群体反应性抗体特殊检测结果的探讨

聂益军，张琼

(1、南昌大学第一附属医院检验科，江西南昌330006；2、江西省人民医院，江西南昌330006)

·检验与临床·

群体反应性抗体特殊检测结果的探讨

聂益军1，张琼2

(1、南昌大学第一附属医院检验科，江西南昌330006；2、江西省人民医院，江西南昌330006)

目的通过对群体反应性抗体(panel reaction antibodies，PRA)特殊结果的探讨，了解PRA抗体产生及移植排斥反应的免疫学基础理论。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)，监测肾移植受者外周血人类白细胞抗原(HLA)-IgG抗体的水平及其特异性变化。结果无传统致敏因素受者156例中3例产生PRA抗体，百分比为1.92%；产生PRA抗体再次复查者68例中15例PRA抗体特异性发生改变，百分比为22.06%；再次移植受者15例中3例未产生PRA抗体，百分比为20%。结论(1)除妊娠、输血、移植外，感染也可导致机体产生PRA抗体；(2)PRA抗体的产生是一个复杂的机体免疫反应；(3)除PRA抗体外，其它因素(如MICA抗体、次要组织相容性抗体等)也可导致排斥反应的发生。

群体反应性抗体；肾移植；排斥反应

DOI∶10.3969/j.issn.1674-1129.2014.06.029

肾移植是晚期肾功能衰竭的有效替代治疗方法,肾移植的成功与否在很大程度上受到群体反应性抗体(PRA)介导的急慢性排斥反应的影响。肾移植受者在受到同种抗原人类白细胞抗原(HLA)免疫致敏后,外周血中容易产生PRA，其中HLA-IgG抗体是引起超急性排斥反应的关键因素,并且与急性排斥反应、慢性排斥反应和移植物功能延迟(DGF)等密切相关[1]。由于PRA具有在移植前预测排斥反应和移植后预警移植物丧失的重要作用，因此目前PRA检测已被列入肾移植组织配型的常规项目并予以监测。在江西省人民医院移植中心监测的受体中，笔者发现有3种特殊检测结果有待讨论并进行解释。现将其报告如下。

1 材料与方法

1.1 临床资料2012年11月至2013年10月期间拟接受肾移植的受者287例，其中男156例,女121例,年龄16～64岁，平均42.6岁。选取的受者为经江西省人民医院确诊为尿毒症或肾功能衰竭患者(排除肿瘤、结核史及神经系统病史)，同时与受者签订试验知情同意书。第一种特殊情况为无传统致敏因素而产生了PRA抗体。这些无传统致敏因素(即无输血、妊娠或移植史)受者156例，其中男94例,女62例,年龄16～62岁，平均41.2岁。第二种特殊情况为已产生PRA抗体再次复查者，其抗体特异性可发生改变。已产生PRA抗体再次复查者68例，其中男45例，女23例，年龄23～64岁，平均45.8岁。第三种特殊情况为再次移植受者未产生PRA抗体。再次移植受者15例，其中男9例，女6例，年龄为38～62岁，平均48.5岁。

1.2 HLA-IgG抗体的监测

1.2.1 试剂美国One Lambda公司提供的Lambda抗原板(LAT1240)。

1.2.2 HLA-IgG抗体检测方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA),监测肾移植受者外周血HLA-IgG抗体的水平及其特异性变化[2]。具体步骤如下：(1)用200μl蒸馏水溶解对照血清，彻底溶解后,加抗体稀释液1800μl配成1∶10的稀释液。(2)用300μl抗体稀释液稀释待测150μl血清。(3)在包被了HLA抗原的Tarasaki微孔板第一行中加入10μl稀释的阳性对照血清，2～6行加入第一人份受检血清，7～11行加入第二人份的受检血清，37℃孵育1h。(4)用缓冲液洗涤2次。(5)按1∶100的比例取酶联抗体10μl和抗体稀释液990μl混匀，每孔中加入10μl稀释的酶联抗人IgG抗体，37℃孵育1h。(6)甩干血清，缓冲液洗涤。(7)分别取底物A和B各500μl混匀，每孔加入10μl底物液，37℃避光孵育10～15min。(8)应用美国One Lambda公司专用软件(HLA fusion1.3.1)分析患者血清中HLA抗体水平及其特异性。

1.3 统计学分析采用SPSS16.0统计学软件进行数据处理，计数资料之间采用u检验，分别将三种特殊情况下的两类人群(即产生新的PRA抗体人群百分比与不产生新的PRA抗体人群百分比)进行对比分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 无传统致敏因素受者156例中3例产生PRA抗体，百分比为1.92%；153例未产生PRA抗体，百分比为98.08%。见表1。

2.2 产生PRA抗体再次复查者见表1。68例中15例PRA抗体特异性发生改变，百分比为22.06%；53例PRA抗体特异性未发生改变，百分比为77.94%。见表1。

2.3 再次移植受者15例中3人未产生PRA抗体，百分比为20%；12例产生PRA抗体，百分比为80%。结果见表1。

表1 群体反应性抗体特殊检测结果(%)

3 讨论

肾移植是晚期肾功能衰竭的有效替代治疗方法，但移植排斥反应的发生仍然严重困扰着临床移植。根据美国UNOS近期对57303例肾移植的数据分析，影响肾移植存活率的前五个因素为：移植手术与相关维护、供者死亡原因、HLA配型、PRA百分比、供者年龄。五个因素中移植手术与相关维护、HLA配型、PRA百分比涉及到较多的技术问题，所以PRA检测对提高肾移植的存活率具有重要的临床应用价值[3，4]。PRA是指肾移植受者体内存在的抗HLA抗体。反复输血、妊娠、移植失败等情况均使受者体内出现PRA抗体,导致患者预致敏情况[5]。资料表明,肾移植受者体内的抗HLA抗体水平的高低，可反映患者的预致敏程度,对移植物的术后效果影响非常明显。术前检测患者体内PRA水平,能够帮助外科医生合理选择供、受者和移植时机,有效提高移植物的生存率及有效率。

在大多数文献中均有报道，通过妊娠、输血、移植可造成免疫系统接触另一个体的同种抗原，导致免疫系统激活从而产生PRA抗体[5]。从结果2.1 中笔者发现在没有上述原因的病人也会出现PRA抗体，这些抗体的产生可能与感染的微生物发生交叉反应有关。这些感染的微生物可能在分子水平上与HLA抗原结构相似，导致机体产生PRA抗体。移植抗原作为外源性抗原刺激免疫系统,产生移植抗原的特异性免疫应答,是移植排斥反应的物质基础。在恰当外在干预下,甚至可“诱骗”受体免疫系统,产生针对移植抗原的特异性免疫耐受[6，7]。

机体在受到致敏原的刺激下产生PRA抗体是一个复杂的机体免疫反应，其机理至今尚未完全阐明，但可以肯定的是机体所产生的PRA抗体是一种多克隆抗体。迄今为止,我们所谈的HLA抗体都是通过特殊群体细胞或抗原检测出来的，并且许多研究所用的细胞并非直接来自供者。发生肾移植排斥的患者所拥有抗体的特异性，并不同于被动免疫所获得的抗体特异性。根据Ceppellini等研究发现,虽然通过挑选受体和供体以期获得单价特异性血清，然而免疫或致敏常常产生额外的抗体特异性，其原因尚不清楚[8]。虽然一些患者可以通过治疗调节抗体的产生，降低了抗体水平，但对另一部分患者经过治疗后依然保持抗体高滴度与宽特异性，许多年后抗体水平仍然没有降低。目前还不太了解抗体水平下降的调节因素。上述理论在一定程度上解释了结果2.2(有些患者PRA抗体发生了改变)。从等待移植患者体内剔除抗体，经过治疗后PRA抗体阴性的病例也逐渐增多，但也并不总是成功[9]。目前越来越多中心在肾移植治疗中采用不同剔除抗体的方法，常采用的方法有免疫抑制剂、血浆置换、免疫吸附和静脉注射免疫球蛋白等方法[10]。

从结果2.3中笔者发现移植排斥反应后也可能PRA阴性。再次移植患者未检出PRA抗体有两种可能，一是患者体内确实未产生抗体，二是患者体内的PRA抗体是我们暂时不能检测到的HLA抗体。肾移植排斥反应的发生有免疫性和非免疫性因素，其中非免疫性因素包括移植手术和相关维护、供者年龄和死亡原因等；免疫性因素主要有HLA抗体(即PRA)的影响,同时影响移植物的抗体也可能是针对非HLA抗原的抗体。在发生排斥的肾移植患者血清中发现的MICA抗体(抗人类主要组织相容性复合体I类相关链A抗原抗体),引起了人们的关注，因这些抗体是在内皮细胞而非淋巴细胞上检测到的。在排斥同种异体移植物的患者体内，抗体也有针对上皮细胞、单核细胞和内皮细胞系的[11]。次要组织相容性位点并不是HLA。研究显示，HLA匹配的器官移植患者中还是有出现排斥反应、肾功延迟、移植肾切除的一部分患者,由此可以证实除HLA外还有一些另外的免疫因素参与了排斥反应。MICA属于HLA-Ⅰ类分子,组成、表达和产物与HLA-Ⅰ类不大相同,有不同的基因等位,多态性不如经典的HLA基因数量多但其表达水平很高,而针对次要组织相容性位点的抗体还未被发现。抗体是体液免疫理论中关键的激发因素，但抗体是怎样通过一系列活动来产生损害尚待查明。

综上所述，PRA抗体检测在肾脏移植中具有无可替代的作用，但PRA抗体的产生受多种因素的调节。在实际工作中，应根据患者的病情及临床治疗等因素综合考虑才能更好地对PRA结果进行合理的解释或理解。

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R446.62，R392.4

A

1674-1129(2014)06-0728-02

2014-07-18；

2014-09-25)