新橙皮苷二氢查尔酮的高效液相色谱检测方法

邓 虹，赵华修，代 勇，刘晋渝

（成都大帝汉克生物科技有限公司，成都 611130）

新橙皮苷二氢查尔酮的高效液相色谱检测方法

邓 虹，赵华修，代 勇，刘晋渝

（成都大帝汉克生物科技有限公司，成都 611130）

建立高效液相色谱法分析新橙皮苷二氢查尔酮。色谱柱为美国Zorbax Eclipse XDB-C18（4.6×150 mm，5 um），甲醇-水（60∶40，体积比）洗脱溶剂，流速1 mL·min-1，柱温30℃，检测波长282 nm，新橙皮苷二氢查尔酮平均回收率为99.56%，RSD=1.04%（n=5）。结果表明，该方法准确、简单、出峰快，可作为新橙皮苷二氢查尔酮的高效液相色谱新检测方法。

新橙皮苷二氢查尔酮；高效液相色谱法；检测方法

新橙皮苷二氢查尔酮（NHDC）是一种从天然柑橘植物中提取得到的新橙皮苷经氢化而成的新型甜味剂，具有甜度高、口感好、余味持久、低热量、无毒、稳定性好等特点，是目前最引人注目的新型甜味剂和苦味屏蔽剂，广泛应用于食品工业及饲料工业中[1-5]。目前，饲料工业主要用高效液相色谱法检测NHDC[6-7]。其灵敏度高，方法可靠，但所采用洗脱剂为乙腈-水，保留时间太长，本文建立了一种新的HPLC检测方法，可以更加快速、准确的检测NHDC的含量。

1 材料与方法

1.1 试验材料

新橙皮苷二氢查尔酮（纯度＞97%）由湖南康麓生物科技有限公司提供。NHDC标准品购于迪马科技，色谱级甲醇购于迪马科技，重蒸水为自制。试验仪器为分析天平（感量0.1 mg）和美国Agient1200高效液相色谱仪（具VWD检测器）。

1.2 高效液相色谱参考条件

色谱柱为Zorbax Eclipse XDB-C18（4.6×150 mm，5 um），流动相为甲醇∶水=60∶40（体积比），流动相流速1 mL·min-1，检测波长282 nm，进样量20 μL，柱温30℃。

1.3 试验方法

1.3.1 标准品的制备

准确称取新橙皮苷二氢查尔酮标准样品10 mg，置于100 mL的容量瓶中，用50%甲醇稀释到刻度，混匀。该溶液应现用现配。

1.3.2 样品溶液的制备

称取新橙皮苷二氢查尔酮样品5～10 mg，置于100 mL的容量瓶中，用50%甲醇稀释，混匀，现用现配。

1.3.3 回收率试验

分别吸取1.3.2中样品溶液10 mL于5个100 mL容量瓶中，分别加入标准品1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mg，溶解，50%甲醇定容，精密吸取20 μL进样。

2 试验结果

2.1 色谱结果

标准品及样品对照的色谱图见附图，保留时间约为3.8 min。

2.2 回收率试验

回收率试验结果见附表。

由附表可知，平均回收率为99.56%，RSD= 1.04%（n=5）。

附图标准品A与样品B的高效液相色谱图

附表回收率试验结果

3 讨论

本试验检测波长为282 nm，这是NHDC的最大吸收波长[8]。此波长与文献报道的NHDC吸收波长一致，282 nm即为NHDC的特征吸收波长[9]。NHDC具有极佳的改善口味的功效，本品可用于食品工业、医药工业以及饲料工业中作甜味剂（或矫味剂），在香精香料中具有极好的用途[10-15]。动物口粮中添加该种复配甜味料产品，能改善饲料的风味和适口性，甜味料中的NHDC及香草的香味作用掩盖和改善了日粮中某些成分（如某些蛋白原料、维生素、金属离子以及一些药物成分等）带来的不良苦涩味，从而增进幼畜的食欲，促进生长。

试验采用甲醇代替乙腈作为洗脱溶剂，价格便宜，毒性小，出峰也快，缩短保留时间；NHDC不能很快的溶于水，与徐国波等试验相比，本试验采用50%的甲醇作为溶剂，溶解样品更快更彻底，试验误差也相对缩小，为高效液相色谱检测NHDC提供了新的快速准确的检测方法[1]。

[1]徐国波,袁小红,索志荣,等.HPLC法检测合成新橙皮苷二氢查尔酮[J].食品研究与开发,2010,31（11）:153-155.

[2]杨金会,盂丽聪.二氢查尔酮类化合物的研究进展[J].宁夏工程技术,2007,6（1）:43-46.

[3]温辉梁,欧阳振宇,胡晓波,等.新橙皮苷二氢查尔酮的研究进展[J]．中国调味品,2008（10）:70-73.

[4]Waalkens B D H,Kuilman-Wahls M E,Bar A．Embryotoxicity and teratogenicity study with neohesperidin dihydrochalcone in rats[J].Regulatory Toxicology and Pharmacology,2004,40（1）: 74-79.

[5]徐国波,袁小红,冯运波,等.常温常压下合成新橙皮苷二氢查尔酮的工艺研究[J].北京化工大学学报（自然科学报）,2010, 37（5）:111-114.

[6]Del Rio J A,Fuster M D,Sabater F,et al.Selection of citrus vari⁃eties highly productive for the neohesperidin dihydrochalcone pre⁃cursor[J].Food chemistry,1997,59（3）:433-437.

[7]Atli ö,Ergun B,Altiokka G.Determination of hesperidin and neo⁃hesperidin in fruit juices using high performance liquid chromato⁃graphic(HPLC)method[J].Toxicology Letters,2007,172:222.

[8]杨恒,鲁明芳,郑建仙.新橙皮苷二氢查耳酮制备工艺的研究[J].中华食品添加剂,2010（4）:191-195.

[9]Montljano H,Borrego F,Canaies I,et al．Validated high-perfor⁃mance liquid chromatographic method for quantitation of neohes⁃peridine dihydrochalcoae in foodstuffs[J].Journal of Chromatogra⁃ phyA,1997,758（1）:163-166.

[10]Lee J H,Lee S H,Kim Y S,et al．Protective effects of neohesperi⁃din and poncirin isolated from the fruits of poncirus trifoliata on potential gastric disease[J]．Phytother Res,2009,23（12）:1 748-1 753.

[11]Mandalari G,Bennett R N,Bisignano G,et al．Antimicrobial activ⁃ity of flavonoids extracted frombergamot(citrus bergamia risso) peel,a byproduct of the essential oil industry[J]．Journal of Ap⁃plied Microbiology,2007,103（6）:2 056-2 064.

[12]冯宝民,蒋革,贾景明,等.柚皮苷和新橙皮苷抗过敏作用的研究[J]．大连大学学报,2005,26（4）:63-64．

[13]Lee Y S,Kang M H,Cho S Y,et al.Effects of constituents of Amo⁃mum xanthioides on gastritis in rats and on growth of gastric can⁃cer cells[J].Arch Pharm Res,2007,30（4）:436-443.

[14]Lee Y S,Kang M H,Cho S Y,et al.Effects of constituents of Amo⁃mum xanthioides on gastritis in rats and on growth of gastric can⁃cer cells[J].Arch Pharm Res,2007,30（4）:436-443.

[15]Lee J H,Lee D U,Jeong C S.Gardenia jasminoides Ellis ethanol extract and its constituents reduce the risks of gastritis and re⁃verse gastric lesions in rats[J].Food Chem Toxicol,2009,47（6）: 1 127-1 131.

Determination of Neohesperidin Dihydrochalcone by HPLC

DENG Hong,ZHAO Huaxiu,DAI Yong,LIU Jinyu

（Chengdu DadHank Biotech Co.,Ltd.,Chengdu 611130,China）

To establish a method for the determination of Neohesperidin Dihydrochalcone by HPLC.The Ameri⁃ca Zorbax Eclipse XDB-C18 column(4.6×150 mm,5 um)was used with the mobile phase constituted of methanol wa⁃ter(60∶40,volume ration)at the flow rate of 1.0 mL·min-1,and the column temperature was 30℃,the UV detection wavelength was 282 nm.The average recovery was 99.56%,RSD=1.04%(n=5).The results showed that,this method is accurate,simple,rapid,andcanbe usedfornewdetectingtheNeohesperidinDihydrochalconeby HPLC.

Neohesperidin Dihydrochalcone;HPLC;detection method

O657.7；657.7+2

A

1001-0084（2014）08-0052-03

2014-03-31

邓虹（1982-），女，四川华蓥市，工程师，主要从事饲料调味剂的液相色谱检测工作。