血小板活化因子在各型冠心病中的表达及与冠脉Gensini积分的相关性研究

海祺旻，沈德良，刘琮琳，张金盈

冠心病(coronary heart disease，CHD)的病理基础是全身大、中等动脉发生粥样硬化，多种炎性和免疫反应参与其中[1]。血小板活化因子(platelet activating factor，PAF)是一种与冠心病有关的新的炎性标志物，而且可能直接参与动脉粥样硬化的发生与发展，能独立预测冠脉事件[2]。但PAF在不同类型冠心病中的表达水平及其与冠脉病变严重程度的关系尚不清楚，本研究通过检测各型冠心病患者血浆PAF水平，探讨其表达水平及与冠脉Gensini积分的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2012年7—12月因疑似冠心病在郑州大学第一附属医院住院并行冠脉造影术(CAG)者140例，其中男71例(50.7%)，女69例(49.3%)；年龄32～85岁，平均(57±10)岁。依据冠心病的诊断标准[3]，将受试者分为冠心病组(108例)和对照组(32例)。再将冠心病组分为：(1)不稳定型心绞痛(unstable angina pectoris，UAP)组(41例)，入选标准：典型心绞痛症状；发作时心电图ST段暂时性压低>1 mm或抬高>3 mm，缓解后，迅速恢复正常或接近正常；心肌酶正常；距末次发作24 h以内；排除梗死后心绞痛、瓣膜病、肥厚性心肌病、贫血等。(2)稳定型心绞痛(stable angina pectoris，SAP)组(37例)，入选标准：劳累性心绞痛，发作性质在2个月内无改变或运动试验阳性。(3)急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)组(30例)，入选标准：持续胸痛30 min以上；至少相邻两个导联ST段抬高超过0.2 mV；血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)及肌钙蛋白T水平升高超过正常值水平上限2倍以上。所有受试者均接受心电图、胸部X线、超声心动图、肝肾功能等检查。排除瓣膜性心脏病、心肌病、恶性肿瘤、急慢性感染性疾病、严重肝肾功能不全等疾病。完善吸烟史、饮酒史、高血压病史等相关信息。AMI组CAG前临时一次性服用氯吡格雷400 mg、阿司匹林300 mg，其余受试者均于CAG前12 h服用氯吡格雷400 mg、阿司匹林300 mg。所有受试者未曾服用影响PAF水平的药物。

1.2 实验室指标检测方法 AMI组和UAP组患者于入院后即刻真空采血针穿刺静脉抽取第一管静脉血1.8 ml，置于含有0.2 ml 2%乙二胺四乙酸(EDTA)的塑料管中，立即送检验科检测总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)等；取第二管静脉血1.8 ml，置于含有0.2 ml 2% EDTA的塑料管中，立即4 ℃，离心半径为16.1 cm，3 000 r/min离心10 min，取上清液(血浆)，置于-80 ℃冰箱中待测PAF。采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定PAF水平，严格按照试剂盒的程序操作。试剂盒为武汉伊莱瑞特生物科技有限公司产品，PAF单位为μg/L，检测范围为0.31～20.00 μg/L，板内、板间差异系数<10%。SAP组和对照组于入院次日清晨空腹采肘静脉血，检测方法同上。

1.3 CAG方法 经肱动脉采用Judkins法，多体位投照，取左前斜位、右前斜位及头脚轴状位投影观察冠脉病变，分别对右冠状动脉、左主干、左前降支、左回旋支等冠状动脉血管的阻塞病变以通用直径法进行评价。造影结果由同1名经验丰富的专科医师在不知受试者分组情况下判读评定。冠脉Gensini积分以前降支、回旋支、右冠状动脉为基本单位，左主干病变视为双支[4]。

2 结果

2.1 冠心病组与对照组一般资料的比较 冠心病组与对照组的吸烟、高血压、糖尿病、高脂血症、脑血管病发生率及TC、TG、HDL、LDL水平间差异有统计学意义(P<0.05)，其余指标间差异均无统计学意义(P>0.05，见表1)。

表1 冠心病组与对照组的一般资料比较

注：TC=总胆固醇，TG=三酰甘油，HDL=高密度脂蛋白，LDL=低密度脂蛋白；*为χ2值，余检验统计量值为t值

2.2 冠心病组与对照组及冠心病各亚组间PAF水平比较 对照组、冠心病组的PAF水平分别为(6.27±1.35)、(12.26±2.02)μg/L，两组间比较差异有统计学意义(t=-12.734，P<0.05)。SAP组、UAP组、AMI组的PAF水平分别为(10.61±1.97)、(13.01±1.48)、(13.31±1.36)μg/L，3组间差异有统计学意义(F=19.517，P<0.05)，亚组间两两比较显示：UAP组与SAP组间差异有统计学意义(q=-7.433，P<0.05)，AMI组与SAP组间差异有统计学意义(q=-7.760，P<0.05)，UAP组与AMI组间差异无统计学意义(q=-0.898，P>0.05)。

2.3 PAF水平与Gensini积分及检测指标的相关性 冠心病组和对照组血浆PAF水平与Gensini积分呈正相关，同时与TC、HDL、LDL水平呈正相关(P<0.05，见表2)。

表2 PAF水平与Gensini积分及检测指标的相关性

Table2 Correlation between PAF and Gensini score and detection indexes

Gensini积分TCTGHDLLDLr值 0 642 0 6470 262 0 297 0 718P值<0 05<0 050 110<0 05<0 05

注：PAF=血小板活化因子

3 讨论

近年来研究表明，炎性反应在动脉粥样硬化从发生发展到最终斑块表面破裂并发血栓形成的各个阶段中均起着重要作用[5]。在此过程中，多种炎性因子参与其中，通过不同的生化途径发挥作用[6-8]。

PAF是一种具有生物活性的内源性磷脂，具有多种潜在生物学作用，其化学本质为1-0-烷基-2-乙酰基-Sn-甘油-3-磷脂胆碱[9]。PAF由中性粒细胞、血小板、肥大细胞、内皮细胞和巨噬细胞等分泌产生，以其前体存在，当上述细胞受到炎性因子、免疫复合物、自由基等刺激时合成分泌[10]。PAF由乙酰水解酶(PAF-AH)降解[11]，代谢产物为无生物活性的PAF前体[12]。

研究发现，PAF主要通过两方面参与粥样硬化过程。一方面，PAF可以诱导血小板的活化，PAF是迄今发现的体内最强的血小板活化刺激因子[13]，可与分布在血小板质膜外侧表面的特异性受体血小板活化因子受体(PAF receptor)结合[14-15]，从而通过G蛋白介导的信号传导通路激活GTP酶[16]和磷酸肌醇特异性的磷脂酶C(PLC)，诱导血小板活化，使其在冠状动脉内黏附、聚集、释放炎性递质，通过炎性途径和免疫途径促进冠状动脉粥样硬化的发生、发展[17]。另一方面，PAF能够促进巨噬细胞向泡沫细胞的转化。Váradi等[18]研究发现，氧化损伤时，内皮细胞会产生PAF，后者能引起巨噬细胞产生超氧化物阴离子，促使LDL氧化变性为氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)，从而直接损伤内皮组织，诱导单核细胞渗入内皮下分化为巨噬细胞，分化的巨噬细胞又通过“清道夫受体”(scavenger receptors)吞噬ox-LDL，转变为泡沫细胞[19-20]。PAF乙酰水解酶能够降解PAF，保护载脂蛋白B-100不被氧化变性，从而拮抗了动脉粥样硬化发展[21]。

本研究结果表明，冠心病患者的PAF水平高于对照者；不同类型冠心病患者的血浆PAF水平也不同，UAP组、AMI组均高于SAP组。而且，血浆PAF水平与冠脉病变严重程度呈正相关，PAF水平随冠状动脉狭窄程度加重而升高，提示PAF参与了冠状动脉粥样硬化形成和发展阶段，并可作为冠心病临床诊断和判断冠心病病变严重程度的依据。本研究还发现不同类型冠心病患者的血脂水平也存在差异，且血脂水平与PAF水平也呈正相关，这与既往对高血脂促进冠脉粥样硬化的认识是一致的，同时提示血脂与PAF在粥样硬化及血管壁炎性反应中可能存在相互作用，这还有赖于进一步的研究证实。

综上所述,PAF通过多条途径参与冠脉粥样硬化的发生、发展，是冠脉粥样硬化的危险因素。PAF有可能作为预测冠心病严重程度的标志物，这为判断并评估由冠脉粥样硬化导致的冠脉狭窄提供了新的观测指标。

1 Shih CH,Ozawa S,Ando N,et al.Vascular endothelial growth factor expression predicts outcome and lymph node metastasis in squamous cell carcinoma of the esophagus[J].Clin Cancer Res,2000,6(3):1161-1168.

2 Vadas P,Gold M,Perelman B,et al.Platelet-activating factor,PAF acetylhydrolase,and severe anaphylaxis[J].New England Journal of Medicine,2008,358(1):28-35.

3 胡大一.全国专科医师培训规划教材——心血管内科学[M].北京：人民卫生出版社，2009：282-336.

4 Sinning C,Lillpopp L,Appelbaum S,et al.Angiographic score assessment improves cardiovascular risk prediction:The clinical value of SYNTAX and Gensini application[J].Clinical Research in Cardiology,2013,102(7):495-503.

5 汤国高，高洁，冯玉书 .颈动脉硬化程度与冠心病血管病变程度及临床症状相关性研究[J].河北医药，2010，32(18)：2544.

6 Pendurthi UR,Meng F,Mackman N,et al.Mechanism of resveratrolmediated suppression of tissue factor gene expression[J].Thromb Haemost,2002,87(1):155-162.

7 Futterman LG,Lemberg L.Novel markers in the acute coronary syndrome:BNP,IL-6,PAPP-A[J].American Journal of Critical Care,2002,11(2):168-172.

8 Tedgui A,Mallat Z.Cytokines in atherosclerosis:Pathogenic and regulatory pathways[J].Physiological Reviews,2006,86(6):515-581.

9 Owen JS,Thomas MJ,Wykle RL.Platelet-activating factor[J].Methods in Enzymology,2007,434:105-116.

10 Rechka A,Neagoe PE,Gratton JP,et al.Identification of VEGF receptor-2 tyrosine phosphorylation sites involved in VEGF-mediated endothelial platelet-activating factor synthesis[J].Canadian Journal of Physiology and Pharmacology,2010,88(10):968-976.

11 Stafforini DM.Biology of platelet-activating factor acetylhydrolase(PAF-AH,lipoprotein associated phospholipase A2)[J].Cardiovascular Drugs and Therapy,2009,23(1):73-83.

12 Frost BL,Caplan MS.Necrotizing enterocolitis:Pathophysiology,platelet-activating factor,and probiotics[J].Seminars in Pediatric Surgery,2013,22(2):88-93.

13 Gawaz M,Langer H,May AE.Platelets in inflammation and atherogenesis[J].Journal of Clinical Investigation,2005,115(12):3378-3384.

14 Melnikova V,Bar-Eli M.Inflammation and melanoma growth and metastasis:The role of platelet-activating factor(PAF) and its receptor[J].Cancer and Metastasis Reviews,2007,26(3-4):359-371.

15 Kajiwara N,Sasaki T,Bradding P,et al.Activation of human mast cells through the platelet-activating factor receptor[J].Journal of Allergy and Clinical Immunology,2010,125(5):1137-1145.

16 Davì G,Patrono C.Platelet activation and atherothrombosis[J].New England Journal of Medicine,2007,357(24):2482-2494.

17 Lievens D,von Hundelshausen P.Platelets in atherosclerosis[J].Thrombosis and Haemostasis,2011,106(5):827.

18 Váradi G,Tóth GK,Kele Z,et al.Synthesis of PAF,an antifungal protein from P.chrysogenum,by native chemical ligation:Native disulfide pattern and fold obtained upon oxidative refolding[J].Chemistry,2013,19(38):12684-12692.

19 Adachi H,Tsujimoto M.Endothelial scavenger receptors[J].Progress in Lipid Research,2006,45(5):379-404.

20 Ghattas A,Griffiths HR,Devitt A,et al.Monocytes in coronary artery disease and atherosclerosis:Where are we now?[J].Journal of the American College of Cardiology,2013,62(17):1541-1551.

21 Cao J,Hsu YH,Li S,et al.Structural basis of specific interactions of Lp-PLA2 with HDL revealed by hydrogen deuterium exchange mass spectrometry[J].Journal of Lipid Research,2013,54(1):127-133.