生鳖甲与醋鳖甲抗肝纤维化有效部位的HPCE指纹图谱分析

陈 凯

江苏省中医院，江苏 南京 210029

鳖甲为鳖科动物鳖的背甲，具有软坚散结、滋阴潜阳以及除蒸退热功效，常用于治疗肝纤维化，入药一般为醋制鳖甲[1]。中医认为，生鳖甲具有非常强的潜阳熄风与养阴清热功效，主要用于虚风内动、内伤虚热或者热病伤阴等病症。

1 实验材料

5000型BeckmanP/AsystemHPCE仪;FD-1A-50冷冻干燥机;78-1型磁力加热搅拌器;KQ-250B超声波清洗器。水为双蒸水，鳖甲药材来自浙江衢化医院，其中所选10批醋鳖甲是根据《中华药典》由10批生鳖甲炮制而成。

2 方法与结果

2.1 供试品溶液的制备 称取25g生鳖甲粉，加水200ml进行20min的超声提取，抽滤，所留残渣加10ml水，超声10min，合并滤液，抽滤，冷冻，取冻干粉，加入少量水进行溶解，并放在透析膜中，200ml的纯水膜外溶液，2次透析，5h/次，合并膜外溶液，同时冷冻干燥。对5.0mg/ml冻干粉水溶液进行精密称取，在通过0.22μm的滤膜进行过滤，根据鳖甲供试品相同炮制方法，对醋鳖甲供试品溶液进行炮制。

2.2 有效组分对照组与对照品溶液的制备 从本实验中鳖甲有效抗肝纤维化物质中所分离出的活性五肽，进行0.1mg/ml浓度水溶液的配制，并将其视为对照品溶液;同时把实验中药理筛选与经柱色谱分离出的活性组酚酞，进行0.1mg/ml浓度水溶液的配制，并将其视为有效组分对照组溶液，对两溶液进行分析对比。

2.3 色谱条件 57cm×75μm的熔融未涂层石英毛细管，49cm的有效长度，100mmol/L优级纯三氰甲基氨基甲烷-20mmol/L磷酸氢二钠的运行缓冲液，18KV的分离电压，254nm的检测波长，20℃的柱温[2]。

2.4 指纹图谱的测定

2.4.1 生鳖甲有效物质部位HPCE指纹图谱 通过毛细管区电泳法对供试品溶液进行制备，并根据以上色谱条件对生物鳖有效物质部位HPCE进行测定，对电泳图进行30min的记录。对17个共有峰进行标定，指纹图谱中峰面积较大与较稳定的14号峰属于参照峰s，对各共有峰保留时间和相对峰面积进行测定。结果发现，17个生鳖甲指纹图谱共有峰，存在0.94以上的HPCE图谱相似度。

2.4.2 醋鳖甲有效物质部位HPCE指纹图谱 采用相同方法对供试品溶液进行制备，并根据以上色谱条件对生物鳖有效物质部位HPCE进行测定，对电泳图进行30min的记录。对19个共有峰进行标定，指纹图谱中峰面积较大与较稳定的15号峰属于参照峰s，对各共有峰保留时间和相对峰面积进行测定。结果发现，19个生鳖甲指纹图谱共有峰，存在0.93以上的HPCE图谱相似度。

对照10批醋鳖甲与生鳖甲指纹图谱，两批相似度下降，为0.86-0.93。此外，对照10批生鳖甲与醋鳖甲指纹图谱，两批相似度也下降，为0.86-0.92。由此表明，鳖甲醋制前后，其含量与化学成分存在很大差异性。

3 讨论

实验对炮制鳖甲前后的HPCE指纹图谱进行对比与分析发现，生鳖甲与醋鳖甲抗肝纤维化有效物质部位HPCE指纹图谱峰面积与指纹峰数量都有非常大的差异性，而且醋鳖甲指纹峰要比生鳖甲多，由此表明，醋鳖甲中含有新活性五肽HGRFG指纹峰，从而阐释了醋鳖甲抗杆纤维化要比生鳖甲效果好，同时也为醋鳖甲治疗肝纤维化提供有效科学依据，为鳖甲醋法炮制机理进行深入探讨奠定良好基础。

[1]高建蓉，张赤志，邵志华，等.鳖甲对肝星状细胞增殖影响的研究[J].实用医学杂志，2007，23(11):1618-1620.

[2]陈进文，高建蓉，王光忠，等.鳖甲抗肝纤维化有效物质部位高效毛细管电泳指纹图谱研究[J].中药材，2009，32(6):848-851.