HPLC法同时测定腹泻康片中秦皮甲素和秦皮乙素的含量

宋 纯

（湘潭市中心医院，湖南湘潭411100）

HPLC法同时测定腹泻康片中秦皮甲素和秦皮乙素的含量

宋 纯

（湘潭市中心医院，湖南湘潭411100）

目的建立同时测定腹泻康片中秦皮甲素和秦皮乙素含量的方法。方法采用高效液相色谱法，色谱柱：Kromasil C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm）；流动相：乙腈－0.1%磷酸（8∶92）；检测波长：334 nm；流速：1 mL·min－1；柱温：30℃。结果秦皮甲素线性范围为47.2～472 ng，r＝0.999 0，秦皮乙素线性范围为45.6～456 ng，r＝0.999 2，秦皮甲素和秦皮乙素平均加样回收率分别为101.09%和100.51%。结论本方法简便、准确、可靠，适用于腹泻康片中秦皮甲素和秦皮乙素的质量控制。

高效液相色谱法；腹泻康片；秦皮甲素；秦皮乙素

随着社会生活节奏的加快，饮食失调和不洁引起胃肠功能紊乱，导致感染性腹泻的现象日益增加，目前临床采用抗生素治疗感染性腹泻比较普遍，不合理使用、滥用抗生素导致耐药菌株不断增多，治疗难度加大［1，2］，而运用中药治疗感染性腹泻可减少抗生素使用量，一定程度上能缓解抗生素耐药问题。腹泻康片处方由秦皮、木香等四味药材组成，源自临床应用多年的方剂，对感染性腹泻有很好的治疗效果，具有清热燥湿，行气止痛，涩肠止泻之功效。主要用于感染性腹泻，症见泻下急迫或泻下不爽，大便色黄秽臭，肛门灼热。现代药理研究表明秦皮主要有效成分秦皮甲素、秦皮乙素具有明显的镇痛抗炎作用［3～6］，现参考文献方法［7～12］建立了HPLC法同时测定腹泻康片中秦皮甲素和秦皮乙素的含量，以建立产品质量控制方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器 岛津LC－20A高效液相色谱仪，Mettler AE－200型电子分析天平，TDZ4－WSD低速台式离心机（长沙湘仪），HS－2060超声清洗器（上海科导）。

1.2 试药 秦皮甲素对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号：110740－200104），秦皮乙素对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号：110741－200506），腹泻康片（自制，0.45 g／片，批号：20130406、20130408、20130410）。乙腈色谱纯，水为纯净水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Kromasil C18柱（4.6 mm× 250 mm，5μm）。流动相：乙腈－0.1%磷酸（8∶92）。检测波长：334 nm。流速：1mL·min－1。柱温：30℃。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的配制 精密称取秦皮甲素对照品11.8 mg、秦皮乙素对照品11.4 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；精密吸取2 mL置10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得含秦皮甲素47.2μg·mL－1、秦皮乙素45.6 μg·mL－1的对照品溶液。

2.2.2 样品溶液的制备 取本品适量，除去包衣，研细，取细粉约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇50 mL，密塞称定重量，加热回流60 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过0.45μm微孔薄膜作为供试品溶液。

2.2.3 阴性对照品溶液的制备 取按处方除秦皮外的其他药材，照“2.2.2”项下的制备方法处理，即得阴性对照品溶液。

2.3 线性关系的考察 精密吸取秦皮甲素、秦皮乙素对照品混合溶液（浓度分别为47.2、45.6μg·mL－1）1、2、4、6、8、10μL进样，测定其峰面积积分值，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。秦皮甲素回归方程为：Y＝963.16X＋2 863.1，r＝0.999 0，表明秦皮甲素在47.2～472 ng范围内具有良好的线形关系；秦皮乙素回归方程为：Y＝1 636.2 X＋5 842.6，r＝0.999 2，表明秦皮乙素在45.6～456 ng范围内具有良好的线形关系。

2.4 阴性对照品溶液的考察 分别吸取一定体积的阴性对照品溶液、样品溶液和对照品溶液进行测定。结果表明阴性对照品溶液对样品溶液的测定无干扰，见图1～3。

图1 对照品溶液色谱图 1.秦皮甲素；2.秦皮乙素

2.5 精密度试验 精密吸取同一供试品溶液10 μL，重复进样6次，测定其峰面积积分值，结果秦皮甲素RSD为1.46%，秦皮乙素RSD为1.67%。

2.6 重复性试验 取同一批号样品（批号：20130406），按“2.2.2”项下的方法分别制备6份样品溶液进样10μL，秦皮甲素和秦皮乙素RSD分别为1.32%和1.05%。

图2 样品溶液色谱图

图3 阴性对照品溶液色谱图

2.7 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、10、12、24 h进样10μL，秦皮甲素和秦皮乙素RSD分别为0.97%和0.94%，表明该方法稳定性良好。

2.8 回收率试验 精密称取秦皮甲素23.42 mg和秦皮乙素30.86 mg，置于50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得储备液。精密称取已知含量的样品约0.25 g，共6份，置具塞锥形瓶中，分别精密加入1.0 mL储备液（秦皮甲素对照品0.468 4 mg，秦皮乙素对照品0.617 2 mg），然后按上述方法制备供试品溶液，并测定含量，计算回收率，结果见表1。

表1 回收率试验结果（n＝6）

2.9 样品测定 取3批不同批号样品，按“2.2.2”项下的方法分别制备样品溶液，进样10μL，样品含量测定结果见表2。

表2 含量测定结果

3 讨论

3.1 样品前处理方法 对比了回流提取和超声提取两种方法，回流提取法对秦皮甲素和秦皮乙素提取率略高于超声法；对比了回流40、60、80 min提取效果，60min基本提取完全，故样品前处理方法定为回流提取60 min。

3.2 色谱条件 色谱条件参照《中国药典》2010年版（一部）秦皮的含量测定方法，阴性对照液未见干扰，秦皮甲素、秦皮乙素色谱峰与样品中其他组分色谱峰可达基线分离，理论板数按秦皮乙素峰计算在5 000以上，因此上述色谱条件可用于本品中秦皮甲素、秦皮乙素的含量测定。

3.3 含量限度 测定3批样品中秦皮甲素与秦皮乙素的总量，分别为1.768、1.764、1.782 mg／片，其平均值为1.771 mg／片。根据药材中秦皮甲素和秦皮乙素的含量（秦皮甲素0.43%、秦皮乙素0.59%，合计1.02%）计算转移率，3批样品秦皮甲素转移率分别为：53.50%、53.08%、53.92%，3批样品秦皮乙素转移率分别为51.17%、51.28%、51.58%。考虑中药材的含量波动较大及大生产时的转移率（按50%计），结合《中国药典》对秦皮药材的含量限度规定（不少于0.80%），暂定本品限度为每片含秦皮以秦皮甲素与秦皮乙素的总量计不得少于1.3 mg。3.4 小结 实验结果表明，该法简便可行，重现性好，可作为本品的质量控制方法。

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Determ ination of esculin and esculetin in Fuxiekang Tablets by HPLC

SONG Chun
（Xiangtan Center Hospital，Xiangtan 411100，China）

ObjectiveTo establish a determination method of esculin and esculetin in Fuxiekang Tablets by HPLC.M ethodsHPLCmethod was set up，column was Kromasil C18，themobile phase was acetonitrile－0.1%phosphate acid solution（8∶92），with the flow rate of 1.0 mL·min－1，the detection wavelength was 334 nm，column temperature was 30℃.ResultsThe linear range of esculin was 47.2～472 ng，r＝0.999 0，the average recovery was 101.09%.The linear range of esculetin was 45.6～456 ng，r＝0.999 2，the average recovery was 100.51%.ConclusionThemethod was simple，accurate and stable，which can be used for the quality control of Fuxiekang Tablets.

HPLC；Fuxiekang Tablets；Esculin；Esculetin

R927.2

A

2095－5375（2014）11－0628－003

宋纯，女，副主任药师，研究方向：药物分析，E－mail：16945548＠qq.com