宜春市2013年流感病毒检测结果分析

2014-02-07陈玉红魏雄杰黄秋艳

实验与检验医学 2014年6期

关键词：宜春市流感病毒流感

陈玉红，魏雄杰，黄秋艳

(宜春市疾病预防控制中心，江西宜春336000)

·调查报告·

宜春市2013年流感病毒检测结果分析

陈玉红，魏雄杰，黄秋艳

(宜春市疾病预防控制中心，江西宜春336000)

目的通过分析宜春市2013年流感病毒检测结果，探讨研究本地区流感流行特征及趋势。方法对宜春市国家流感监测哨点医院的流感样病例定期采集咽拭子，采用Real-time RT-PCR进行流感病毒核酸检测，采用MDCK细胞对核酸阳性标本进行病毒分离，HI方法进行病毒型别鉴定，用SPSS软件对检测结果进行分析。结果2013年流感病毒核酸阳性率为11.06%,其中2-5月以新甲H1N1为主，共检出43份阳性，6-12月以H3N2为主，共107份阳性；以7,8月核酸阳性率最高。全年分离到流感毒株73份，其中新甲H1N1 41份，季H3N2 25份，Bv 4份，By 3份。女性阳性率略高于男性，无年龄分布差异。结论本市2013年春季以新型甲型H1N1为优势株,夏秋冬季以H3N2亚型为主。新型甲型H1N1分离率高于H3N2。应继续加强对流感的监测。

流感病毒；核酸检测；病毒分离

DOI∶10.3969/j.issn.1674-1129.2014.06.060

流行性感冒病毒(influenza virus)是正黏病毒科(Orthomyxoviridae)的代表种，简称流感病毒，包括人流感病毒和动物流感病毒。人流感病毒分为甲(A)、乙(B)、丙(C)三型，是流行性感冒(流感)的病原体。其中甲型流感病毒抗原性易发生变异，多次引起世界性大流行[1]。宜春市疾控中心流感网络实验室负责宜春市两所监测哨点医院流感网络监测及宜春市10个县市区流感疫情监测，本文对宜春市2013年两所监测哨点医院流感监测结果进行分析，以了解本地区流感流行的特征。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞株狗肾传代细胞(MDCK)由江西省疾病预防控制中心疾检所提供，传代细胞置于液氮罐中保存。

1.1.2 试剂RNA提取采用Promega核酸纯化仪,提取试剂盒采用Promega核酸纯化仪配套试剂。Real-time RT-PCR检测试剂盒购自达安基因有限公司。流感病毒流行代表毒株及抗血清来自国家流感中心。

1.2 标本来源收集2013年宜春市两所国家流感监测哨点医院(宜春市人民医院、宜春市第二人民医院)流感样病例咽拭子，两所医院每周二、周四送样，且采样人员均为培训上岗专业人员，标本采集后保证48h内送样。全年共采集流感样病例咽拭子标本1600份，采样、送样均按照《全国流感监测方案(2010年版)》[2]要求进行。

1.3 实验方法

1.3.1 核酸检测RNA提取采用Promega核酸纯化仪,提取试剂盒采用Promega核酸纯化仪配套试剂。核酸检测采用达安基因荧光RT-PCR检测试剂，Real Time RT-PCR核酸检测按试剂盒说明书操作。此试剂盒有甲型、乙型、季节性H1、季节性H3、新甲H1N1、禽流感H5、H7、H9，该试剂盒经过了国家认证。

1.3.2 病毒分离对核酸检测阳性样本接种75%-90%成片MDCK细胞培养瓶，观察细胞有无病变，75%-100%细胞病变时进行收获，利用HA(血红细胞凝集实验)及HI(红细胞凝集抑制实验)实验对毒株进行定型，标准血清由国家流感中心提供。

1.4 统计分析使用SPSS17.0统计软件，组间比对采用卡方检验，P＜0.05时差异有统计学意义。

2.结果

2.1 核酸检测结果2013年共对1600份ILI(流感样病例)咽拭子标本进行了流感病毒核酸检测，检出核酸阳性177份，阳性率为11.06%,其中新甲H1N1阳性44份，占24.86%；季H3N2阳性110份，占62.15%；B型23份，占12.99%。其中2-5月以新甲H1N1为主，共检出43份阳性，6-12月以H3N2为主，共107份阳性；阳性率最高的是7、8两月，占36.7%。

2.2 病毒分离结果2013年对所有核酸阳性标本进行流感病毒分离，分离到流感毒株73份，其中新甲H1N1 41株，占56.16%；季H3N2 25株，占34.24%；B型Victoria系4株，占5.48%；B型Yamagata系3株，占4.12%。以3，4月份病毒分离率最高。

新甲H1N1核酸阳性标本的病毒分离率为93.18%(41/44),季H3N2、B型核酸阳性标本的病毒分离率分别为27.73%(25/110)和30.43%(7/23)。不同型别的分离率具有显著地统计学差异(P= 5.55×10-15)，新甲H1N1标本病毒分离率显著高于其他型别。

图1 2013年流感核酸检测结果

2.3 性别分布情况1600份ILI检测标本中，男性占986份，女性占614份，男女比例为1.61：1，流感病毒核酸阳性男性占97份，女性占80份，男女流感阳性率分别为9.84%和13.03%，男女流感阳性率具有统计学差异(P=0.0479)，女性阳性率略高于男性。详见表1。

表1 2013年流感检测性别分布

2.4 年龄分布情况1600份ILI检测标本中，最小的1月，最大的90岁，各年龄组流感病毒阳性率差异无统计学意义(P=0.983)。见表2。

3 讨论

2013年流感样病例监测结果显示，宜春市流感流行主要有以下特点，一是有明显的季节性。引起宜春市2013年流感毒株的流行主要有新甲H1N1、H3N2及B型，随着时间变迁呈现不同的优势毒株趋势，2-5月份，主要流行新甲H1N1,5-12月份，流行的是季节性H3N2及B型，主要以H3N2为主[3-6]。二是男女阳性率具有差异，以女性阳性率居高，可能是男女对流感普遍易感，但男女身体素质的差异，导致女性阳性率略高于男性，与其它地区有关文献报道不一致[7，9]。三是患病年龄无明显差异，与有关文献报道一致[8]。实验室病毒分离结果显示2013年新甲H1N1病毒的分离率较其他型别高。44份新甲H1N1核酸阳性标本分离到了41株毒株，仅三份未分离到毒株，病毒分离率达到了93.18%。流感病毒分离阳性率除与发病率，分离方法，细胞对病毒的敏感性等关系密切外，采样液的配制、标本采集、保存及运送各个环节都会对病毒成功分离造成影响，各个环节紧密相扣，缺一不可，有时某一环节可能会成为病毒分离成败的关键,所以病毒标本采集、保本及运送是病毒分离中非常重要的环节。新甲H1N1病毒分离率明显高于其它，原因可能主要是新甲H1N1较其他型别对MDCK更为敏感，更易培养，此外还可能与哨点医院样本采集、样本保存以及运输等环节息息相关。