红玉柑微芽嫁接技术试验

李 丽，徐建国，罗君琴，柯甫志，聂振朋，徐昌杰

（1.浙江大学农业与生物技术学院,浙江杭州 310058；2.浙江省柑橘研究所,浙江黄岩 318020）

红玉柑微芽嫁接技术试验

李 丽1，2，徐建国2，罗君琴2，柯甫志2，聂振朋2，徐昌杰1

（1.浙江大学农业与生物技术学院,浙江杭州 310058；2.浙江省柑橘研究所,浙江黄岩 318020）

研究了茎尖大小、茎尖来源对红玉柑茎尖微芽嫁接成活率的影响。试验表明,以枳橙为砧木,微芽嫁接茎尖大小以含3～4个叶原基其茎尖微芽嫁接成活率较高。以成年态茎段诱导产生的不定芽作为接穗进行茎尖微芽嫁接,嫁接成活率较高,且成年态茎段试管诱导不定芽作为微芽嫁接接穗,解决了微芽嫁接受季节限制的问题。

杂柑；微芽嫁接；成年态茎段

随着国内外柑橘果品市场竞争的激化,各国都把选育高品质杂柑新品种作为增强竞争力的一种手段,因而优良性状的杂柑也被视为21世纪的主推品种,推广应用无毒苗亦是21世纪柑橘业可持续发展的重要生产环节,而柑橘茎尖微芽嫁接仍是获得无病毒苗木最有效的方法［1-5］。红玉柑是浙江省柑橘研究所以黄岩少核本地早为母本,刘本橙为父本人工杂交育成,是我国第1批柑橙优良杂种。本杂种具有丰产、耐贮藏的良好性状,生长势也特别强盛,尤其适合在贫瘠的山地栽培。红玉柑果大均匀,果皮橙黄色,鲜艳、光滑、果络少而松,汁液较多,风味浓郁,是一个有推广前景的优良杂柑品种。本试验旨在通过红玉柑微芽嫁接脱除黄龙病技术研究,以期为浙江地方特色柑橘的茎尖微芽嫁接脱毒成苗技术体系提供一定的技术依据,为浙江地方特色柑橘的生物技术研究创造条件。

1 材料与方法

1.1 试验材料

红玉柑、砧木种子和微芽嫁接接穗取自浙江省柑橘所试验基地。

1.2 试验方法

1.2.1 砧木苗的培养

枳橙为砧木。于秋季（9月）采摘卡里佐枳橙成熟果实用75%酒精擦洗作表面消毒,用保鲜袋装好,于4～5℃冷藏柜中贮藏备用。

从成熟的枳橙果实中剥取饱满的种子,用1 m o l·L-1的N a 0 H溶液浸泡10～15 min,软化种子表面的果胶,用清水冲洗直到果胶去除干净。在无菌条件下,用5%的N a C I 0溶液（V/V）对种子消毒10 min。用无菌水冲洗4～5次。在灭菌滤纸上剥除种子的内外种皮,接种于固体培养基（MT +糖30g·L-1）中,每试管接2～3粒种子。标注品种和日期,置（25±1）℃的恒温培养箱中暗培养14 d左右获得黄化苗,嫁接前1～2 d置自然光下锻炼,作为嫁接砧木［1］。

1.2.2 成年态茎段的离休培养

晴天午后取未自剪、半木质化的红玉柑夏秋新梢,剪去1.5～2.0cm茎段为外植体,自来水冲冼0.5 h,洗涤剂清洗3～5 min,70%酒精浸泡30 s,无菌水冲洗数次,10%N a C l 0溶液消毒10 min,无菌水冲洗3～5次,接种于芽诱导培养基（M T+B A 0.5 mg·L-1+I A A0.05 mg·L-1+G A30.5 mg·L-1）上,2～3周后,诱导茎段腋芽再生,建立试管内成年态茎段腋芽再生体系［3-4］。

1.2.3 接穗准备

7-8月夏、秋嫩梢抽发初期［5-6］,晴天午后2：00左右,取田间2.0～2.5cm长的未自剪的红玉柑嫩梢,装入洁净保鲜袋带回室内。先用自来水冲掉外植体表面的灰尘,再用洗洁精浸泡2 min,

用自来水冲洗干净,于超净工作台上切取1.0～1.5cm长茎尖外植物体,置于已灭菌锥形瓶中,用5%（V/V）N a C l 0溶液消毒5～10 min,无菌水冲洗3～5次后待用。

1.2.4 茎尖微芽嫁接

无菌条件下,选择茎较粗壮的13～14 d龄的黄化砧木苗,切去顶端和部分根端,留茎长2～3cm,留根长4cm,然后在砧木根颈上端1.5～2cm韧皮部开小三角形创口。在高倍体视显微镜下用嫁接刀尖剥取保留生长锥及1,2,3及4个叶原基的茎尖,嫁接到准备好的砧木上,用刀背按压使茎尖与砧木的横切口完全接合。嫁接好的试管苗置入滤纸桥支撑的MT+糖30g·L-1基本液体培养基中进行培养,培养温度保持在（25±1）℃,光照为2 000 l x,每天12～14 h。试验重复3次,接种后2～3周观察记录红玉柑微芽嫁接苗成活率及萌芽率。

1.2.5 嫁接苗移栽

待嫁接苗长出4～5片叶后便可进行移栽。将待移栽的嫁接苗在自然光下炼苗1周。在移栽前准备好培养土,成分为1/3珍珠岩+1/3蛭石+1/3泥炭,配好后高压灭菌。将经过高压灭菌的培养土分装在培养钵中。将嫁接苗从试管中取出,洗净根部的培养液,移栽入培养钵中。把试管中残留的培养液倒入培养钵,用清水浇灌,直到底部有水滴出。培养钵上罩以塑料袋,保持水分。移栽后3～8 d浇水1次。2周左右待嫁接苗生长稳定后,将上面的塑料袋去除。60～90 d后,苗木长大,移栽到大的培养钵中继续生长。

2 结果与分析

2.1 茎尖大小对微芽嫁接成活率的影响

表1显示,茎尖大小对茎尖微芽嫁接的成活率有明显影响。当茎尖含1～2个叶原基时,茎尖较易失水枯死,成活率最低,分别为0和16.7%；当茎尖含3个叶原基时,嫁接成活率为53.3%；茎尖含4个叶原基时,嫁接成活率最高,为73.3%；茎尖含5个及以上叶原基时,茎尖切面与砧木切面不能完全粘合,且嫁接切口愈合效果差,嫁接1周内即可发现茎尖褐变枯死,成活率和萌芽率均不理想。

嫁接4～6周后,各处理成活的嫁接苗每株取2～3片叶送本所检测中心检测黄龙病脱毒情况, P C R检测结果显示均不含黄龙病病原。

表1 不同茎尖大小微芽接成活率及萌芽率

2.2 不同来源茎尖对嫁接成活率的影响

由表2可知,试管嫩芽作为嫁接接穗,其嫁接成活率显著优于田间嫩芽作为接穗的嫁接成活率,二者的嫁接成活率分别为78.5%和55.2%,二者间存在显著差异。

表2 不同来源茎尖对嫁接成活率的影响

2.3 嫁接苗移栽

茎尖微芽嫁接成活的试管苗长到2,3片真叶时转管培养以加快生长,嫁接苗木长出4～5片真叶时便可移栽,7～8周统计移栽情况,发现无论是来自田间的茎尖嫁接成活的嫁接苗还是来自茎段不定芽的茎尖嫁接成活的嫁接苗,其移栽成活率都较高,均达85%以上。

3 小结

红玉柑以卡里佐枳橙为砧木进行微芽嫁接,茎尖大小以3～4个叶原基为宜,过大过小均不利于嫁接成活。

目前文献记载的柑橘茎尖微芽嫁接接穗均采自田间自然生长的新生枝芽,接穗受季节限制的问题较严重。本试验以成年态红玉柑茎段诱导产生的不定芽作为嫁接接穗进行微芽嫁接其成活率达78.5%,显著高于以田间的红玉柑夏秋梢作为嫁接接穗进行微芽嫁接的成活率55.2%。试验表明,通过茎段离体诱导产生的不定芽可一年四季提供嫁接接穗,解决了常规茎尖微芽嫁接接穗受季节限制的问题,同时提高了嫁接成活率。

本试验微芽嫁接成活的嫁接苗均未检测出黄龙病病原。送检通过的嫁接苗在温室大棚中的移栽成活率可达85%以上。

［1］ 陈泽雄,刘奕清,娄娟.利用柑橘茎段诱导不定芽改进微芽嫁接技术的研究［J］.西南师范大学学报：自然科学版,2007,32（1）：57-61.

［2］ 姜玲,陈泽雄,徐象华,等.瓯柑微芽嫁接脱毒及试管苗的快速培育技术［J］.华中农业大学学报,2007,26（2）：233-236.

［3］ 罗君琴,李丽,聂振朋.柑橘试管内茎尖微芽嫁接技术试验初报［J］.浙江农业科学,2011（5）：1031-1032.

［4］ 王子成,李忠爱,邓秀新.柑橘成年态茎段外植体消毒方法研究［J］.河南大学学报：自然科学版,2005,35（2）：57-60.

［5］ 刘文龙,李进进,陈升云,等.柑橘试管内微芽嫁接方法探讨［J］.广东轻工职业技术学院学报,2009（3）：14-16,20.

［6］ 罗君琴,李丽,徐建国,等.本地早橘试管微芽嫁接初步试验［J］.中国南方果树,2011,40（4）：37-39.

（责任编辑：张瑞麟）

S 666文献标志码：B文章编号：0528-9017（2014）05-0676-02

2013-12-18

国家现代农业（柑橘）产业体系专项经费资助（MA T S-N Y C Y T X-07）

李 丽（1976-）,女,浙江黄岩人,助理研究员,农业推广硕士生,从事园艺植物组织培养及生物育种工作。E-mail：hy l e e l y@163.com。

徐建国。

文献著录格式：李丽,徐建国,罗君琴,等.红玉柑微芽嫁接技术试验［J］.浙江农业科学,2014（5）：676-678.