慢性乙型肝炎HBV-DNA载量与炎性因子、肝脏 酶学指标的相关性研究

周燕飞，龚杰，张晓梅

论著·临床

慢性乙型肝炎HBV-DNA载量与炎性因子、肝脏 酶学指标的相关性研究

周燕飞，龚杰，张晓梅

目的探讨慢性乙型肝炎患者血清不同HBV-DNA载量与炎性因子、肝功能酶学指标的关系。方法对78例慢性乙型肝炎患者分别用实时荧光定量PCR技术检测血清HBV-DNA载量,并以此分为阴性组(17例)、低载量组(30例)、中载量组(19例)、高载量组(12例)4组，比较各组高敏C反应蛋白(hs-CRP)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)、肝功能相关酶(ALT、AST、GGT)的水平，并探讨其相关性。结果随着HBV-DNA载量的增高，TNF-α、IL-6均明显升高，表现为高载量组>中载量组>低载量组>阴性组，组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。血清hs-CRP中载量组、低载量组间水平比较差异无统计学意义(P>0.05)，其余2组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。各组间血清ALT、AST、GGT水平比较，表现为高载量组>中载量组>低载量组>阴性组，组间比较差异有显著统计学意义(P<0.05)。ALT与TNF-α、IL-6相关(r=0.68、0.56，P<0.05)；ALT与hs-CRP无相关性(r=0.23，P>0.05)。结论炎性因子在乙肝的发病过程中有重要作用，综合检测血清炎性因子和肝脏酶学对了解乙肝体内免疫状态、临床诊断和预后有重要意义。

乙肝病毒DNA；超敏C反应蛋白；肿瘤坏死因子α；白介素-6；丙氨酸氨基转移酶；天冬氨酸氨基转移酶；谷氨酸转移酶

乙型病毒性肝炎(HBV)是我国法定乙类传染病，其发病率高，流行性广，严重威胁人类健康。一部分慢性HBV感染可自慢性无症状的乙型肝炎携带者发展为慢性乙型肝炎、肝硬化，甚至肝癌[1]。在其发病过程中，由免疫反应介导的炎性损伤始终贯穿其中，细胞因子的活化、增殖、凋亡发挥着重要的调控作用。血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、谷氨酸转移酶(GGT)水平是反映肝功能损伤程度的主要酶学指标，了解细胞因子与肝细胞损伤发生发展的关系有助于对乙肝的诊断及疗效进行评价。本研究通过检测乙肝HBV-DNA载量和炎性因子、肝脏酶学指标水平，探讨HBV发病过程中三者的相关性。

1 资料与方法

1.1 临床资料 2013年1—12月在我院住院治疗的78例乙型肝炎患者，均符合中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会联合修订“2000年病毒性肝炎防治方案”[2]的诊断标准，所有病例均经临床(病史、症状、体征)、实验室检查及影像学检查(B型超声或CT)确诊，并排除其他类型的病毒性肝炎、自身免疫性肝病、酒精性肝病、代谢性肝病、药物性肝损害等其他慢性肝病。其中男44例，女34例，年龄20～55岁。按血清HBV-DNA载量分为4组:阴性组(HBV-DNA载量<103copies/ml)17例，其中男8例,女9例，年龄26～49(32±12)岁，病程6～17(12±3)个月；低载量组(HBV-DNA载量>103～105copies/ml)30例,其中男18例,女12例，年龄30～55(37±7)岁，病程3～55(32±18)个月；中载量组(HBV-DNA载量>105～107copies/ml)19例,其中男8例,女11例，年龄32～48(40±5)岁，病程15～75(48±36)个月；高载量组(HBV-DNA载量>107copies/ml)12例,其中男10例,女2例，年龄20～44(34±6)岁，病程1～38(15±9)个月。

1.2 检测方法 所有患者空腹状态下，采集外周静脉血10 ml，分离血清4℃保存，2 h内检测各项指标。

1.2.1 血清HBV-DNA载量检测：采用DA7600实时荧光定量PCR仪，检测仪器及试剂由中山大学达安基因股份有限公司提供，HBV-DNA载量正常参考范围<103copies/ml。

1.2.2 血清炎性因子检测：hs-CRP采用日立7600全自动生化仪免疫比浊法进行检测，试剂由上海科华公司提供；TNF-α采用ELISA法，试剂由深圳晶美生物有限公司提供；IL-6采用罗氏E601化学发光仪进行检测，试剂由罗氏公司原装进口提供。

1.2.3 血清肝脏酶学检测：ALT、AST、GGT采用日立7600全自动生化仪酶学法进行检测，试剂由上海科华公司提供，ALT正常参考范围<40 U/L,AST正常参考范围<37 U/L,GGT正常参考范围<58 U/L。

2 结 果

2.1 不同HBV-DNA载量组血清炎性因子水平比较 随着HBV-DNA载量的增高，炎性因子TNF-α、IL-6均明显升高，表现为高载量组>中载量组>低载量组>阴性组，组间水平比较差异有统计学意义(P<0.05)。血清hs-CRP在中、低载量组间水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

注：与阴性组比较，aP<0.05；与低载量组比较，bP<0.05；与中载量组比较，cP<0.05

2.2 不同HBV-DNA载量组血清肝脏酶学指标浓度比较 随着HBV-DNA载量的增高，血清酶含量均明显升高，各组间血清ALT、AST、GGT水平比较，表现为高载量组>中载量组>低载量组>阴性组，组间水平比较差异有显著统计学意义(P<0.05)。见表2。

注：与阴性组比较，aP<0.05：与低载量组比较，bP<0.05；与中载量组比较，cP<0.05

2.3 血清炎性因子与肝脏酶学指标的相关性 统计结果显示，ALT与TNF-α、IL-6呈正相关(r=0.68、0.56，P<0.05)，随着ALT水平的增高，TNF-α和IL-6水平也随之升高。ALT与hs-CRP无相关性(r=0.23，P>0.05)。

3 讨 论

慢性乙型病毒性肝炎的发生及发展机制尚未完全阐明，除与乙肝病毒变异、宿主性别、年龄和遗传基因有关外，还与肝脏内炎性活动密切相关[3，4]。目前大量研究认为，肝细胞病变主要取决于机体的免疫状态，而细胞因子在免疫系统中起着重要的调控作用[5]。

肝脏作为体内重要的消化代谢系统，含有大量肝巨噬细胞。当肝细胞受损时，Kupffer细胞释放大量的TNF-α、IL-6等细胞因子，这些细胞因子会在体内激发一系列的级联反应[6]，TNF-α直接刺激肝星状细胞增殖和胶原合成，从而促进释放更多的细胞因子如TGF-β、PDGF等，形成正反馈的放大作用[7，8]，IL-6在TNF-α刺激后产生，促进中性粒细胞的活化、聚集，引起血小板活化、凝血功能障碍、肾小管坏死、骨骼肌溶解损伤、肝纤维化等，血清中细胞因子浓度的升高可反映组织损伤程度[9]。CRP是一种急性时相反应蛋白，能促进中性粒细胞和巨噬细胞的趋化吞噬，促进炎性反应。但在本研究中，CRP水平变化与乙肝HBV-DNA在中载量组与低载量组无统计学意义，可能与患者均为慢性乙肝，非急性发展期监测水平有关。但随着HBV-DNA载量增高，炎性因子TNF-α、IL-6逐步升高，组间比较差异有统计学意义，表明体内病毒复制越严重，免疫炎性因子活动程度越高，同时也会正反馈导致肝损伤。

肝功能指标包括ALT、AST、GGT，当肝细胞受损、肝细胞膜通透性升高，血清中酶含量增加，是衡量肝细胞受损程度的常用指标[10，11]，综合分析HBV-DNA水平及肝功能指标,才能更加客观和准确地评估病情的变化、严重程度[12]。随着HBV-DNA载量增高，乙肝患者血清酶活性水平也随之升高，表现为高载量组>中载量组>低载量组>阴性组，各组间差异有统计学意义。

ALT、TNF-α、IL-6三者相关性良好，这可能因为乙肝病毒造成肝细胞损伤，通透性增加，转氨酶和炎性因子激发机体免疫反应[13]，其血清浓度越高，预后越严重。这说明炎性因子在乙肝的发生、发展及预后中发挥重要作用, 因此, 在疾病诊治中，应联合相关炎性因子和肝脏酶学等指标综合检测，对评价预后及转归都有较大的实用价值，对这些问题的深入研究将有助于为乙肝治疗开辟新的广阔空间。

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4 齐育英,林振忠,明德松.IL-6、IL-10、IL-17在慢性乙型病毒性肝炎患者血中水平分析[J].中国免疫学杂志,2013,29(11):1177-1180.

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7 郑林华,楚金东,谭灵,等.自体外周血干细胞移植对乙肝相关终末期肝病患者免疫功能的调节作用[J].细胞与分子免疫学杂志,2013,29(4):407-410.

8 齐育英,林振忠,明德松.IL-6、IL-10、IL-17在慢性乙型病毒性肝炎患者血中水平分析[J].中国免疫学杂志,2013,29(11):1177-1180.

9 Del Papa B,Sportoletti P,Cecchini D,et al.Notch1 modulates mesenchymal stem cells mediated regulatory T-cell induction[J].Eur J Immunol,2013,43(1):182-187.

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12 高慧,何金花,崔美玲,等.乙型肝炎病毒DNA阳性的乙型肝炎携带慢性肝炎肝硬化肝癌患者检测病毒载量丙氨酸转氨酶天冬氨酸转氨酶及甲胎蛋白的意义[J].实用医技杂志,2013,20(2):117-119.

13 郑林华,时永全,韩英.T淋巴细胞亚群与慢性乙型肝炎的关系[J].中华肝脏病杂志,2012,20(1):75-77.

RelationshipbetweendifferentHBV-DNAloadofchronichepatitisBandinflammatoryfactor,liverfunctionenzymes

ZHOUYanfei,GONGJie,ZHANGXiaomei.

DepartmentofInfection,theFifthHospitalofWuhanCity,Wuhan430050,China

ObjectiveTo investigate the relationship between serum in patients with chronic hepatitis B of different HBV-DNA load and inflammatory factor, liver function enzymes.MethodsSeventy-eight cases of chronic hepatitis B patients were

real-time fluorescence quantitative PCR detection of serum HBV-DNA load, and then they were divided into negative group (17 cases), low load group (30 cases), median load group (19 cases), high load group (12 cases). High sensitivity C reactive protein (Hs-CRP), tumor necrosis factor alpha (TNF-α), interleukin 6 (IL-6), liver function enzymes (ALT, AST, GGT) level were compared among the four groups, and to explore the correlation among these factors.ResultsAlong with the increase of HBV-DNA load, TNF-α, IL-6 were significantly increased, revealed as high load group > median load group > low load group > positive group, there was statistically significant difference among these groups (P<0.05). No statistical significance were found within group (P>0.05). There were no significant differences between median and low load group of the levels of serum hs-CRP(P>0.05), the difference between the rest 2 groups was statistically significant(P<0.05). Comparison of serum ALT, AST, GGT levels among these groups, it showed as high load group>median load group>low load group > negative group, there was significant difference among these groups (P<0.05). ALT and TNF-α, IL-6 were positive correlated (r=0.68,r=0.56,P<0.05); there is no correlation between ALT and hs CRP (r=0.23,P>0.05).ConclusionInflammatory cytokines have an important role in the pathogenesis of hepatitis B, comprehensive detection of serum inflammatory cytokines and liver enzymes have significant for understanding the immune status of hepatitis B in vivo, clinical diagnosis and prognosis.

Hepatitis B virus DNA; High sensitivity C reactive protein; Tumor necrosis factor α; Interleukin 6; Alanine aminotransferase; Aspartate aminotransferase; Glutamate transferase

430050 武汉市第五医院医院感染管理科(周燕飞)，检验科(龚杰)，感染科(张晓梅)

10.3969 / j.issn.1671-6450.2014.08.012

2014-03-25)