液质联用测定氟尼辛葡甲胺的条件优化*

宋金翠杨成 刘艳荣

（国家农副加工产品及白酒质量监督检验中心，山西省食品质量安全监督检验研究院，山西太原030012）

液质联用测定氟尼辛葡甲胺的条件优化*

宋金翠**杨成 刘艳荣

（国家农副加工产品及白酒质量监督检验中心，山西省食品质量安全监督检验研究院，山西太原030012）

建立了液相色谱-四级杆串联质谱法测定氟尼辛葡甲胺含量的方法,对其检验条件进行了优化。采用Agilent eclipse plus C18色谱柱分离，用体积浓度0.1%甲酸溶液、0.1%甲酸乙腈溶液作为流动相梯度洗脱，电喷雾正离子（ESI+）模式电离，多反应监测（MRM）模式检测，外标法定量。该方法操作灵敏度高，重复性好。

液相色谱-四级杆串联质谱法；电喷雾；氟尼辛葡甲胺；测定

氟尼辛葡甲胺（flunixin meglumine）是一种新型的、非甾体类动物专用的解热镇痛药物。目前非甾体抗炎药的检测方法主要有毛细管电泳法、气相色谱法、高效液相色谱法、气相色谱-质谱法和液相色谱-质谱法。但利用液相色谱-四级杆串联质谱法（LC-MS／MS法）测定氟尼辛葡甲胺的分析方法尚未见报道。

由于氟尼辛葡甲胺的极性较强，采用HPLC分析时，出峰时间很短，很难排除样品基质的干扰。因此，本研究采用液相色谱-四级杆串联质谱法（LC-MS／MS法）测定氟尼辛葡甲胺，并对色谱条件和质谱条件分别进行了优化，所建立的方法具有灵敏度高，重复性好的特点，能够满足现行兽药残留分析的要求。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

1.1.1 仪器

Agilent G6410B液质联用仪，美国Agilent公司；NM32LA氮气发生器，英国PEAK公司。

1.1.2 试剂

色谱用水，符合GB/T 6682规定的一级水，其他用水为符合GB/T 6682规定的三级水；乙腈、甲醇，色谱纯，美国DIKMA公司；甲酸，分析纯，天津化学试剂三厂；氟尼辛葡甲胺标准品，CAS号为42461-84-7，纯度≥99.0%，化学式为C14H11F3N2O2·C7H17NO5，分子量为491.46，购于美国Dr.E公司；微孔滤膜，孔径0.22 μm，有机相。

1.2 分析方法

1.2.1 色谱条件

色谱柱：Agilent eclipse plusC18柱（2.1 mm× 100 mm，3.5 μm）；流速：0.3 mL/min；进样量：10 μL；流动相：A相为体积浓度0.1%甲酸水溶液，B相为0.1%甲酸乙腈溶液；梯度洗脱：0 min，5%B相；2 min，5%B相；8min，50%B相；10 min，95%B相；13 min，95%B相；13 min，5%B相。

1.2.2 质谱条件

ESI电喷雾离子源；毛细管电压3.0kV；正离子扫描；雾化器压力：3.1 MPa；Gas Temp：350℃；Gas Flow：10L/min；碎裂电压：135V；碰撞能量：20eV。

MS1 Heater：100℃；MS2 Heater：100℃；监测模式：多反应监测（MRM）;MRM离子对：m/z为297.10/279.10，297.10/264.10。

2 结果与讨论

2.1 色谱条件的优化

2.1.1 色谱柱的选择

氟尼辛葡甲胺含有羟基和氨基，极性较大，故选用现有的Agilent eclipse plus C18柱（2.1 mm× 100 mm，3.5 μm）能够更好地达到分离效果，且利用液相色谱-四级杆串联质谱法（LC-MS/MS）可以不要求有很高的分离度。

2.1.2 流动相溶剂的选择

流动相通常以水作基础溶剂，再加入一定量的能与水互溶的极性调整剂，如甲醇、乙腈等。

一般情况下，甲醇-水系统已能满足多数样品的分离要求，且流动性粘度小，价格低，是反相色谱最常用的流动相。乙腈-水系统，与甲醇相比，乙腈的溶剂强度较高，且粘度较小。综合上述条件，乙腈-水系统优于甲醇-水系统。

2.1.3 流动相洗脱条件的优化

流动相采用等度洗脱，A相（体积浓度0.1%甲酸水）和B相（体积浓度0.1%甲酸乙腈）的体积比为5∶95时，出峰时间太早（约1.372 min），如图1所示。

图1 等度洗脱条件下氟尼辛葡甲胺的多反应监测图

综合考虑峰形和基质效应，流动相采用梯度洗脱（A相和B相作为流动相，乙腈比例在5%～95%范围内）时，分析结果如图2所示。

图2 梯度洗脱条件下氟尼辛葡甲胺的多反应监测图

考虑到实际检测样品时时，样品中可能会含有强保留的干扰物，若使用等度洗脱，出峰时间太早，目标物和干扰物可能会在同一时间出峰，而达不到很好的分离效果；而使用梯度洗脱，可以延长出峰时间，从而能够使目标物和干扰物更好地分离，并且保持色谱及质谱系统的干净。因而本研究选择了0 min，5%B相；2 min，5%B相；8 min，50%B相；10 min，95%B相；13 min，95%B相；13 min，5%B相梯度洗脱。

2.2 质谱条件的优化

2.2.1 监测模式的选择

电离模式的选择主要由待测物的化学性质决定，极性强采用ESI电离方式，极性弱采用APCI电离方式。本研究对氟尼辛葡甲胺选择ESI电离方式，分别进行正、负离子模式的MS2 Scan扫描，在12.63 min附近出现了特征分子离子峰，且在相同浓度条件下正离子模式的响应明显高于负离子模式，结果如图3所示。

图3 正离子（A）、负离子（B）两种监测模式的比较

2.2.2 定量离子、定性离子的选择

在电喷雾离子源正离子扫描模式下，以流动注射方式对氟尼辛葡甲胺进行母离子扫描，再对它的子离子进行全扫描，选择响应值高的特征离子对作为定量及定性离子对，母离子m/z为297.10；子离子m/z为279.10、264.10，其中279.10为定量离子，结果如图4所示。

图4 氟尼辛葡甲胺的一级（A）、二级（B）质谱图

2.2.3 碎裂电压的优化

碎裂电压作用于毛细管出口，如果碎裂电压太小，母离子得不到裂解，如果碎裂电压太大，则造成母离子源内裂解。在一定的范围内碎裂电压越高，碎裂效果越显著，在50 V～200 V范围内对碎裂电压进行优化，母离子响应随着碎裂电压的不同而改变，当碎裂电压为135 V时离子强度最大，结果如图5所示。

图5 不同碎裂电压下母离子响应的比较

2.2.4 碰撞能量的优化

碰撞能量的大小影响子离子的丰度。试验结果表明，碰撞能量在10 eV～40 eV的范围内，随着碰撞能量的增大，母离子丰度逐渐降低，在CE≥30 eV时母离子消失，在CE=20eV时，子离子279.10丰度最大，在CE=35eV时，子离子264.10丰度最大。

2.3 标准曲线的制作

准确称取氟尼辛葡甲胺0.01 g，用甲醇溶解定容至100 mL，配制成0.1 mg/mL的标准储备溶液。再用甲醇逐级稀释成0.1 ng/mL、0.2 ng/mL、0.5 ng/mL、1.0ng/mL、5.0ng/mL、10 ng/mL、50 ng/mL的系列标准溶液，进样体积为10 μL，按质量浓度由低到高进行测定。以质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，氟尼辛葡甲胺标准溶液的标准系列质谱图和标准曲线分别见图6和图7。

图6 氟尼辛葡甲胺标准系列质谱图

图7 氟尼辛葡甲胺标准曲线

由标准曲线可以看出，在0.1 ng/mL～50.0 ng/mL浓度范围内具有良好的线性关系，相关系数大于0.999。

3 结论

本试验通过对色谱条件和质谱条件的摸索和优化，建立了氟尼辛葡甲胺检测的液相色谱-四级杆串联质谱（LC-MS/MS）分析方法，并能够进行准确的定性和定量测定。该方法在0.1 ng/mL～50 ng/mL的质量浓度范围内线性良好，相关系数大于0.999。试验表明，该方法操作灵敏度高，重复性好，可用于氟尼辛葡甲胺的检测分析，也可为动物源性食品中氟尼辛葡甲胺残留量的检测提供参考。

［1］康永锋，邹世文，段吴平，等.鲫鱼中4种非甾体抗炎药残留的分析研究［J］.安徽农业科学，2011，39（1）：286-288.

［2］彭涛，于静，严矛，等超高效液相色谱-电喷雾串联质谱法同时测定猪肝中非甾体类抗炎药残留［J］.分析化学研究报告，2009，37（3）：363-368.

［3］李存，江潇潇，吴银良，等.液相色谱串联质谱法测定牛组织中氨丙啉残留量［J］.分析化学研究简报，2011，39（4）576-579.

Optimization for determination condition offlunixin meglumine by LC-MS/MS

SONGJin-cui**YANGCheng LIUYan-rong
（National quality supervision and inspection center of subsidiary agricultural products and spirits，Food qualitysupervision and inspection academy of Shanxi province，Shanxi Taiyuan 030012，China）

The determination method of Flunixin meglumine byLC-MS/MSwas established and the determination condition was optimized.Flunixin meglumine was separated with C18（2.1 mm×100 mm，3.5 μm）column using 0.1% formic acid aqueous solution、0.1%formic acid acetonitrile solution as a gradient elution mobile phase.It was ionized under positive ion pattern by Electrospray Ionization Source（ESI+），detected byMultipleReaction Monitoring（MRM）and quantified byexternal standardmethod.

liquid chromatographic-tandem mass spectrometric method（LC-MS/MS）；electrospray；flunixin meglumine；determination

TS207.3

A

1673-6044（2014）02-0055-03

10.3969/j.issn.1673-6044.2014.02.020

*基本项目：国家质检总局科技计划项目“食品中氟尼辛葡甲胺的串联液质色谱方法的研究”（2010QK263）。

**宋金翠，女，1970年出生，2005年毕业于沈阳农业大学食品科学专业，硕士，高级工程师。

2014-03-30