川贝止咳合剂质量标准研究

孙冬梅汪梦霞董玉娟

（1广东省中医药工程技术研究院，广州，510095；2广州中医药大学，广州，510405）

中药研究

川贝止咳合剂质量标准研究

孙冬梅1汪梦霞2董玉娟2

（1广东省中医药工程技术研究院，广州，510095；2广州中医药大学，广州，510405）

目的：建立川贝止咳合剂的质量标准控制方法。方法：采用薄层色谱（TLC）法对方中所含枳壳、桔梗进行定性鉴别；采用高效液相色谱法测定方中柚皮苷的含量。结果：薄层色谱法可鉴别出枳壳、桔梗，且阴性无干扰；柚皮苷在160～800 ng范围内呈良好线性关系，r＝0.999 9，平均回收率为98.90%，RSD＝1.32%。结论：本方法操作简便、准确可靠、重现性好，可作为川贝止咳合剂的质量控制方法。

川贝止咳合剂；薄层色谱法；高效液相色谱法；质量标准；柚皮苷

川贝止咳合剂由枳壳、桔梗、川贝、枇杷等中药组成，具有祛痰止咳、散结利咽等功效。适用于感冒、急慢性咽喉炎、急慢性支气管炎引起的咳嗽、咽痛。为了更好地控制其质量，保证其临床疗效，本实验采用TLC法对其中所含枳壳、桔梗进行定性鉴别，采用HPLC法对方中所含柚皮苷进行含量测定。

1 仪器与试药

1.1 仪器 BQ-Ⅱ型薄层自动铺板器（重庆南岸实验电器厂）；CAMAG TLC SAMPLER 4型薄层色谱自动点样仪（瑞士）；CAMAG Reprostar 4薄层成像系统（瑞士）；Agilent1200高效液相色谱仪（美国）；DAD检测器；四元梯度泵，G2170AA数据处理软件系统；Agilent TC C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5μm）；MettlerXS205DU电子分析天平（瑞士）；KQ5200DE型数控超声波清洗器（昆山）；电热恒温水浴槽（上海）；DHG -9070A型电热恒温鼓风干燥箱（上海）；美国Bedford公司Milli-Q超纯水制备仪。

1.2 试药 枳壳对照药材（批号130807～201209）、桔梗对照药材（批号130574～200809）、柚皮苷对照品（批号120736～201135）均购于中国药品生物制品检定所；川贝止咳合剂（批号140318、140319、140320），由广东省第二中医院制剂室提供）乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 薄层色谱定性鉴别

2.1 枳壳定性鉴别 取本品100 m L，以4.3%NaOH试液调pH值到10，用乙酸乙酯振摇提取两次，每次80 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为川贝止咳合剂样品溶液。另取枳壳对照药材0.5 g，加95%乙醇25 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶液，作为枳壳对照药材溶液。再取缺枳壳的阴性溶液100 mL，按样品溶液制备方法制成枳壳阴性对照溶液。根据薄层色谱法（《中华人民共和国药典》2010年一部附录VIB）试验，分别吸取上述枳壳阴性对照溶液、枳壳对照药材溶液、川贝止咳合剂样品溶液各10μL点于同一硅胶G-1%羧甲基纤维素钠薄层板上，以氯仿-丙酮（2∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯（365nm）下观察。川贝止咳合剂样品色谱中，在与枳壳对照药材色谱相应位置显相同颜色斑点，且阴性对照无干扰（见图1）。

图1 枳壳TLC图谱

2.2 桔梗定性鉴别［1］取本品10 m L，加稀盐酸3 mL，回流45 min，放冷，滤过，滤液，用氯仿振摇萃取两次，1次20 mL，合并氯仿液，蒸干，加甲醇1 mL使残渣溶解，作为川贝止咳合剂样品溶液。另取桔梗对照药材1 g，加水10 mL，稀盐酸3 m L，回流45 min，放冷，滤过，滤液，用氯仿振摇萃取两次，1次20 mL，合并氯仿液，蒸干，加甲醇1 mL使残渣溶解，作为桔梗对照药材溶液。再取缺桔梗的阴性溶液10 mL，按川贝止咳合剂样品溶液制备方法制成桔梗阴性对照溶液。根据薄层色谱法（《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VIB）试验，吸取桔梗阴性对照溶液2μL，桔梗对照药材溶液4μL，川贝止咳合剂样品溶液2μL，分别点于同一硅胶GF254-1%羧甲基纤维素钠薄层板上，以氯仿-乙醚（1∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯（254 nm）下观察。川贝止咳合剂样品色谱中，在与桔梗对照药材色谱相应位置显相同颜色斑点，且阴性对照无干扰（见图2）。

3 含量测定［2］

3.1 色谱条件 以C18为填充剂；流动相：甲基腈-水（20∶80）（用磷酸调节pH值至3）；检测波长：283nm；流速：1 mL/min；柱温：25℃。按柚皮苷峰计算理论塔板数应不＜3000。

3.2 制备对照品溶液 精密称取柚皮苷对照品适量，加甲醇分别制成每1 mL含柚皮苷80μg的溶液，即得。

3.3 制备供试品溶液和阴性供试品溶液 精密称取本品约0.2 g，装入具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定重量，加热回流1.5 h，放冷，重新称定重量，减失的重量用甲醇补足，摇匀，滤过。精密量取续滤液10 m L，置25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。同法制备阴性供试品溶液。

图2 桔梗TLC图谱

3.4 方法学考察

3.4.1 阴性干扰试验 分别吸取阴性供试品溶液、柚皮苷对照品溶液、供试品溶液各10μL于高效液相色谱仪中进行试分离，样品与对照品在相同位置有较大吸收，阴性对照无干扰。见图3～5。

图3 柚皮苷对照品溶液色谱图

图4 供试品溶液色谱图

图5 柚皮苷阴性供试品溶液色谱图

3.4.2 线性范围考察 精密吸取柚皮苷对照品溶液2、4、6、8、10 mL，置10 m L容量瓶中，加甲醇稀释定容至刻度线，摇匀，制成浓度分别为16、32、48、64、80μg/mL的对照品溶液。精密吸取上述对照品溶液各10 μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。以柚皮苷对照品进样量（X，μg）为横坐标，对照品峰面积（Y）为纵坐标，进行线性回归，得回归方程为Y＝30.7186X-1.5065（r＝0.999 9），结果表明柚皮苷进样量在160～800 ng范围内与峰面积积分值线性关系良好。

3.4.3 精密度考察 精密称取同一个批号的川贝止咳合剂（130318）样品约0.2 g，依法制备供试品溶液，精密吸取10μL，注入高效液相色谱仪，重复测定6次，以峰面积计算，RSD为0.32%，表明仪器精密度好。

3.4.4 重现性试验 取同一批样品（批号130318）6份，按上述供试品溶液方法和色谱条件测定，结果柚皮苷平均含量为44.18 mg/g，RSD为1.29%，表明该方法重现性好。

3.4.5 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、12 h进样10μL，按上述色谱条件测定峰面积，结果柚皮苷峰面积RSD为0.34%，表明供试品溶液在12 h内稳定性良好。

3.4.6 加样回收试 按加样回收率实验要求，精密称取已知含量的川贝止咳合剂样品（批号130318）约0.1 g，共9份，分别加入一定量的柚皮苷对照品，依法制备供试品溶液，精密吸取10μL，注入高效液相色谱仪中，测定，计算，结果见表1。

表1 加样回收率实验结果（n＝9）

3.4.7 样品含量测定 取三批样品（批号130318、130319、130320）约1 g，精密称定，按上述供试品溶液处理方法制备供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，以外标法计算含量，三批样品测定结果，见表2。

表2 样品含量测定结果（n＝3）

4 讨论

在枳壳的薄层鉴别中，按药典［2］方法，供试品，对照品，阴性溶液用甲醇处理，以三氯甲烷-甲醇-水（13∶6∶2）下层溶液为展开剂，供试品与对照品相应位置上未见相同颜色的斑点。文献报道枳壳薄层色谱法［3-4］，按本文方法处理，供试品与对照品相应位置上显相同颜色的斑点，且阴性无干扰。

在桔梗的薄层鉴别中，按药典［5］方法，供试品，对照品，阴性溶液用7%硫酸乙醇-水（1∶3）混合溶液，三氯甲烷处理，以三氯甲烷-乙醚（2∶1）为展开剂，供试品与对照品相应位置上未见相同颜色的斑点。文献报道桔梗薄层色谱法［6-7］按本文［1］方法处理，供试品与对照品相应位置上显相同颜色的斑点，且阴性无干扰。

枳壳为本制剂君药，柚皮苷为枳壳主要成分，故选择柚皮苷作控制本品质量的指标成分。含枳壳的中药复方制剂中柚皮苷的含量测定，文献报道高效液相色谱法［8-10］。柚皮苷含量测定方法，参照2010版《中华人民共和国药典》一部枳壳含量测定项下方法，结果柚皮苷分离较好，保留时间适宜，通过方法学考察，本方法准确、可靠，可作为川贝止咳合剂的含量测定方法。本文所建立的方法操作简便、准确可靠、重现性好，可作为川贝止咳合剂的质量控制方法。

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（2014-07-11收稿 责任编辑：曹柏）

Study on Quality Standard of Chuanbeizhike M ixture

Sun Dongmei1，Wang Mengxia2，Dong Yujuan2
（1 Guangdong Research Institute of Traditional Chinese MedicineManufacturing Technology，Guangzhou 510095，China；2 Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510405，China）

Objective：To establish the quality standard of Chuanbeizhikemixture.Methods：Thin layer chromatography（TLC）wasused to identify Fructus Aurantii，Radix Platycodonis in Chuanbeizhike Mixture.Naringin in Fructus Aurantiiwas determined by high performance liquid chromatography（HPLC）.Results：The TLC spots of Fructus Aurantiiand Radix Platycodoniswere clearwith good resolution and free of interference of negative samples.The calibration curve of HPLCwas linear in the range of160～800ng（r＝0.999 9）. The average recovery rate was98.90%，RSD＝1.32%.Conclusion：Themethod is rapid，curate，sensitive and reliable，and it can be used to control the quality of Chuanbeizhike Mixture.

Chuanbeizhike Mixture；TLC；HPLC；Quality standard；Naringin

R284

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2014.10.030

孙冬梅（1969—）硕士，主任中药师，主要从事中药质量评价研究，Tel：（020）83482683，E-mail：wmxyong＠126.com