FOXM1转录因子在人宫颈癌组织中的表达及其临床意义＊

刘 波，黄世峰，袁 虹

（重庆医科大学附属第一医院：1．烧伤科／医疗美容科；2．检验科；3．妇产科 400016）

宫颈癌是女性主要恶性肿瘤之一，其发病率在发达国家位于恶性妇科肿瘤第3位，在中国则位于第2位［1］。每年全世界50余万新发病例中大约1／3来自中国。人乳头瘤病毒（HPV）感染在宫颈癌发病中起重要作用，是宫颈癌的重要危险因素［2-3］，但单纯HPV感染并不足以引起宫颈上皮细胞的恶性转化［4］和宫颈癌的发生［5］。因此，推测在宫颈组织低级别病变，即宫颈上皮内瘤样病变（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）向侵袭性宫颈癌转化的过程中必定涉及其他影响癌基因、抑癌基因或信号转导通路的细胞遗传学改变。

FOXM1转录因子是FOX基因家族中的一个重要成员，仅特异性表达于增殖期细胞中，在细胞增殖、分化和凋亡过程中发挥关键性作用［6］。FOXM1与胚胎发育、衰老、再生和肿瘤等许多病理生理过程均有密切关系，可通过对细胞周期相关因子的调控而促进细胞周期G1期向S期、G2期向M期过渡，并诱导细胞发生有丝分裂［7］。新近的研究证实，FOXM1异常表达与多种人类恶性肿瘤包括肝癌［8］、乳腺癌［9］、肺癌［10］和膀胱癌［11］等的发生和发展均有密切关系，是肿瘤增殖所必需的转录因子，其表达水平常与肿瘤的恶性进展程度相关，已成为临床肿瘤治疗的一个新靶点［12］。然而，FOXM1在宫颈癌组织中的表达情况及其在宫颈癌发生和进展过程中的临床意义尚未见报道。本研究旨在通过检测宫颈CIN和鳞状细胞癌组织中FOXM1表达情况，评估FOXM1与宫颈癌临床病理学参数间的相关性。

1 资料与方法

1．1 一般资料 收集2013年1～6月在重庆医科大学附属第一医院妇产科进行宫颈活检或手术治疗、且未经放化疗的初诊住院患者组织标本77例，包括17例正常宫颈组织、22例CIN标本、38例宫颈癌标本，标本类别均经病理学检查确诊。所有患者临床资料完整，年龄25～71岁，平均47．6岁。

1．2 FOXM1和Ki-67免疫组织化学染色检测 小鼠抗人FOXM1单克隆抗体和小鼠抗人Ki-67单克隆抗体均购自Santa Cr uz公司，S-P免疫组织化学试剂盒购自北京中杉生物技术有限公司。严格参照试剂盒说明书进行免疫组织化学染色操作。

参照参考文献［10］将FOXM1染色结果计为0～3分。0分：细胞核和细胞质均未染色（-）；1分：细胞质染色为主（＋）；2分：异质性染色即细胞质和细胞核混合染色（＋＋）；3分：连续的细胞核染色（＋＋＋）。0分判为FOXM1表达阴性，1～3分者均判为阳性表达。Ki-67抗原均定位于细胞核，以细胞核呈清晰棕黄色染色为阳性。按切片中阳性细胞数的比例划分染色等级：无明确阳性细胞为（-）；阳性细胞数小于10%为弱阳性；阳性细胞数大于10%为强阳性。

1．3 统计学处理 FOXM1与临床病理学参数的相关性分析采用SPSS13．0软件进行分析处理。分类数据采用Pearson′s χ2检验或Fisher′s精确概率法进行统计分析，以P＜0．05为差异有统计学意义。

2 结 果

2．1 正常宫颈组织、CIN组织和宫颈鳞状细胞癌组织中FOXM1表达情况比较 采用免疫组织化学染色方法对正常宫颈组织、CIN组织和宫颈鳞状细胞癌组织标本中FOXM1表达情况进行检测。结果显示，FOXM1在正常宫颈、CIN和宫颈癌组织中的异常表达率分别为5．88%、63．6%和92．1%（表1）。正常宫颈上皮组织中FOXM1染色均为阴性或弱阳性，阳性染色仅见于基底膜下层和中间层宫颈组织中（图1A）；而宫颈癌组织细胞核内FOXM1出现高表达（图1C）；CIN组织中FOXM1表达程度介于正常组织和宫颈癌组织之间（图1B），且CIN组织内FOXM1表达水平呈现从CINⅠ向CINⅢ逐渐增强的趋势（图2），提示FOXM1表达仅局限于增殖性宫颈上皮细胞中，且其表达水平与宫颈癌的恶性进展显著相关。

表1 宫颈鳞状细胞癌组织中FOXM1和Ki-67 表达结果分析［n（%）］

图1 正常宫颈、CIN和宫颈癌组织FOXM1免疫组织化学染色检测结果（×200）

图2 不同病变级别CIN组织中FOXM1免疫组织化学染色检测结果（×200）

2．2 宫颈鳞状细胞癌组织中FOXM1表达水平与Ki-67表达水平的相关性分析 Ki-67是一种常用于对包括宫颈癌在内的恶性肿瘤病变的增殖情况进行评估的标记物。为进一步研究FOXM1在宫颈癌进展中的作用，本研究进一步通过免疫组织化学染色方法检测了Ki-67在以上各种宫颈组织标本中的表达情况。研究结果显示，与FOXM1表达情况类似，绝大多数正常宫颈上皮组织中Ki-67表达为阴性或仅见微弱表达（表1）。使用10%作为临界值时发现36例（94．8%）宫颈癌组织标本中Ki-67为强表达，而仅2例（5．2%）为Ki-67低表达（表1）。通过对FOXM1和Ki-67的表达类型进一步分析发现，在所有宫颈癌组织中FOXM1染色增强与Ki-67阳性增殖细胞比例呈强相关性（图3），即FOXM1表达与宫颈癌组织中较高的Ki-67阳性增殖分数相关（表2）。以上结果提示FOXM1过表达于高度增殖的人宫颈癌组织中。

2．3 FOXM1表达水平与宫颈癌患者临床病理学参数间的相关性分析 临床病理学相关性分析显示，宫颈癌组织中FOXM1阳性表达与肿瘤较晚的分期、较低的病理分化程度和术后复发均显著相关，但与患者年龄、放疗敏感性以及HPV感染等均无显著相关性（表2）。

图3 同一张宫颈癌病理组织切片中FOXM1和Ki-67免疫组织化学染色结果

表2 宫颈鳞状细胞癌组织中FOXM1表达情况及其与 患者临床病理学参数相关性分析

3 讨 论

FOXM1是一种典型的增殖相关性转录因子，在细胞增殖、分化和凋亡过程中起重要作用。FOXM1在不同组织起源的多种人类肿瘤，如肝细胞肝癌［8］、乳腺癌［9］、肺癌［10］、膀胱癌［11］等恶性肿瘤中均普遍上调，并与肿瘤的发生和恶性进展显著相关。宫颈鳞状细胞癌源于宫颈上皮细胞，通过系列增殖性改变由CIN病变进展所致。

本研究采用免疫组织化学方法检测了正常宫颈上皮组织、CIN组织和鳞状细胞癌组织标本中FOXM1的表达情况，并结合患者临床病理学资料对FOXM1在宫颈癌发生、发展中的临床意义进行了评估。结果显示，正常宫颈、CIN和宫颈癌组织中FOXM1的检出率分别为5．88%、63．6%和92．1%。FOXM1在正常宫颈上皮组织中不表达或仅微弱表达，而在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ和宫颈鳞状细胞癌等组织中，其表达水平随着细胞增殖程度的增加及细胞恶性程度的进展而逐渐增强；FOXM1异常表达与宫颈癌恶性病变增殖性标记物Ki-67的表达水平高度相关。此外，FOXM1的表达水平与宫颈癌的病理分化程度、临床分期和术后复发等病理学参数亦显著相关。以上研究结果提示FOXM1在宫颈癌的发生和进组按每一髋作为单元统计手术时间为展中起重要作用，可能成为一个与Ki-67类似的宫颈癌预后标记物。FOXM1已被证实与各种肿瘤的多种临床病理学参数显著相关。Calvisi等［13］研究发现，在大鼠和人肝癌形成过程中出现FOXM1过表达，且FOXM1表达水平与肝癌细胞的增殖指数呈正相关；在肺鳞状细胞癌中，FOXM1过表达被证实与肿瘤细胞的分化程度和患者预后等均显著相关［10］。Huang等［14］研究证实，胰腺癌中FOXM1过表达可促进肿瘤发生上皮-间质转化、侵袭和转移；在大肠癌中，FOXM1信号通路活化可促进肿瘤进展和转移［15］。本研究则进一步证实FOXM1表达与宫颈鳞状细胞癌病理学分化程度及临床分期均显著相关，FOXM1检测有助于对宫颈癌患者预后进行早期预测。

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