环保生物组织透明脱蜡剂代替二甲苯在病理技术中的应用

节 妍妍

(保定市第一中医院病理科，河北保定 071000)

环保生物组织透明脱蜡剂代替二甲苯在病理技术中的应用

节 妍妍

(保定市第一中医院病理科，河北保定 071000)

环保透明剂;二甲苯;组织透明;脱蜡

病理技术的首要任务是制作优良的切片。而在HE常规石蜡制片技术中，组织透明、切片脱蜡、透明、封固剂制备都离不开透明脱蜡剂的使用，透明、脱蜡效果的好坏直接影响石蜡制片的质量。透明脱蜡剂是病理制片必须应用的有机溶剂，常规组织石蜡制片技术过程中常用的二甲苯作为透明脱蜡剂具有脱蜡彻底，透明能力强，时间短的优点，但也有容易使病理组织收缩、变脆，不同组织透明时间不同，不易掌握的缺点，而且二甲苯属于中度毒性的化学试剂，会对长期在二甲苯环境下工作的技术人员的身体健康造成损害，并对环境造成污染[1]。环保生物组织透明脱蜡剂(以下简称环保透明剂)能与水、乙醇及石蜡混合，兼有透明和脱蜡作用。我院病理科尝试应用环保透明剂代替二甲苯应用于组织透明、脱蜡，获得的组织块收缩小，软硬适中，易于切片，透明时间宽泛，作用温和，适用于不同组织，而且对环境没有污染，对人体没有毒性作用，取得的结果非常满意，现介绍如下:

1 材料与方法

1.1 材料 我院2011年10月-2012年10月临床送检的病理组织标本，包括子宫肌瘤、阑尾、胆囊、甲状腺、皮肤、淋巴结、食管、胃、肠、乳腺肿物、子宫内膜、宫外孕等组织共400例，每例切片2张，应用环保透明剂和二甲苯作为透明脱蜡剂制片各400张。

1.2 试剂 环保透明剂:(台资)珠海贝索生物技术有限公司;二甲苯:分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司;高效切片石蜡:上海华灵康复器械厂出品，上海医科大学病理教研室监制;苏木素:天津市大茂化学试剂厂;伊红:天津市科密欧化学试剂有限公司;中性树胶:中国上海懿洋仪器有限公司。

1.3 仪器设备 全自动生物组织脱水机(JTS-120P型)、组织摊烘片机(TP-D型)、生物组织包埋机(JBM-A型)，天津久圣医疗电子仪器有限公司;德国Leica石蜡切片机(RM-2235型);电热恒温干燥箱(SKG-02型)，湖北黄石市医疗器械厂。

1.4 操作方法

1.4.1 组织固定、脱水、透明及浸蜡:选取的400例病理组织标本用同一批次配制的10%中性福尔马林液固定6-8小时，经病理医师取材成2cm×1.5cm×0.2cm大小组织块，每例标本取材2块分成二组，分别放入装有环保透明剂和二甲苯的全自动生物组织脱水机中，按常规脱水程序进行脱水、透明和浸蜡。环保透明剂组仅在二甲苯组用时15-25分钟的基础上，再延时15分钟左右。

1.4.2 包埋、切片、脱蜡和染色:使用与浸蜡相同的石蜡，包埋机包埋。Leica切片机连续切片，每块切片2张，切片厚度为5 μm。常规烤片，温度65℃，时间40min。然后分两组行HE染色，环保透明剂组用环保透明剂脱蜡、透明，二甲苯组用二甲苯脱蜡、透明。仅是在脱蜡、透明过程中，环保透明剂组用时均比二甲苯组多10-15分钟。

2 结果

2.1 石蜡块评估 分别放置3个月、6个月、1年对制成的蜡块进行系统观察，详细记录组织块是否出现干燥、破碎、异味、回缩等情况，在1年后做出评估。结果见表1:

表1 两组标本石蜡组织块评估比较(1年)

2.2 透明、脱蜡及HE染色切片效果评估 细胞核均染成鲜明的蓝色，细胞质、纤维和肌组织等染成深浅不同艳丽的红色，核浆染色分明，对比清晰，充分显示出相应的组织细胞结构，达到优质HE切片的要求。两组透明、脱蜡、HE染色切片及环保效果比较见表2:

表2 两组透明、脱蜡、HE染色切片及环保效果比较

3 讨论

二甲苯作为病理石蜡制片中的透明脱蜡剂效果优良，但二甲苯具有较低的燃点(25℃)和沸点(137-143℃，100kpa)，极其易燃、易挥发[3]。研究发现，长期使用二甲苯可以对机体造成更多危害:吸入二甲苯蒸气可引起眼、鼻、喉的刺激;通过呼吸道吸入和皮肤接触二甲苯，可损害神经系统，尤其是对血液系统造成损害;长期接触可引起神经衰弱综合征和植物神经功能紊乱，以及皮肤黏膜刺激症状，还可引起免疫功能低下、贫血、白细胞减少、皮炎、湿疹和皮肤干燥，尿中也可出现蛋白管型等;吸入高浓度的二甲苯可致严重的呼气困难，甚至死亡[4-5]。卫生部在《工业企业设计卫生标准》中对二甲苯的最高容许浓度做了具体规定，并把二甲苯中毒定为职业病之一[6]。因此，需要一种优质且无毒的试剂替代二甲苯。

本研究中使用的环保透明剂是一种化学结构稳定的烷类生物油混合物，是不含苯、甲苯、二甲苯类的绿色有机溶剂，燃点196℃、沸点250℃(100kpa)，无明显挥发性，加热也不会产生对人体不利的有害气体，符合GB18583-2001标准要求，它既具有二甲苯的与乙醇、石蜡及树胶互溶的物理特点，又没有二甲苯的毒性作用[3]。而且，它还有以下几点优于二甲苯:①燃点高，较小的火灾隐患;②对组织的收缩作用比二甲苯小，利于真实反应组织结构;③组织透明效果软硬适中，对于含纤维较多的致密组织(子宫肌瘤、纤维瘤、皮肤等)、血块、子宫内膜和淋巴结等日常工作中的切片难点，也不会造成过硬、变脆，切片困难，对病理诊断有较高的实用价值，切片组织也可在环保透明剂中停留相对较长时间不致受损，容易切出3-5μm的完整切片。同时，经环保透明剂透明脱蜡后的组织切片进行HE染色、免疫组化染色和特殊染色能清晰显示组织细胞结构和其它组织成分，如网状纤维、胶原纤维、中性粘液物质和基底膜等，也能很好的将组织中的特异性抗原显示出来，背景清楚干净，无特异性着色，定位准确，制片效果优良，与二甲苯没有明显差别[3]。

环保透明剂的缺点是价格较贵，使用有效期较二甲苯短。为此，在工作中为节约开支，我们大约每月更换一次试剂，并做记录，每次更换试剂时，仅把第一缸环保透明剂倒掉，第二缸环保透明剂作为下一次制片时的第一缸，以此类推，最后一缸换上新试剂。这样不但可以降低成本，组织脱水、透明时试剂的浓度梯度间隔更小，过程更加柔和，也起到了更好的缓冲作用。

本研究表明，采用环保透明剂制作病理组织切片效果与二甲苯制片效果相当，组织块长期保存效果良好，不会对组织细胞结构和组织细胞内其它成分(如组织抗原)造成破坏，能够制作出符合临床病理诊断和科研要求的优质切片;同时，符合实验室环保要求，利于工作人员的身体健康，完全可以替代二甲苯应用于病理制片技术中。

[1]王晓萌，丁洋，王晓梅，等.正丁醇替代二甲苯在组织脱水与透明中的应用[J].临床与实验病理学杂志，2011，27(12): 1371-1372.

[2]罗小平，赖均鹏，吕志倩，等.环保型BT生物组织透明剂替代二甲苯在病理组织透明中的应用及比较[J].临床与实验病理学杂志，2011，27(8):903-904.

[3]兰淼，李艳红，巩丽，等.环保透明剂替代二甲苯在病理制片技术中的应用[J].陕西医学杂志，2012，41(10):1306-1307.

[4]马锡慧，石炳毅，韩永，等.环保脱蜡液替代二甲苯在肝肾标本病理制片中的应用[J].现代检验医学杂志，2012,27(4): 119-120.

[5]丁文清，潘小川.室内污染物与白血病关系研究进展[J].环境与健康杂志，2006，23(1):83-84.

[6]中华人民共和国卫生部.工业企业设计卫生标准[M].北京:人民卫生出版社，1979.1112.

(技术方法栏目编辑:张 健)

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