银柴胡中α-菠甾醇和豆甾-7-烯醇含量测定的方法学研究

张玉玺，马红军，张立虹

（1. 银川能源学院 石油化工系， 宁夏 银川 750105； 2. 银川能源学院 生物工程系， 宁夏 银川 750105; 3. 宁夏固原市回民中学，宁夏 固原 756000）

银柴胡中α-菠甾醇和豆甾-7-烯醇含量测定的方法学研究

张玉玺1，马红军2，张立虹3

（1. 银川能源学院 石油化工系， 宁夏 银川 750105； 2. 银川能源学院 生物工程系， 宁夏 银川 750105; 3. 宁夏固原市回民中学，宁夏 固原 756000）

建立银柴胡中α-菠甾醇和豆甾-7-烯醇含量测定的方法。采用薄层扫描法，以525 nm为测定波长，700 nm为参比波长，α-菠甾醇（α-spinasterol）和豆甾-7-烯醇（stigmast-7-enol）的混合物（1：3）为对照品，测定银柴胡中α-菠甾醇和豆甾-7-烯醇的含量。α-菠甾醇和豆甾-7-烯醇含量在21.46～107.30 μg/ μL 范围内呈良好的线性关系（r=0.991 1），平均回收率为99.5% (RSD=4.8%)。结论 该方法简单、省时、损失小，可用于测定银柴胡中α-菠甾醇和豆甾-7-烯醇的含量。

银柴胡； α-菠甾醇和豆甾-7-烯醇；含量测定；方法学

银柴胡为石竹科植物Stellaria dichotoma L. var. lanceolata Bge.的干燥根，已有近400年的用药历史，具有清虚热、 除疳热之功能[1]，其化学成分主要有甾醇类、环肽类、黄酮类和挥发性成分，但甾醇类为主要成分且其为除虚热的主要活性物质[2,3]。银柴胡中α-菠甾醇和豆甾-7-烯醇含量测定方法虽已有报道[4,5]，但此方法较为繁琐，萃取过程损失较大，笔者在前人研究的基础上，进行了测定方法的改进和完善，改进后的测定方法简单，快速，损失小。

1 实验部分

1.1 仪器

梅特勒AE-240型电子分析天平，岛津CS-9 301型双波长飞点薄层扫描仪，硅胶G板购自北京化工厂。

1.2 试药

α-菠甾醇（α-spinasterol）和豆甾-7-烯醇（stigmast-7-enol）的混合物（1∶3）对照品（自制，并经波谱分析鉴定结构，HPLC归一化法检测纯度为99.0%）；银柴胡样品采于宁夏各地，经鉴定为银柴胡Stellaria dichotoma L. var. lanceolata Bge.；氯仿、甲醇、乙醚、乙酸乙酯、苯、硫酸、乙醇均为分析纯。

1.3 试验方法

1.3.1 对照品溶液的制备

精密称取α-菠甾醇和豆甾-7-烯醇的混合对照品适量，加氯仿制成约1μg/μL的溶液，即得。

1.3.2 供试品溶液的制备

取银柴胡细粉约2.5 g，精密称定，置50 mL具塞三角瓶中，精密加氯仿25 mL，超声处理20 min，滤过，用氯仿洗涤滤纸及残渣，合并氯仿液，回收蒸干，残渣用甲醇溶解并定容至2 mL的容量瓶中，摇匀，即得。

1.3.3 薄层条件

以硅胶G板（100 mm×200 mm）为吸附剂，以甲苯：乙酸乙酯（80：20）为展开剂，以10%的硫酸乙醇溶液为显色剂，显色条件为105 ℃加热5 min。

1.3.4 扫描条件

测定波长λs=525 nm，参比波长λr=700 nm，扫描速度为20 mm/min，反射法锯齿扫描，光路狭缝1.25 mm×1.25 mm，线性参数SX=3。

1.3.5 测定方法

照薄层色谱法试验[6]，精密吸取对照品溶液2 μL和8μL与供试品溶液10μL分别点于同一硅胶G板上，以甲苯：乙酸乙酯（80：20）为展开剂，展开后取出，晾干，喷以10%的硫酸乙醇溶液，在105 ℃加热5 min使斑点显色清晰，取出，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，固定周围，依法进行扫描，测定波长λs=525 nm，参比波长λr=700 nm，测定供试品与对照品吸收度积分值，按外标两点法计算，即得。

2 实验结果

2.1 标准曲线

精密吸取对照品溶液（1.073μg/μL）2，4，6，8，10 μL分别点于同一硅胶G板上，按上述方法展开，显色，扫描测定。计算，得回归方程Y=2.76036 + 0.0012X (r =0.9911)，α-菠甾醇和豆甾-7-烯醇在2.146～10.730μg/μL范围内成良好的线性关系。

2.2 精密度实验

取同一对照品溶液 5μL，点于不同的硅胶 G板上，依法展开，扫描测定，共6份，RSD＝2.3%，说明精密度良好。

2.3 稳定性试验

取对照品溶液与供试品溶液各5 μL分别点于同一硅胶G板上，展开，每隔30 min扫描测定1次，结果对照品溶液与样品溶液随放置时间的延长，测定数值变小，但变化趋势一致，见图 1，所以规定显色完毕后立即测定。

2.4 薄层回收率

精密吸取已知含量（0.433 48μg/μL）的供试品溶液5μL、供试品溶液5μL+对照品溶液2μL、供试品溶液5μL+对照品溶液3μL、供试品溶液5 μL+对照品溶液4μL各2份，及对照品溶液2μL和8μL点于同一硅胶G板上，按上述方法展开、扫描测定，平均回收率为99.5%，n=6，RSD=4.8%，结果见表1。

图1 稳定性趋势图Fig.1 Stability trends

表1 薄层回收率Table 1 TLC recovery

2.5 样品的测定

利用本文建立的方法对宁夏不同产地种植的 3年生银柴胡样品中α-菠甾醇和豆甾-7-烯醇的含量进行测定，见表 2，结果显示宁夏不同产区银柴胡中α-菠甾醇和豆甾-7-烯醇的含量变化不大。

表2 含量测定结果Table 2 Determination results

3 讨 论

图2 薄层色谱扫描图Fig.2 TLC scan

文献[4,5]对α-菠甾醇和豆甾-7-烯醇的测定虽也采用了双波长薄层扫描法，但其在溶媒的选择上都用的是甲醇，样品前处理方法中都含有乙醚萃取，笔者在实验中改用氯仿做溶媒，且省去了乙醚萃取过程。

通过方法的改进，α-菠甾醇和豆甾-7-烯醇含量提高了近一倍，结果见表 3，可见改进的方法减少了萃取过程的损失，虽然薄层板上显示杂质较多（图2），但不干扰主成分斑点，增加了提取率。

Study on Determination Methods of α- spinach sterols and bean-7-ol in Silver Bupleurum

ZHANG Yu-xi1, MA Hong-jun2, ZHANG Li-hong3
（1. Institute of Petrochemical Technology, Yinchuan Energy College, Ningxia Yinchuan 750105, China; 2. Department of Bioengineering, Yinchuan Energy College, Ningxia Yinchuan 750105, China; 3. Ningxia Guyuan Huimin Middle School, Ningxia Guyuan 75600, China）

A method to determine α- spinach sterols and bean-7-ol contents in silver Bupleurum was established. TLC scanning method was used to determine α- spinach sterols and bean-7-ol contents in silver Bupleurum by using 525 nm as determining wavelength and 700 nm as reference wavelength, the mixture of α- spinasterol (α-spinasterol) and bean-7-ol (stigmast-7-enol) (1: 3) as reference sample. The results show that, α- spinach sterols and bean-7-ol content in 21.46～107.30 μg/μL show a good linear relationship (r = 0.991 1), the average recovery is 99.5% (RSD = 4.8%). The method is simple, time-saving, small loss, and can be used to determine the content of α- spinach sterols and beans-7-enol in silver Bupleurum.

Silver bupleurum; α- spinach sterols and bean-7-ol; Determination; Methodology

O 657

A

1671-0460（2014）11-2474-03

2014-09-17

张玉玺（1977-），女，宁夏银川人，讲师，2002年毕业于宁夏大学化学工程与工艺专业，研究方向：化学工程与工艺。E-mail：zyx771120@163.com。