分光光度法测定新鲜蔬菜中维生素C的含量

李占清 魏海英

(河北大学 化学与环境科学学院，河北 保定 071002)

0 前言

水溶性维生素C又名L-抗坏血酸，主要存在于新鲜蔬菜和水果中，具有美白养颜、预防感冒、增强免疫系统功能等作用，对坏血病、动脉硬化、贫血等有一定疗效，可以预防癌症、心脏病、中风，保护牙齿和牙龈等，是维持人体正常代谢的必需物质。人体严重缺乏维生素C时会导致坏血病，而且体内又不能自身合成维生素C，只能通过合理膳食得到，因此，准确测定蔬菜中维生素C的含量具有重要意义。

蔬菜中维生素C含量的测定一般采用2,4-二硝基苯肼法、荧光分光光度法、碘量法和2,6-二氯靛酚滴定法等[1-5]，这些方法都有一定的缺点，比如操作程序复杂、所用试剂不稳定、时间长等。根据维生素C的结构特点确定了其水溶液最大吸收波长为265 nm，并且分光光度法应用普遍[6-10]，因此，建立了紫外分光光度法的工作曲线，选取了几种新鲜蔬菜作为样品进行测定。方法具有操作简便、准确、快速、检出限低的优点。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

TU-1810紫外可见分光光度计(北京普析通用有限公司)，PHS-3C型酸度计(上海伟业仪器有限公司)，分析天平，组织捣碎机，吸量管，容量瓶，纱布，移液管。

维生素C标准储备溶液(1.0 mg/mL)：称取0.1 g(精确至0.1 mg)抗坏血酸，溶于蒸馏水中，定量转移入100 mL容量瓶中，用蒸馏水稀释定容，摇匀。

维生素C标准溶液(0.1 mg/mL)：将标准储备溶液稀释而得。

1.2 实验方法

1.2.1绘制工作曲线

分别移取0.00，1.00，2.00，4.00，6.00，8.00，10.00，12.00 mL维生素C的标准溶液于100 mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至标线，摇匀。以蒸馏水为参比，在λmax=265 nm处测定吸光度，并以吸光度为纵坐标，维生素C标准溶液浓度为横坐标，作标准曲线。

1.2.2样品的测定

将菠菜、白菜、芹菜、土豆、胡萝卜五种新鲜蔬菜样品洗净，擦干，称取一定量具有代表性样品的可食部分，加入少量的水，迅速捣成匀浆，用二层纱布过滤。用水将样品移入100 mL容量瓶中，并稀释至刻度，摇匀。以蒸馏水为参比，在λmax=265 nm处，测定试样吸光度。

2 结果与讨论

2.1 最大吸收波长的确定

以蒸馏水为参比，取6.00 mL的维生素C标准溶液，在200～350 nm范围内对其进行光谱扫描，结果如图1所示。从图1可知最大吸收波长λmax=265 nm。

图1 维生素C溶液的吸收曲线Figure 1 Absorption curve of vitamin C solution.

2.2 酸度对吸收波长的影响

用移液管分别加入1 mL维生素C标准溶液于50 mL容量瓶中，用HCl或NaOH调pH值，蒸馏水稀释至刻度，测定不同pH值下的维生素C的最大吸收波长，实验结果如图2所示，实验表明，pH值在5.0～10.0时的最大吸收波长不变，为265 nm，但pH=6.0时的吸收值最大，故选择pH值为6.0。当pH<5.0时，最大吸收波长紫移，可能是因为维生素C以离子化形式存在造成的。当pH>12.0时，最大吸收波长红移，这是由于维生素C在碱性环境中不稳定分解引起的。这与文献[1]报道一致。

图2 pH对吸收波长的影响Figure 2 Effect of absorbtion wavelength on pH.

2.3 线性关系及检出限

图3 维生素C溶液的标准曲线Figure 3 A standard curve of vitamin C solution.

由图3可知，维生素C的质量浓度在1.0～12.0 μg/mL范围内呈线性关系，线性回归方程为A=0.066 03c+0.019 74，相关系数R2=0.997 51。同时，以蒸馏水做空白测定，计算标准偏差为0.0982%，得到检出限为0.044 μg/mL。

2.4 样品测定结果

实验中选取了新鲜蔬菜大白菜、菠菜、芹菜、土豆、胡萝卜为样品，按照实验方法测定了其中维生素C的含量，结果见表1。

表1 蔬菜中维生素C的含量Table 1 Contents of vitamin C in vegetables /(mg·g-1)

2.5 加标回收实验

准确吸取上述实验方法中稀释后的蔬菜溶液25.00 mL于50 mL容量瓶中，加0.5 mL维生素C标准溶液(100 μg/mL)，用蒸馏水稀释至刻度线，摇匀。测定该溶液的吸光度并从标准曲线上得到所测定的50 mL容量瓶中含有维生素C的对应含量。结果如表2所示。实验结果表明，加标回收率稳定在97.5%～105.4%，方法准确可靠。

表2 加标回收实验结果Table 2 Results of recovery tests /μg

2.6 稳定性实验

将含量测定中所配制的五种蔬菜样品溶液，在间隔不同时间内进行吸光度测量。结果发现在10 h内，样品的吸光度几乎没有变化。虽然具有还原性的维生素C易被氧化，但在一定时间内，pH=6.0的介质中能稳定存在。

3 结语

水溶性维生素C具有含有烯二醇基的多羟基内酯结构而在紫外区有特征吸收；详细考察了不同pH值时特征吸收波长。结果表明：在pH=6.0时，维生素C能稳定存在，且有最大吸光度。在1.0～12.0 μg/mL的质量浓度范围内，维生素C浓度与吸光度呈良好的线性关系，线性方程为：A=0.066 03c+0.019 74，相关系数R2=0.997 51。选取的五种常见蔬菜中维生素C的含量分别为：白菜 0.645 6 mg/g，菠菜 1.948 0 mg/g，芹菜 0.321 4 mg/g，土豆 0.559 1 mg/g，胡萝卜0.311 mg/g。该方法简单易行，准确度高，稳定性好。

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