海安亭科学仪器厂）；LGJ-10C真空冷冻干燥机（郑州南北仪器设备有限公司）。

1.1.2 试剂盐酸肾上腺素注射液（上海禾丰制药有限公司），TXB2、6-keto-PGF1α试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。

1.1.3 药物黄芪、丹参饮片购自广州致信药业，经鉴定黄芪为豆科植物膜荚黄芪Astralusmembranaceus（Fish.）Bge.的干燥根，丹参为Radix Salviae Miltiorrhiae的干燥根茎。水煎液冻干物的制备：黄芪丹参药材按5∶1、3∶1、1∶1、1∶3、1∶5比例混合，总量均为5 kg。加水煎煮2次，加水量分别为10、8倍，时间依次为30、20min，煎好后过滤并压榨药渣。将水煎液和压榨液合并，静置、离心，60℃下减压浓缩得一定密度的浸膏，并于-40℃下冷冻干燥。

1.1.4 实验动物健康雄性SD大鼠，清洁级，体重（200±10）g，广州中医药大学动物实验中心提供，许可证号SCXK2008-0020。

1.2 方法

1.2.1 分组大鼠随机分为正常组、模型组和黄芪丹参5∶1、3∶1、1∶1、1∶3、1∶5组，每组各10只。

1.2.2 气虚血瘀证大鼠模型制备根据中医“劳则气耗”理论，结合“冷凝激怒”模拟血瘀状态，在文献方法[1-5]的基础上加以改进。除正常组动物外，所有大鼠早上给予一半饲料，晚间再给予一半饲料（每天总量40 g/kg，每天总摄食量控制在正常值的1/2左右），时间维持1周，除正常组动物外，第8天开始在限制食量的基础上，放入（20±2）℃左右水中游泳，当每组50%的大鼠出现自然沉降时停止游泳，连续18 d。除空白正常组动物外，第16天开始每只大鼠在游泳前皮下注射肾上腺素0.4 mL/kg于10℃水中游泳，共10 d。根据动物精神状态、毛发变化、体重等一般情况，结合血液流变学改善判断模型是否成功。

1.2.3 给药剂量根据人与实验大鼠的体表面积折算法计算给药量。实验第2周开始，除正常组及模型组大鼠外，每只大鼠均灌胃给予冻干物（相当于原药材15 g/kg），每天1次，给药持续到造模结束后第7天。正常组及模型组灌服同体积生理盐水。

1.2.4 血液流变学及TXB2、6-keto-PGF1α的检测末次给药后1 h腹主动脉取血于肝素锂抗凝管内，3000 r/min×30 min取上层血浆。在全自动血液流变仪上由专人检测，检测指标包括高（200 s-1）、中（100 s-1、50 s-1）、低（1 s-1）切变速率下的全血黏度，并测定切变速率为50 s-1下的血浆黏度[6]。按照试剂盒说明书测定血浆TXB2、6-keto-PGF1α含量。

1.3 统计学方法

采用统计软件SPSS 18.0对数据进行分析，正态分布计量资料以均数±标准差（x±s）表示，多组间比较采用方差分析，两两比较采用LSD-t检验。计数资料以率表示，采用χ2检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 黄芪丹参配伍对血液流变学的影响

结果显示：造模后模型组与正常组比较，高、中、低切变率、血浆黏度急遽升高，差异有高度统计学意义（P＜0.01）。大鼠分别给予不同配比的丹参黄芪后，3∶1、1∶1、1∶3、1∶5配比组高、中、低切变率、血浆黏度和模型组比较显著降低，差异有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。从变化趋势看，随着黄芪比例降低，降低血黏度效果越好，但黄芪丹参比例低于1∶3时反而疗效降低。见表1。

表1 黄芪丹参不同配比对气虚血瘀证大鼠血液流变学的影响（mPa·s，±s，n=10）

表1 黄芪丹参不同配比对气虚血瘀证大鼠血液流变学的影响（mPa·s，±s，n=10）

注：与正常组比较，**P＜0.01；与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01

组别血浆黏度50 s-1全血黏度200 s-1100 s-150 s-11 s-1正常组模型组5∶1组3∶1组1∶1组1∶3组1∶5组4.09±0.12 4.78±0.27**4.63±0.16 4.39±0.28##4.36±0.14##4.27±0.11##4.31±0.29##4.62±0.18 5.35±0.13**5.18±0.28 5.09±0.19#4.92±0.25##4.85±0.32##5.06±0.41##5.26±0.15 5.91±0.38**5.79±0.24 5.70±0.33#5.64±0.25##5.38±0.37##5.51±0.41##23.54±1.57 28.66±4.66**27.12±2.94 26.39±1.87#25.46±2.64#24.98±1.55##25.22±1.69##1.62±0.14 2.23±0.18**2.11±0.24 2.01±0.21##1.97±0.17##1.81±0.13##1.91±0.25##

2.2 黄芪丹参配伍对TXB2、6-keto-PGF1α的影响

结果显示：造模后模型组与正常组比较，血栓素TXB2急剧升高、6-keto-PGF1α水平降低，6-keto-PGF1α/TXB2比值降低，差异有高度统计学意义（P＜0.01）。大鼠分别给予不同配比的丹参黄芪后，3∶1、1∶1、1∶3、1∶5组可使升高的TXB2水平降低，提高6-keto-PGF1α及6-keto-PGF1α/TXB2比值，差异有高度统计学意义（P＜0.01）。黄芪丹参比例1∶3时效果最佳。见表2。

表2 黄芪丹参不同配比对气虚血瘀证大鼠TXB2、6-keto-PGF1α的影响（pg/mL，±s，n=10）

表2 黄芪丹参不同配比对气虚血瘀证大鼠TXB2、6-keto-PGF1α的影响（pg/mL，±s，n=10）

注：与正常组比较，**P＜0.01；与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01；TXB2：血栓素B2；6-keto-PGF1α：6-酮前列腺素F1α

组别TXB2（pg/mL）6-keto-PGF1α（pg/mL）6-keto-PGF1α/TXB2正常组模型组5∶1组3∶1组1∶1组1∶3组1∶5组437.75±35.97 631.36±32.65**592.66±54.80 557.39±28.37##501.79±41.22##467.52±35.41##475.04±32.29##515.76±43.51 308.28±21.22**336.94±32.11 423.23±31.04##443.78±29.11##470.47±45.11##447.99±48.86##1.18±0.06 0.49±0.05**0.57±0.07#0.76±0.05##0.89±0.09##1.01±0.08##0.94±0.08##

3 讨论

中药复方是多成分混合体，作为外源性物质进入机体必然对内环境产生扰动，具有整体性和相互性原则。中药组成的“数、量、相对比例”决定了复方功效，中药复方配伍成为当前研究的热点。中医药临床实践中，常将功效相近或相辅相成的两味药物相对固定配伍使用，称为药对，成为方剂配伍的基本组成形式之一。药对因其组方简单，疗效确切，临床应用广泛，易于入手研究，以其为研究对象具有可行性和可操作性。黄芪味甘、微温，归脾、肺经，为补气要药。丹参味苦、微寒，归心、肝经为活血主药。丹参、黄芪则为临床常用的药对组合，丹参活血，黄芪补气，对于气虚血瘀证具有良好疗效。杨振等[7]报道丹参黄芪提取物可改善心脑血管功能、降低血脂。

气虚血瘀证是临床诸多疾病常见的中医证候之一，尤其是在心脑血管疾病中常见。由于气虚运血无力，血行瘀滞而表现的症候，常由病久气虚，渐致瘀血内停而引起。尤其在心脑血管疾病中常见。随着生活方式的转变加上工作节奏的加快，气虚血瘀证在临床上多见。中医认为“气为血帅、血为气母”、“气行则血行、气滞则血瘀”，气、血之间相互依存、相互促进，在气虚血瘀型中互为因果，中医认为黄芪补气，丹参活血，丹参黄芪配伍对气虚血瘀证的高“浓、黏、凝、聚”状态有显著改善，在所选定的各个配比组均可以改善血瘀状态，随着丹参比例增加而效果越显著，但在1∶5时效果反而比1∶3有所降低，说明补气对改善血瘀状态必不可少，且比例非常关键。

气虚血瘀证模型复制方法较多，如苗兰等[8]采用睡眠剥夺法加高脂高糖饲料复制。本文根据中医“饥则损气”、“劳则耗气”、“肥甘厚味伤脾”等理论，采用饥饿、劳累、加肾上腺素等模拟情志刺激等多重因素复制气虚血瘀型大鼠模型。造模后大鼠精神状态、皮毛光洁度、体重等均发生明显改变，出现精神萎靡、身体消瘦、毛发萎黄、舌质瘀斑等症状。高、中、低切边速率下血黏度显著升高。本方法复制气虚血瘀证大鼠模型成功、可靠。

血栓素A2（TXA2）和前列环素（PGI2）的平衡对于维持血液流动性和血管内皮正常功能极为重要，在血瘀状态下PGI2合成减少，TXA2合成增多，PGI2/TXA2的平衡被破坏。由于PGI2、TXA2均不稳定，可用其代谢产物TXB2、6-keto-PGF1α及其6-keto-PGF1α/TXB2来反映药物的治疗状况[9]。本实验中发现，模型组TXB2显著增加、6-keto-PGF1α显著降低，6-keto-PGF1α/ TXB2明显低于正常组，差异有高度统计学意义（P＜0.01）。丹参是中医“活血化瘀”要药，药效物质基础清新，疗效确切，确能改善血瘀证大鼠血瘀状态，对6-keto-PGF1α、TXB2有显著影响[10]。经给予不同配比的黄芪丹参提取物后给药组相比模型组TXB2显著降低、6-keto-PGF1α显著增加，6-keto-PGF1α/TXB2显著增加，其中1∶3比例效果最佳，与柳润辉等[11]组分配伍研究结果较为接近。

在中药配比研究中，药物的处理方法非常重要，要求不仅能够最大程度保留活性成分，也需要和传统用药方法尽量保持一致。目前常用的有水煎法、醇提法等，各有优缺点。如水煎法简便易行，但对脂溶性成分浸提效率较低，且溶出杂质较多、不利于长期储存。醇提法采用不同浓度乙醇获得活性成分或有效部位，活性成分浓度提高，易于获得理想结果，但非传统处理方法。大量基础研究发现丹参的脂溶性成分群（丹参酮ⅡA、隐丹参酮等）、水溶性成分群（丹参素、原儿茶醛、丹酚酸A、B、C、D、E等）均为活性成分群，但对光、热、水分均不稳定，提取过程中损耗较多。本文通过结合水煎法和冷冻干燥法获得提取物，既继承了传统中药处理方法的精髓，体现了在煎煮过程中复方成分群间复杂的相互作用，又最大程度地保持了活性成分的稳定性，且提取物复溶性好，利于长期给药。目前采用此方法的文献报道尚不多见，本研究可供类似研究借鉴。

临床研究发现血瘀证患者一般血液均有“浓、黏、凝、聚”的改变，故将凝血指标异常、血液流变学列为血瘀证实验室诊断标准[12]。通过本研究，发现黄芪丹参比例为1∶3时对气虚血瘀证大鼠活血效果较好,通过丹参黄芪的协同增效作用改善了“浓、黏、凝、聚”的血瘀状态。本研究主要偏重于血瘀指标，中医认为“气虚”和免疫功能密切相关，在后续研究中拟引入免疫功能试验，通过多指标、多效应的综合平衡法进一步评价其益气活血的配伍机制。

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[10]白如君，褚伟，徐洁.丹参提取液对糖尿病大鼠血浆ET、TXB2、6-keto-PGF1α的影响[J].湖北中医学院学报，2006，8（3）：11-12.

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[12]杜金行，史载祥.血瘀证中西医结合诊疗指南[C].武汉：第八次全国中西医结合血瘀证及活血化瘀研究学术大会，2011：37.

Effect of com patibility of Astragalus Membranaceus and Salvia M iltiorrhiza in different proportionon hemorheology and contents of TXB2,6-keto-PGF1αin blood of Qi deficiency and blood stasis ratmodel

ZHU Lixia1ZHANG Yingfeng2▲
1.Department of Traditional Chinese Medicine,Zhujiang Hospital of South Medical University,Guangdong Province, Guangzhou 510282,China;2.School of Chinese Medicine,Guangzhou University of Chinese Medicine,Guangdong Province,Guangzhou 510006,China

Objective To explore the influence of the different compatibility proportion of Astragalus Membranaceus and Salvia Miltiorrhiza on Qi deficiency and blood stasis ratmodel on hemorheology and the content of TXB2and 6-keto-PGF1α.Methods The SD rats were randomly divided into normal group,model group and five compatibility groups,10 rats in each group.The Qi deficiency and blood stasis ratmodel was replicated by restricted diet,forced swimming and norepinephrine subcutaneous injecting.The ratswere orally given with different proportion of dry freezing water decoction,the proportions of Astragalus Membranaceus and Salvia Miltiorrhiza were 5∶1,3∶1,1∶1,1∶3,1∶5 respectively,and the total dosage were all 15 g/kg.The hemorheology and the content of TXB2and 6-keto-PGF1αwere determined.Results The hemorheology parameters and TXB2were significantly increased and 6-keto-PGF1αlowered in Qi deficiency,compared with normal group,the differences were statistically significant(P＜0.01),the Qi deficiency and blood stasis ratmodels were successful.The compatibility of Astragalus Membranaceus and Salvia Miltiorrhiza in proportion of 3∶1,1∶1,1∶3,1∶5 groups showed improved blood stasis state,TXB2content was decreased,6-keto-PGF1αand 6-keto-PGF1α/TXB2ratio were increased,comparingwith model group,the differenceswere statistically significant (P＜0.01).Conclusion The different proportion is effective,the ratio of1∶3 has the best effect.

Astragalus Membranaceus and Salvia Miltiorrhiza coupletmedicine;Qi deficiency and blood stasis syndrome;Hemorheology;Compatibility study

R963

A

1673-7210（2014）08（a）-0013-04

2014-04-17本文编辑：苏畅）

国家自然科学基金资助项目（编号30701097）。

▲通讯作者