脑出血患者血清丙烯醛含量的动态变化及其意义

冯肖亚 吕涌涛 郇 英 刘 磊 孙良伟 赵修敏 陈兴旺 赵永俊

(山东省交通医院，山东 济南 250031)

动物实验中发现丙烯醛与脑出血有关〔1〕,临床上有关丙烯醛的研究较少。本研究动态检测68例急性高血压脑出血患者的血清丙烯醛水平，探讨其与脑出血量、出血部位、病情及预后之间的关系。

1 对象与方法

1.1研究对象 2009年1月至2010年12月山东省交通医院神经内科收住院急性幕上高血压脑出血患者68例为脑出血组，男38例，女30例；年龄42～79岁〔平均(60.3±10.6)〕岁；入组者均发病<24 h,均符合全国第四届脑血管病学术会议修订的高血压性脑出血诊断标准，并经头颅CT检查证实，其中伴有糖尿病10例。出血部位：壳核35例，丘脑8例，脑叶12例，尾状核6例，壳核-丘脑7例。出血量5～100 ml，平均(46.3±18.5)ml。排除严重的心、肝、肾疾病及神经系统其他疾病。选取系山东省交通医院查体中心健康体检者50例为对照组，男28例，女22例;年龄45～80〔平均(57.2±11.3)〕岁。无心、肝、肾疾病，经神经系统检查及头颅CT检查正常。

1.2丙烯醛检测方法 脑出血患者分别于发病第1、3、7、14天采静脉血3 ml，正常对照组在体检日清晨空腹采静脉血3 ml，在4℃、2 300 r/min离心10 min，分离血清，吸取上清液，装EB管，置于-80℃冰箱保存待测。

1.3试剂 丙烯醛标准品(纯度98%)、丙烯醛-DNPH衍生物的标准品(纯度为98%)均购自Sigma公司,2,4-二硝基苯肼(DNPH),AR;二氯甲烷,AR;甲醇,色谱纯;乙腈,色谱纯;实验用水均为去离子水，MT型样品净化富集柱(BOND ELUTEC18;1500MG),购自天津开发区富集技术发展公司。

1.4仪器及色谱条件 岛津LC-4A高效液相色谱仪,二极阵列检测器,工作波长为360 nm,C-R2AX色谱数据处理机,BAS-C18色谱柱(250.0 mm×4.6 mm)。流动相为甲醇-乙腈-水(70∶12∶18，V/V)，流速1 ml/min，进样量10 μl,柱温40℃。

1.5实验步骤 取0.5 ml血清,加入2 ml醋酸盐缓冲液(pH=5),再加入2 ml的DNPH饱和水溶液,振摇,室温下反应1 h；然后,以注射器吸取2 ml此反应液,经C18净化柱富集纯化,再以甲醇洗脱富集物,摇匀,进行色谱分析,标准曲线法定量。

1.6病情及预后判断 患者入院时记录入院时间、入院时血压水平及检测血糖水平。发病3 d内进行神经功能缺损(NDS)评分，轻型<15分，中型16～30分，重型31～45分。发病后3个月随访，由经过专门培训的专业技术人员采用改良的Rankin评分(mRS)评价神经功能转归及残障水平，mRS评分3～5分为有较严重伤残，0～2分为仅有轻度残疾或无遗留症状。

2 结 果

2.1两组血清丙烯醛水平比较 脑出血组患者血清丙烯醛水平均在发病第1天即明显升高为(1.26±0.31)ng/ml，第3天为(1.96±0.53)ng/ml(P<0.05)，第7天达到高峰(3.23±0.87)ng/ml，第14天(2.14±0.60)ng/ml仍高于正常对照组〔(0.58±0.17)ng/ml,P<0.05〕。

2.2血清丙烯醛水平与出血量、脑水肿体积、病情及神经功能的关系 经相关分析显示脑出血组第7、14天血清丙烯醛水平与最终出血量具有明显相关性。脑出血组血清丙烯醛水平均与脑水肿体积、NDS评分、mRS评分呈正相关，以第7天关系最为密切。见表1。

2.3血清丙烯醛水平与血肿扩大的关系 脑出血组中有12例发生了血肿扩大,5例死亡,血肿扩大的12例患者第1天血清丙烯醛水平为(2.01±0.65)ng/ml，其余56例第1天血清丙烯醛水平为(1.26±0.31)ng/ml，两者具有显著差异(P<0.01)。说明血清丙烯醛水平与血肿扩大具有相关性，第1天丙烯醛水平高者血肿扩大的风险较高。

3 讨 论

丙烯醛是精胺/亚精胺代谢的主要毒性产物之一，在体内以两种形式存在，一是游离状态，二是和蛋白结合形成蛋白共轭丙烯醛。本研究显示丙烯醛的水平和脑水肿体积呈正相关，说明丙烯醛能够影响脑水肿的形成。有研究表明丙烯醛可以引起谷胱甘肽水平下降，进而诱导活性氧(ROS)的产生〔1～3〕。ROS是生物体内的氧自由基，包括氧和含氧的高反应活性分子(如超氧化物阴离子、组织过氧化物和自由基等)，ROS可引起脂质过氧化，造成DNA链断裂和氧化性损伤、蛋白-蛋白交联、蛋白-DNA交联等。由于大部分的反应都在由膜结构提供的平台上进行，因此，脂质过氧化对膜的损伤是造成生物体氧化损伤的主要原因，它使膜的通透性增加，膜结构及其功能受到损伤；有研究表明丙烯醛可引起细胞内钙超载〔4〕，而胞内钙超负荷是各种原因引起细胞死亡的最终必经之路；以上可能是丙烯醛导致脑细胞水肿的原因。同时血清丙烯醛的水平和脑出血患者的病情和预后有关，这和以往的研究结果相同〔5〕，本研究显示脑出血患者血清丙烯醛水平越高，患者的脑水肿面积越大，脑细胞损伤越严重，病情就愈严重；高含量丙烯醛持续时间越长，患者预后越差。本研究还发现丙烯醛和再出血具有相关性，脑出血第1天丙烯醛含量高者血肿扩大的风险较大，脑卒中后丙烯醛主要来自多胺的代谢，但丙烯醛还是脂质过氧化的产物，丙烯醛含量高的患者，同时也说明脂质过氧化反应较重，脂质过氧化产生丙烯醛，丙烯醛诱导脂质过氧化反应，形成恶性循环，对血管内膜和细胞膜的损伤就越重，血管就容易破裂。本研究发现第1天丙烯醛含量>2.3 ng/ml脑出血患者均发生了血肿扩大。总之，脑出血患者血清丙烯醛明显升高，可以作为脑卒中的血清学标志物〔6，7〕，而且和出血量、脑水肿体积、病情、预后及血肿扩大相关，这为脑出血的治疗和血肿扩大的预防提供新的契机。

4 参考文献

1Di Napoli M,Papa F,Bocola V.C-reactive protein in ischemic stroke:an independent prognostic factor〔J〕.Stroke,2001；32(4):917-24.

2Di Napoli M,Papa F,Bocola V.Prognostic influence of increased C-reactive protein and fibrinogen levels in ischemic stroke〔J〕.Stroke,2001；32(1):133-8.

3Di Napoli M,Papa F.Clinical use of C-reactive protein for prognostic stratification in ischemic stroke:has the time come for including it in the patient risk profile〔J〕?Stroke,2003；34(2):375-6.

4Curb JD,Abbott RD,Rodriguez BL,etal.C-reactive protein and the future risk of thromboembolic stroke in healthy men〔J〕.Circulation,2003；107(15):2016-20.

5Muir KW,Weir CJ,Alwan W,etal.C-reactive protein and outcome after ischemic stroke〔J〕.Stroke,1999；30(5):981-5.

6Winbeck K,Poppert H,Etgen T,etal.Prognostic relevance of early serial C-reactive protein measurements after first ischemic stroke〔J〕.Stroke,2002；33(10):2459-64.

7Agrawal A,Shrive AK,Greenhough TJ,etal.Topology and structure of the C1q-binding site on C-reactive protein〔J〕.J Immunol,2001；166(6):3998-4004.