脑出血患者外周血IL-17，IL-23的表达及意义

毕 胜 范 佳 陈 光 杨利敏 李秀玲 陈晓伟 王复新 刘 群

(吉林大学白求恩第一医院，吉林 长春 130021)

目前脑出血治疗缺乏特异、有效手段，其原因主要是脑出血后血肿周围组织损伤机制尚未完全阐明。大量研究证实炎症反应参与脑出血后的病理过程。本研究拟探讨脑出血患者外周血白介素(IL)-17、IL-23的表达及意义。

1 材料与方法

1.1主要试剂 人IL-17 ELISA 检测试剂盒、IL-23 ELISA 检测试剂盒，美国R & D公司。

1.2实验分组 实验组:脑出血患者48例，来自吉林大学白求恩第一医院神经内科，男30例，女18例，年龄33～76岁，平均(49±16)岁。根据多田公式(体积=π/6×长×宽×层面)粗略计算脑出血量，对于破入脑室的出血量不迭加。出血量约11.6～45.2 ml。所有病例均符合1995年全国第 4 次脑血管疾病学术会议修订的诊断标准〔1〕，不包括心源性、动脉炎、外伤和血液病等引起的脑出血。对照组:健康人24例，来自吉林大学白求恩第一医院体检中心，男12例，女12例，年龄26～58岁，平均(43±14)岁。两组均排除脑血管疾病家族史，无肝肾疾病、血液系统疾病、内分泌系统疾病、自身免疫病、感染性疾病。

1.3取材 分别于脑出血发病后≤6 h、6～24 h、24～72 h、>72 h抽取肘静脉血2 ml，均于清晨采取，置于抗凝管中，以2 000 r/min离心15 min 分离血清;-80℃冻存。对照组体检时取血，取材方法同前。

1.4实验方法 ELISA法检测IL-17、IL-23的水平。严格按试剂盒说明书操作。

2 结 果

2.1两组血清IL-17 水平比较 ≤6 h组实验组血清IL-17 水平与对照组相比无统计学差异(P>0.05)，6～24 h组、24～72 h组和>72 h组均显著增加(P<0.05)，24～72 h组血清IL-17 水平显著高于≤6 h组、6～24 h组和>72 h组(P<0.05)。

2.2两组血清IL-23 水平比较 ≤6 h组，6～24 h组、24～72 h组和>72 h组血清IL-23水平与对照组相比均显著增加(P<0.05)。6～24 h组血清IL-23水平显著高于≤6 h组、24～72 h组和>72 h组(P<0.05)。

3 讨 论

脑出血后组织损伤是一个相当复杂的病理过程，炎症反应在脑出血中发挥非常重要的作用。炎症是具有血管系统的活体组织对损伤发生的反应，包括炎症介质释放、体液外渗、炎症细胞迁移、组织损伤和修复等一系列复杂过程。血液中的各种细胞可分泌各种炎性介质进入脑组织并引起炎症反应。

IL-17是主要由Th17细胞产生的致炎性细胞因子〔2〕，参与脑组织的缺血再灌注损伤〔3〕。缺血缺氧是脑出血及脑缺血再灌注损伤共同的始动因素，Th17细胞是否参与脑出血的病理过程，目前国内外尚无报道。

脑组织缺血后，病灶区内脑微循环被破坏，白细胞聚集并渗透至缺血部位，出现脑水肿、血脑屏障功能受损，继发中性粒细胞、单核巨噬细胞、小胶质细胞的聚集和释放细胞因子，继发神经元坏死。在PMCAO模型中，发病1 h后，PBMC中IL-17 mRNA的表达开始增加，发病第6天，IL-17 mRNA的表达达到高峰，随后下降。据此推测IL-17 mRNA的表达与脑组织缺血缺氧后白细胞活化迁移、炎症反应发生有关〔4〕。Wang等〔5〕研究发现PMCAO模型中IL-17及其受体IL-17R表达增加，提示通过阻断IL-17/IL-17R通路可能在一定程度上控制脑缺血缺氧后的损伤。

本实验结果提示IL-17、IL-23参与人脑出血后的病理过程。脑出血后早期Th17细胞开始活化，IL-17除直接参与脑出血后炎症反应，还可能通过刺激多种细胞产生细胞因子、黏附分子，促进炎症反应的发生〔6〕。脑出血后血肿周围组织在发病24～72 h炎症反应及组织损伤最严重。IL-17的表达与脑组织炎症反应及损伤时间一致，进一步证实IL-17在促进脑出血后炎症反应中的作用。大量研究证实，脑出血72 h后，血肿周围组织白细胞数目减少，胶质细胞数目逐渐增加，体外实验研究证实，通过激活小胶质细胞Toll样受体，可促进IL-17，IL-23的产生，加剧神经损伤及神经细胞凋亡〔7〕。本研究提示IL-17的持续存在可能与脑出血后胶质细胞的活化、参与组织修复及细胞凋亡有关。

记忆性细胞被IL-23激活后分泌大量前炎症介质IL-17、IL-6、干扰素(IFN)-γ〔8〕。IL-23可趋化炎症细胞聚集与迁移，在多种炎症病灶中都有高表达〔9〕。IL-23与缺血再灌注损伤早期病变有关，IL-17与缺血再灌注延迟相时缺血半暗带神经细胞凋亡有关〔10〕。本研究提示IL-23参与脑出血后的炎症反应，并且脑出血早期IL-23即发挥重要作用。IL-23的存在及表达的增加，促进了IL-17的表达。IL-23通过刺激IL-17及其他相关细胞因子的产生，促进炎症反应的发生，加剧脑出血后的炎症反应。IL-23在脑出血后的炎症反应中持续发挥重要作用，提示可以通过调节IL-23调控IL-17的表达，达到减轻炎症反应的作用。

本研究说明，IL-17、IL-23参与脑出血后病理过程。早期适时监测致炎性细胞因子的释放，可为早期治疗提供理论依据。

4 参考文献

1王新德.各类脑血管疾病诊断要点〔J〕.中华神经科杂志，1996；29:379.

2Gaffen SL，Kramer JM，Yu JJ,etal.The IL-17 cytokine family〔J〕. Vitam Horm，2006；74(2)：255-82.

3Li HL，Kostulas N，Huang YM,etal.IL-17 and IFN-γ mRNA expression is increased in the brain and systemically after permanent middle cerebral artery occlusion in the rat〔J〕.J Neuroimmunol，2001；116(1)：5-14.

4孙创斌，胡晋红.药物作用新靶点：白细胞介素17及其受体〔J〕.国际药学研究杂志，2008；35(2)：169-72.

5Wang DD，Zhao YF，Wang GY,etal.IL-17potentiates neuronal injury induced by oxygen-glucose deprivation and affects neuronal IL-17 receptor expression〔J〕.J Neuroimmunol，2009；212(1-2)：17-25.

6Gong C，Hoff JT，Keep RF.Acute inflammatory reaction following experimental intracerebral hemorrhage in rat〔J〕.Brain Res，2000；871(1):57-65.

7Lv M，Liu Y，Zhang J,etal.Roles of inflammation response in microglia cell through Toll-like receptors 2/interleukin-23/interleukin-17 pathway in cerebral ischemia/ reperfusion injury〔J〕.Neuroscience，2011；176：162-72.

8Parham C，Chirica M，Timans J,etal.A receptor for heterodimeric cytokine IL-23 is composed of IL-12R betal and a novel cytokine receptor subunit，IL-23R〔J〕.J Immunol，2002；168(11)：5699-708.

9Shichita T，Konoeda F，Yoshimura A.Role of T lymphocytes in ischemic brain injury〔J〕.Rinsho Shinkeiqaku，2010；50(11)：878-80.

10Shichita T，Suqiyama Y，Ooboshi H,etal.Pivotal role of cerebral interleukin-17- producing gamma delta T cells in the delayed phase of ischemic brain injury〔J〕.Nat Med，2009；15(8)：946-50.