母羔自身因素与其超排卵母细胞数量的相关性分析

秦 雪，岳文斌，郑亚琳，张彩霞，任有蛇，张春香

（山西农业大学动物科技学院，太谷 030801）

繁殖与生理

母羔自身因素与其超排卵母细胞数量的相关性分析

秦 雪，岳文斌，郑亚琳，张彩霞，任有蛇，张春香

（山西农业大学动物科技学院，太谷 030801）

为讨论羔羊自身因素与其超排后卵母细胞数量的关系，选取6～8周龄的健康杜晋绵羊（杜泊羊×晋中绵羊♀）母羔31只，进行超数排卵，手术法收集卵母细胞，统计其卵母细胞数量，分析其与全同胞羔羊数、初生重、超排时体重的相关性。结果表明：全同胞羔羊数与卵母细胞数量呈极显著负相关（P<0.01），初生重与卵母细胞数量呈极显著正相关（P<0.01）；超排时体重与卵母细胞数量相关不显著（P>0.05）。全同胞羔羊数和初生重是羔羊超排卵母细胞数量的影响因素，但仍需进一步增加羔羊数量来验证。

全同胞羔羊数；初生重；超排时体重；超数排卵；羔羊

幼畜超数排卵的研究起始于20世纪50年代［1］。20世纪90年代以后，人们对幼畜卵泡发育进行了更为深入的研究。羔羊卵母细胞作为体外胚胎生产的试验材料，也越来越多地得到国内外的广泛关注。利用羔羊超数排卵的卵子进行体外授精，大大扩展了体外授精所需卵子的来源；同时与胚胎移植相结合［2］，可以大大缩短世代间隔，产生大量优秀后代，加速育种进程，大大缩短育种时间。Galli等［3］研究发现，将活体采卵技术与超数排卵相结合，可获得更多高发育能力的胚胎，从而产生优秀的后代。Ptak等［4］研究表明，1月龄羔羊超排效果最好，3月龄最差。Morton等［5］研究表明，6～7周龄羔羊比3～4周龄卵母细胞体外受精后的囊胚率高。但是目前应用羔羊卵母细胞进行胚胎生产的效率还很低，仍然需要进一步研究。同时，羔羊卵泡发育效果受许多因素的影响，如羔羊（母性遗传、营养水平、年龄）、激素处理方法、采卵方法等。但是关于羔羊自身因素（如全同胞羔羊数、初生重、超排时体重等）与超排卵母细胞数量的相关性，目前还没有系统的研究。因此，本试验选择6～8周龄的绵羊母羔进行超数排卵，统计其超排后卵母细胞数量，并与其自身因素进行相关性分析，为提高绵羊体外胚胎生产效率提供一定的理论依据。

1 材料与方法

1.1 母羔

母羔选自山西农业大学牧站实验基地，品种为杜晋绵羊，年龄6～8周龄，体重相近，营养及健康状况良好，共31只，其中单羔15只，双羔10只，三羔6只。

1.2 超数排卵处理

试验组2 d共4次注射FSH，注射剂量8 mL，每天分别早晚各注射1次，每次注射量2 mL。第1天为上午10：00和下午5：00，第2天为上午9：00和下午5：00。最后1次注射FSH时同时注射PMSG400 IU。

1.3 测定指标及方法

收集母羔的全同胞羔羊数，称取初生重以及超排时体重。羔羊空腹24 h后，用静松灵以0.02 mg/kg剂量进行麻醉，采用常规手术方法采卵，外科手术方法打开腹腔，用食指和中指拉出子宫和卵巢，用游标卡尺测量卵巢表面可见的卵泡直径，记录两侧卵巢上的可用卵泡数（直径大于2 mm），用一次性注射器抽吸直径大于2 mm卵泡中的卵母细胞。采卵结束后，用37℃生理盐水冲洗卵巢并滴入适量5%碘甘油以防止粘连。将吸取的卵泡液收集在预先加入捡卵液的培养皿中，在显微镜下将收集到的卵母细胞捡出并按形态学分级法以A、B、C和裸卵进行等级划分、记数。

1.4 统计与分析

用SPSS 13.0统计软件的Correlation模块对超排卵母细胞数与全同胞羔羊数、初生重以及超排时体重进行相关性分析。

2 结果与分析

2.1 超排卵母细胞数与全同胞羔羊数的关系

从图1的趋势上可以看出，全同胞羔羊数与超排卵母细胞数呈极显著负相关（P<0.01），其相关系数-0.526。统计结果显示，胎产单羔平均收获卵母细胞66.2个，双羔平均收获46.3个，三羔平均收获14.33个。

图1 收获卵母细胞数与全同胞羔羊数关系图

2.2 卵母细胞数与初生重的关系

从图2可以看出，超排卵母细胞数与初生重呈极显著正相关（P<0.01）。同胞数为3个的母羔初生重小，超排后收获的卵母细胞数量也较少。

图2 收获卵母细胞数与初生重关系

2.3 卵母细胞数与超排时体重的关系

从图3可以看出，超排后收获的卵母细胞数与超排时体重相关不显著（P>0.05）。

图3 收获卵母细胞数与超排时体重关系

3 讨论

3.1 羔羊年龄

Earl等［6］报道，母羊在妊娠期的135 d开始，胎儿卵巢上才开始出现有腔卵泡，出生时数量明显增加。卵泡发育在羔羊出生后4～8周龄时达到高峰，但随着青春期

的到来开始减少。本试验选取的6～8周龄羔羊超排卵母细胞数达到了预期效果，说明选用6～8周龄的羔羊超排是可行的。

3.2 注射方案

闫文龙等［7］在山羊上研究发现，采用FSH+LH所产生的超排效果明显且稳定。吴海凤等［8］用FSH+PMSG和FSH+LH两种处理对6月龄的甘肃高山细毛羊进行了超数排卵试验，结果表明，FSH+PMSG方案获得发育卵泡数显著高于FSH+LH方案。FSH在体内的半衰期短，需要多次注射；PMSG单独使用会导致未排卵的卵泡数量增加，影响效果。所以本试验采用的FSH+PMSG注射方法效果显著。这说明在今后对羔羊超排的方案中采用FSH+PMSG注射的方法是可行的，可重复性强，但其作用原理今后仍需进一步深入讨论。

3.3 全同胞羔羊数

本试验统计了全同胞羔羊数为单羔、双羔及三羔的羔羊超排后卵母细胞的数量，结果发现全同胞羔羊数与卵母细胞数量呈显著负相关，全同胞羔羊数为单羔的羔羊超排效果最好，双羔次之，三羔最差。这说明全同胞羔羊数对羔羊的超排效果有一定的影响。单羔效果最好，可能是由于单羔在发育过程中获得的营养状况等优于双羔及三羔的平均值，或者是由于母体的遗传差异造成的，其作用原理还需进一步研究。但是在实际中，为了提高母羊的繁殖率，还是鼓励多选用产多羔的母羊进行繁育，以提高群体的繁殖率及产羔率，从而提高经济效益。

3.4 羔羊初生重和体重

影响超排效果的动物因素主要包括个体和遗传的差异、生理和营养状态、季节等。代相鹏等［9］的研究结果表明，体重和超排季节对供体超排效果没有显著影响。刘太宇等［10］的研究结果表明，授精方式、超排季节、生育状况等因素对超排效果没有显著影响。本研究统计了羔羊的初生重和超排时体重对超排后卵母细胞数量的影响，结果显示超排卵母细胞数与初生重呈极显著正相关（P<0.01），但其与超排时体重相关不显著（P>0.05），这说明超排时体重不是影响羔羊超排效果的主要因素。但是在实际生产实践中，还是应该选择初生重大及超排时体重良好的羔羊进行超数排卵，这些羊的体况及营养状况都能够达到更好的水平，有助于提高羊群的质量。

［1］MardenWGR.Thehormonecontrolofovulationinthecalf［J］.Agricultural Science，1953，43:381-412.

［2］KellyJ M，David O，Simon K，et al.Enhanced efficiencyin the production of offspring from 4-8-week-old lambs［J］.Theriogenology，2005，63：1876-1890.

［3］Galli C，Crotti G，Notan C，et al.Embryoproduction byovumpick up from lice donors［J］.Theriogenology，2001，55：1341-1357.

［4］Ptak G，Tischner M，Bernabo N，et al.Donor-dependent developmental competence of occytes from lambs subjected to repeated hormonal stimulation［J］.BiologyofReproduction，2003，6：278-285.

［5］Morton K M，Catt S L，Maxwell W M，et al.Effects of lamb age，hormone stimulation and response to hormone stimulation on the yield and in vitro developmental competence ofprepubertal lamb oocytes［J］.Reproduction，Fertilityand Development，2005，17：593-601.

［6］Earl CR，Irvine BJ，Rowe J P，et al.Production of in vitro matured oocytes from 6-week old calves［J］.Proceedings of the Australian Society for Reproduction Biology，1994，26：15-17.

［7］闫文龙，张锁链，王建国.山羊超数排卵及鲜胚移植研究［J］.河南农业科学，2003，12：53-55.

［8］吴海凤，李发弟，常卫华，等.羔羊超数排卵及体外受精技术研究［J］.甘肃农业大学学报，2011，12（6）：1-5.

［9］代相鹏，侯战亮，王锋，等.体况和季节等因素对供体波尔山羊超排效果的影响［J］.家畜生态学报，2006，27（2）：28-33

［10］刘太宇，靳双星，张桂枝，等.影响山羊超排效果的因素研究［J］.中国农学通报，2006，22（9）：27-30.

过刊征订

1.《中国草食动物》杂志1999年（1～6期）21元，2000～2002年（1～6期）27元，2003年（2～6期）33元，2004～2008年（1～6期）39元，2009、2010、2011、2012年（1～6期）48元（均含挂号邮资）；

2.有2002、2003、2004、2005、2006和2007年养羊专辑（包括品种、遗传、繁育、营养、市场等内容），价格分别为31、34、26、58、38、28元，含挂号邮资，数量有限，欲购从速；

3.请您汇款时务必写清楚通讯地址、邮政编码等事宜，以便准确投寄。

《中国草食动物科学》杂志社

Corelation between the Lamb Condition and Its Superovulation Oocyte Number

Qin Xue，Yue Wen-bin，ZhangChun-xiang，et al
（College ofAnimal Sciences and Technology，Shanxi Agricultural University，Taigu 030801，China）

In order to explore the relation of lamb’s own condition and oocyte number of superovulation，thirty-one Dorper× Jinzhong♀crossbred lambs aged 6-8-week-old were superovulated to collect oocytes，and the correlation between litter size，birth weight，weight of superovulation with oocyte number were analyzed.The results showed that there was significant negative correlation between litter size and oocyte number（P<0.01）；there was significant positive correlation between birth weight and oocyte number（P<0.01）；There wasn′t significant correlation between weight of superovulation and oocyte number（P>0.05）.It suggested that the litter size and birth weight might have effects on oocyte number ofsuperovulation in lambs.

litter size；birth weight；weight ofsuperovulation；oocyte；lamb

S826.3

A

2095-3887（2014）02-0014-03

10.3969/j.issn.2095-3887.2014.02.004

2014-01-07

山西省科技攻关计划项目（20110311029）

秦雪(1988-)，女，硕士研究生。

张春香（1972-），女，副教授，硕士生导师。