紫地榆中总鞣质的含量测定

骆婷婷，蓝 海，张海珠，谢雪宝，胡建勇，周 萍*

（1.大理学院药学与化学学院，云南大理 671000；2.大理州食品药品检验所，云南大理 671000）

紫地榆中总鞣质的含量测定

骆婷婷1，蓝 海1，张海珠1，谢雪宝1，胡建勇2，周 萍1*

（1.大理学院药学与化学学院，云南大理 671000；2.大理州食品药品检验所，云南大理 671000）

目的：建立紫地榆总鞣质的含量测定方法。方法：以没食子酸为对照品，采用比色法测定紫地榆总鞣质的含量。结果：以没食子酸计，紫地榆鞣质浓度在2.03～12.17 μg∕mL范围内与吸光度成良好的线性关系（r=0.999 4）；平均加样回收率为99.1%，RSD为2.32%（n=8）。结论：该方法简便快速准确，可用于紫地榆总鞣质的含量测定。

紫地榆；总鞣质；没食子酸；比色法

紫地榆（赤地榆）（Geranium strictipes）是牻牛儿苗科老鹳草属植物（Geranium strictipes R.Knuth）的根，民间称隔山消〔1〕，主要分布于云南中甸、永宁、永胜、大理等地区，其药源丰富，长期以来在云南的白族、彝族等地区广泛使用。现代药理研究发现该属植物具有抗菌消炎、抗病毒、抗肝损伤、止咳、抗氧化、抗癌以及孕激素样等多种作用〔2〕，近年研究发现紫地榆水提取物对牙周致病厌氧菌有较好的抑制作用〔3〕，蓝海等〔4〕发现五倍子和隔山消对牙齿具有保护作用，隔山消效果不如五倍子。紫地榆中含有β-1，4，6-三-O-没食子酰基-葡萄糖、β-1，6-二-O-没食子酰基-葡萄糖、鞣花酸、五倍子酸甲酯、没食子酸、（+）-儿茶素等鞣质类和酚酸类成分3，4-二羟基苯甲酸〔5〕，关于含量测定方面，仅有肖培云等〔6〕用HPLC法测定隔山消中没食子酸的含量。鞣质被认为是天然的抗氧化剂，近年来越来越多的研究表明鞣质具有较好的抗肿瘤活性〔7〕。本实验对紫地榆的总鞣质含量进行测定，为控制紫地榆药材质量提供参考，为开发利用紫地榆提供依据。

1 仪器与试药

1.1仪器TU-1901型双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；T6新世纪-紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；SB25-12D超声波清洗器（宁波新芝生物科技股份有限公司500 W，35 KHz）；FA2004N电子分析天平（上海精密科学仪器有限公司）；SSY-4电热恒温水浴锅（北京泰克仪器有限公司）；电子万用炉（天津市泰斯特仪器有限公司1 000 W）。

1.2药品与试剂紫地榆药材于2012年4月购于大理药材市场，由大理学院药学与化学学院周浓老师鉴定为牻牛儿苗科老鹳草属植物的根。没食子酸对照品（成都曼思特生物科技有限公司，批号：MUST-13040103，含量测定用）；钨酸钠（天津市百世化工有限公司，20090818）；钼酸钠（天津市化学试剂四厂，20041015）；硫酸锂（天津市瑞金特化学品有限公司）；无水碳酸钠（江苏强盛化工有限公司，20081227）；干酪素（上海润捷化学试剂有限公司，批号：20081013）；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1溶液的制备

2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取没食子酸对照品50.70 mg，置100 mL棕色量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，得浓度为0.507 mg∕mL的对照品储备液。精密吸取对照品储备液5 mL，置50 mL棕色量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得浓度为50.7 μg∕mL的没食子酸对照品溶液。

2.1.2 供试品溶液的制备 紫地榆药材粉碎后过4号筛，取样0.4 g，精密称定，置250 mL棕色量瓶中，加150 mL水，放置过夜，超声处理10 min，放冷，用水稀释至刻度，摇匀，静置（使固体物沉淀），滤过，弃去50 mL初滤液，精密移取20 mL续滤液，置100 mL棕色量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得〔8〕。

2.1.3 磷钼钨酸试液的制备 取钨酸钠100 g，钼酸钠25 g，加水700 mL使溶解，加盐酸100 mL，磷酸50 mL，加热回流10 h，放冷，再加硫酸锂150 g，水50 mL，液溴0.2 mL，混匀，充分反应，煮沸除去残留的溴（约15 min），冷却，加水稀释至1 000 mL，滤过，即得。本液不得显绿色（如放置后变为绿色，可加溴0.2 mL，煮沸除去多余的溴即可）。

2.2测定波长的选择采用磷钼钨酸-碳酸钠比色法。分别精密吸取没食子酸对照品溶液和供试品溶液2.0 mL置于25 mL棕色量瓶中，加1.0 mL磷钼钨酸试液，再分别加入10 mL的水，用29%碳酸钠溶液定容，摇匀，放置10 min，以试剂空白为参比，在400～900 nm间进行波长扫描，测定其最大吸光度。结果显示没食子酸对照品溶液和供试品溶液在765 nm处均有最大吸光度，故选择765 nm为测定波长。

2.3总鞣质的计算

2.3.1 总酚 取样品约0.4 g，精密称定，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.2”项下方法测定其吸光度，用标准曲线计算供试品溶液中总酚的量。

2.3.2 不被吸附的多酚 精密量取供试品溶液25 mL，加至已盛有干酪素0.6 g的100 mL具塞锥形瓶中，密塞，置30℃水浴中保温1 h，时时振摇，取出，放冷，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液2.0 mL，置25 mL棕色量瓶中，照“2.2”项下的方法测定其吸光度，用标准曲线计算供试品溶液中不被吸附的多酚含量。

按下式计算总鞣质的含量〔9〕：总鞣质含量=总酚量-不被吸附的多酚量

2.4显色条件考察

2.4.1 显色剂的量考察 分别精密量取2.0 mL供试品溶液，置25 mL棕色量瓶中，分别加入0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6 mL的磷钼钨酸试液，再加入10.4、10.2、10.0、9.8、9.6、9.4 mL水，用29%碳酸钠定容，摇匀，放置30 min，以试剂空白为参比，在765 nm的波长处测定其吸光度。

由结果可知，样品的吸光度随着显色剂量的增加而升高，当显色剂的量加到1.0 mL时，样品的吸光度随着显色剂量的增加变化不明显，故选择显色剂磷钼钨酸的加入量为1.0 mL。

2.4.2 放置时间对样品吸光度的影响 精密量取样品溶液2.0 mL置于25 mL棕色量瓶中，加入1.0 mL磷钼钨酸试液，再加入10 mL水，用29%碳酸钠溶液定容，摇匀，分别放置10、20、30、40、50 min，以试剂空白为参比，在765 nm处测定其吸光度。

结果显示，放置10～50 min吸光度无太大变化，说明放置时间对样品的吸光度影响不明显，因此放置时间为10 min测定即可。

2.5线性关系考察精密量取没食子酸对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL，分别置25 mL棕色量瓶中，各加入1.0 mL磷钼钨酸试液，再分别加入11.0、10.0、9.0、8.0、7.0、6.0 mL水，用29%碳酸钠定容，摇匀，放置10 min，以试剂空白为参比，在765 nm的波长处测定其吸光度。以吸光度为纵坐标（Y），对照品浓度为横坐标（X），进行线性回归，得到回归方程：Y=0.003 6X+0.051 5，r=0.999 4。结果表明没食子酸在2.03～12.17 μg∕mL范围内线性关系良好。

2.6精密度试验精密移取对照品溶液2.0 mL于25 mL棕色量瓶中，按“2.2”项下方法，在765 nm处连续测定其吸光度，得RSD为1.04%（n=6）。

2.7供试品溶液稳定性试验取同一供试品溶液分别在0.5、1、2、4、6、9、12、24 h时间点取样，按“2.2”项下方法测定吸光度，得RSD为1.35%。实验结果表明，供试品溶液在24 h内是稳定的。

2.8重复性实验取同一批药材粉末6份，每份约0.4 g，精密称定，按“2.1.2”项下方法平行制备供试品溶液，按“2.3”项下方法测定并计算样品中总鞣质的含量，结果为0.252 mg∕g，RSD为2.57%（n=6）。

2.9回收率试验精密称取已知含量的紫地榆为0.252 mg∕g的样品8份，每份约0.2 g，加没食子酸对照品溶液适量，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.3”项下方法测定并计算样品中总鞣质的加样回收率。见表1。

表1 加样回收率试验结果（n=8）

2.10样品测定平行取样6份，每份约0.4 g，精密称定，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.3”项下方法测定并计算样品中总鞣质的含量，结果样品中总鞣质的含量为0.256 mg∕g，RSD=2.13%（n=6）。

3 讨论

由于鞣质受热不稳定，故不能加热回流提取，采用冷浸过夜超声提取，能把总鞣质提取完全。鞣质的测量方法有皮粉法、高锰酸钾法、干酪素法、络合滴定法、比色法。皮粉法适用广泛，但供试品的耗用量大、测定周期较长、选择性相对较差，适合用于中药中含有较丰富的鞣质的含量测定，含量较低的则不适合用皮粉法测定。干酪素法能有选择地测出具有生理活性的鞣质〔10〕，并且干酪素对鞣质的吸附专属性强，效果优于皮粉法，适合用于中药中含有少量鞣质的测量。比色法的优点是操作简单，经显色剂显色后灵敏度较高。在实验中，因鞣质含有的多酚羟基与磷钼钨酸试液反应生成的蓝色产物遇光不稳定，因此显色反应条件应该避光操作，使用棕色量瓶。

〔1〕蓝海，李龙星，肖培云.紫地榆中没食子酸的提取工艺研究〔J〕.中成药，2009，31（9）：1456-1457.

〔2〕朱永红，吕盼.民族药紫地榆研究进展〔J〕.云南中医学院学报，2012，35（3）：20-23.

〔3〕李龙星，郭利军，蓝海.紫地榆对口腔致龋菌抑制作用的研究〔J〕.安徽农业科学，2010，38（36）：20600.

〔4〕蓝海，罗常辉.隔山消和五倍子水提物对牛切牙脱矿与再矿化的动力学研究〔J〕.中成药，2011，33（4）：692-694.

〔5〕杨国红，陈道峰.紫地榆的化学成分及其抗艾滋病病毒活性〔J〕.中草药，2007，38（3）：352-354.

〔6〕肖培云，蓝海，李龙星.HPLC法测定隔山消中没食子酸的含量研究〔J〕.大理学院学报，2009，8（6）：9-11．

〔7〕王添敏，孙晓丽，彭雪，等.胡桃楸的根、茎枝、叶和果皮中总鞣质的含量测定〔J〕.中国中药杂志，2011，36（1）：32-36.

〔8〕国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部〔S〕.北京：中国医药科技出版社，2010：附录62.

〔9〕李娆娆，吴丽莎，原思通.两种方法测定槐花3种饮片中鞣质含量〔J〕.时珍国医国药，2008，19（10）：2345-2346.

〔10〕曾祥丽，丁安伟，单鸣秋.侧柏叶炮制前后鞣质的含量测定〔J〕.中国中医药信息杂志，2008，15（4）：45-46.

*通信作者：周萍，教授.

（责任编辑 李 杨）

Determination of Total Tannins in Geranium strictipes

LUO Tingting1,LAN Hai1,ZHANG Haizhu1,XIE Xuebao1,HU Jianyong2,ZHOU Ping1*
（1.College of Pharmacy and Chemistry,Dali University,Dali,Yunnan 671000，China;2.Dali Institute for Food and Drug Control,Dali, Yunnan 671000，China）

Objective:To establish a method for the determination of total tannins in Geranium strictipes.Methods:With Gallic acid as reference substance,the UV spectrophotometer was adopted to determine the content of total tannins.Results:With Gallic acid as a standard,Tannins of Geranium strictipes showed good linear relationship in the range of 2.03-12.17 μg∕mL（r=0.999 4）.The average recovery was 99.1%,RSD was 2.32%（n=8）.Conclusion:The method was simple,rapid and accurate,which could be used to measure the content of tannins in Geranium strictipes.

Geranium strictipes;total tannins;Gallic acid;colorimetric method

R284

A

1672-2345（2014）02-0012-03

10.3969∕j.issn.1672-2345.2014.02.005

国家自然科学基金资助项目（81260512）

2013-11-14

2013-12-09

骆婷婷，硕士研究生，主要从事药物质量研究.