急性脑梗死患者血清VEGF 与bFGF 水平的动态变化

王翠兰，石秋艳，孙 原，范亚霞，张春阳

急性脑梗死病灶由中心坏死区和周围的缺血半暗带组成，坏死区脑细胞死亡不能再生，但缺血半暗带尚存在大量神经元，通过侧支循环能够减轻缺血缺氧损伤、恢复神经细胞功能。因此侧支循环和新生血管的建立和开放是影响梗死面积及预后的重要因素。而血管内皮细胞生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)是血管新生最重要的刺激因子。目前，国内有关脑梗死患者血清中VEGF或bFGF 的相关性研究较多，但对脑梗死不同梗死面积患者血清中VEGF 与bFGF 水平的动态变化的相关研究较少，且与脑卒中后患者的神经功能恢复状况的关系尚缺乏系统研究。

本研究通过ELISA 方法观察急性脑梗死患者血清VEGF 和bFGF 在不同时间点的动态变化，探讨二者在急性脑梗死发病中的作用及与梗死面积、预后及可能的关系。

1 材料与方法

1.1 研究对象 脑梗死组:收集2012 年2 月～2013 年10 月我院神经内科住院的急性脑梗死患者120 例，其中男68 例，女52 例，年龄53～80 岁，平均(69.5 ±7.23)岁。诊断符合1995 年第四届全国脑血管病会议修订的标准，并经头部CT 或MRI证实。排除标准:既往有脑卒中病史、近3 个月有脑部外伤史、患有严重心、脑、肝、肾疾病的患者。根据头部CT 或MRI 测量梗死灶的最大直径，将患者分为3 组:小梗死组28 例(最大直径＜1.5 cm);中梗死组44 例(5 cm ＞最大直径≥1.5 cm);大梗死组48 例(最大直径≥5 cm)。依据改良的Rankin 量表(mRS)［1］评价发病3 个月后(病房评价、电话随访或门诊评价)患者的神经功能恢复情况，并分为两组:预后较好组(0～4 分)82 例;预后较差组(5～6分)38 例。以上各组性别、年龄差异均无统计学意义。对照组:选择年龄和性别相匹配的门诊健康查体者60 例，其中男32 例，女28 例，平均年龄(70.8±7.77)岁。

1.2 标本采集 采取脑梗死组发病2 d 内、7 d、14 d 清晨空腹静脉血3 ml，于室温2 h 内3500 r/min 离心10 min，提取血清于-80 ℃冰箱保存待测。对照组空腹采血一次，标本处理同上。

1.3 测量方法 双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清VEGF 和bFGF 含量。人重组VEGF ELISA 试剂盒和人重组bFGF ELISA 试剂盒购于欣博盛生物科技有限公司。实验按试剂盒说明书操作。

1.4 使用仪器 美国MD 公司的SpectraMax全波长读数仪和Wellwash4 MK2 洗板机。

1.5 统计学处理 应用SPSS13.0 统计软件，两样本之间比较采用t 检验，多组间比较采用重复测量的方差分析，数据均采用均数±标准差()表示，以P ＜0.01 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 脑梗死组与对照组血清VEGF 和bFGF水平比较 脑梗死组患者发病后2 d 内、7 d、14 d的平均血清VEGF 和bFGF 水平均高于对照组(P ＜0.01)，且在急性期VEGF 水平持续升高，高峰发生在7 d，以后逐渐下降，至14 d 仍维持在较高水平;血清bFGF 水平在发病后2 d 内达高峰，发病7 d 呈逐渐下降趋势，14 d 仍高于正常(P ＜0.01)(见表1)。

2.2 不同梗死面积患者血清VEGF 和bFGF水平比较 3 种梗死面积患者血清VEGF 和bFGF水平在发病后各时点有显著性差异(P ＜0.01)。同一时点，大梗死组患者在发病后2 d 内、7 d、14 d 血清VEGF 和bFGF 水平显著高于中、小梗死组患者(P ＜0.01);中梗死组患者血清VEGF 和bFGF 水平显著高于小梗死组患者(P ＜0.01)(见表2)。

2.3 不同预后的脑梗死患者血清VEGF 和bFGF 水平比较 预后较好组患者各时间点血清VEGF 和bFGF 水平均明显高于预后较差组，差异有统计学意义(P ＜0.01)(见表3)。

表1 不同时间点脑梗死组与对照组血清VEGF 和bFGF 水平比较(，pg/ml)

表1 不同时间点脑梗死组与对照组血清VEGF 和bFGF 水平比较(，pg/ml)

与对照组比较* P ＜0.01

表2 不同梗死面积患者血清VEGF 和bFGF 水平比较(，pg/ml)

表2 不同梗死面积患者血清VEGF 和bFGF 水平比较(，pg/ml)

与中、小梗死组比较△P ＜0.01;与小梗死组比较* P ＜0.01

表3 不同预后的脑梗死患者血清VEGF 和bFGF 水平比较(，pg/ml)

表3 不同预后的脑梗死患者血清VEGF 和bFGF 水平比较(，pg/ml)

与预后较差组比较△P ＜0.01

3 讨论

脑梗死后缺血区毛细血管增生的范围与程度直接关系到缺血边缘区血流的改善，与神经生理功能的恢复关系密切。所以，通过血管新生启动梗死区微血管网重建是脑组织修复的重要过程，新生的血管网可能为损伤神经元的修复、突触连接和神经发生创造良好的微环境，为脑梗死后神经功能的恢复奠定基础。VEGF、bFGF 是重要的血管生成因子，在血管新生过程中发挥了重要作用。

VEGF 是最早被用于脑缺血疾病研究的血管生长因子。VEGF 不仅是调节脑血管发生的一个关键因子，而且还具有神经营养和保护作用，这种神经保护作用独立于血管生成［2，3］。Hayashi 发现在大脑中动脉缺血后12～24 h 沿着梗死灶周围的血管即出现内皮细胞增殖［4］。有学者研究发现［5］脑梗死后移植VEGF 基因，7 d 后可见梗死侧脑组织有明显的血管新生。最近有研究表明［6］，VEGF 在各种病理过程中参与血管和神经的重塑。由此可见，当脑组织发生缺血、缺氧时，VEGF 在促进血管新生、改善缺血半暗带血供方面发挥重要作用。

bFGF 是一种多效能的细胞生长因子，具有促进血管新生、营养神经、促进软骨生长和组织修复的功能［7，8］。正常情况下，只以极低浓度存在于血液中，脑梗死一旦发生，在发病2 d 内血清bFGF 水平较正常情况下明显增高，之后逐渐降低至恢复期仍高于正常水平［9］。还有学者发现，bFGF 通过诱导MAP-2及NTP 蛋白的表达来促进神经功能恢复［10］。有人认为，bFGF 在体外与VEGF 联合诱导外周单个核细胞，可定向分化为血管内皮细胞。最近的动物实验发现［11，12］，bFGF 在正常情况下有一定表达，而在缺血模型中表达明显增加，说明其参与了脑损伤后一系列细胞反应及神经系统功能恢复过程。

本研究结果提示，脑梗死组患者发病后各时点平均血清VEGF 和bFGF 水平均高于对照组(P ＜0.01)。在急性期VEGF 水平持续升高，水肿高发期(梗死后7 d)达高峰，之后逐渐下降，至恢复期仍维持在较高水平。这与最近的一些研究结果［13，14］类似。本实验显示，血清bFGF 水平于梗死后2 d 内达高峰，之后呈下降趋势。根据脑梗死早期血清VEGF和bFGF 水平的急剧升高不难看出二者共同参与了缺血再灌注的早期病理生理过程，并发挥了重要作用，至恢复期其水平仍高于正常水平，表明二者可能协同参与了脑梗死的修复过程。

另一方面，本研究进一步分析了急性脑梗死患者血清VEGF 和bFGF 水平与大、中、小梗死面积的关系，发现3 组之间比较差异均有统计学意义，VEGF 和bFGF 水平与脑梗死的病情轻重有关，即脑损伤越重、梗死灶越大，两者的水平越高。另外，对120 例脑卒中后患者的神经功能恢复分析发现，预后较好组在发病后各时点血清VEGF 和bFGF 水平均高于预后较差组，可能与VEGF 和bFGF 促进血管新生有关。

综上所述，急性脑梗死患者血清VEGF 和bFGF水平在发病早期明显升高，且呈动态变化。这一方面提示VEGF 和bFGF 在参与新生血管形成及脑神经功能恢复方面发挥重要作用;在另一方面也提示二者与梗死面积及脑神经功能恢复关系密切，在一定程度上可能作为判断梗死面积与预后的新外周指标。

［1］Shinohara Y，Minematsu K.Modified Rankin scale with expanded guidance scheme and interview questionnaire:interrater agreement and reproducibility of assessment［J］.Cerebrovasc Dis，2006，21(4):271-278.

［2］Yao RQ，Zhang L，Wang W，et al.Cornel iridoid glycoside promotes neurogenesis and angiogenesis and improves neruological function afterfocal cerebral ischemia in rats［J］.Brain Res Bull，2009，79(1):69-76.

［3］Wang YQ，Guo X，Qiu MH，et al.VEGF over expression enheances striatal neurogenesis in brain of adult rat after a transient middle cereb ral artery occlusion［J］.J Neurosci Res，2007，85(1):73 -82.

［4］Hayashi T，Noshita N，Sugawara T，et al.Temporal profile of angiogenesis and expression of related genes in the brain after ischemia［J］.J Cereb Blood Flow Metab，2003，23(2):166 -180.

［5］齐治国，梁红梅.不同外源途径干预血管新生对脑缺血模型大鼠神经功能损伤修复的影响［J］.第三军大学报，2010，32(8):778 -782.

［6］Sims NR，Muyderman H.Mitochondria，oxidative metabolism and cell death in stroke［J］.Biochimica et Bio Physica Acta，2010，1802(1):80 -91.

［7］Fisher M，Meadows ME，DOT，et al.Delayed treatment with intravenous basic fibroblast growth factor reduces infarct size following permanent focal cerebral ischemia in rats［J］.J Cereb Blooke Flow Metab，1995，15(6):953 -959.

［8］Mattson MP，Scheff SW.Endogenous neuroprotection factors and traumatic brain injury:mechanisms of action and implications for therapy［J］.J Neurotrauma，1994，11(1):3 -33.

［9］宋水江，吴国平，闻树群，等.脑梗死患者血清碱性成纤维细胞生长因子含量变化及意义［J］.中华急诊医学杂志，2003，12(6):39-41.

［10］贺 丹，赵 林，刘怀军，等.碱性成纤维细胞生长因子治疗猫急性脑梗死的作用机制研究［J］.Chin J Clin Neurosci，2007，15(6):633 -637.

［11］石秋艳，孙惠芳，姜进克，等.实验性脑出血大鼠血肿周围区VEGF、bFGF 表达及血管新生的动态变化及重组人促红细胞生成素对其干预作用的研究［J］.中风与神经疾病杂志，2010，27(4):299 -303.

［12］陈摇生，胡志涛.VEGF 与急性脑梗死的关系［J］.安徽医药，2011，15(5):606 -607.

［13］陈景红，李 娜，王建华，等.急性脑梗死患者血清血管内皮生长因子和S100-β 蛋白水平的动态变化［J］.临床荟萃，2011，26(23):2033 -2038.

［14］高俊淑，李 娜，齐亚超，等.老年急性脑梗死患者VEGF 和GFAP 水平的动态变化［J］.中国老年学杂志，2011，31(4):687-688.