微柱凝胶法在新生儿溶血病检测中的应用效果

杨丽

微柱凝胶法在新生儿溶血病检测中的应用效果

杨丽

目的 探讨微柱凝胶法对新生儿溶血病的检测效果。方法 对 214 例疑似新生儿溶血病患儿采用微柱凝胶法检测 , 并对结果进行分析。结果 214 例患儿中三项试验均为阳性者约占 29.4% ；游离、释放试验阳性 , 直抗试验阴性者约占 50.5% ；直抗、释放试验阳性 , 游离试验阴性者约占 6.1% ；直抗、游离试验阴性 , 释放试验阳性者约占 3.3% ；确诊患儿抗体释放试验均为阳性。结论 微柱凝胶法检测新生儿溶血病血清用量少 , 影响因素少 , 灵敏度及特异性良好 , 结果易保存 , 临床应用效果满意。

新生儿溶血病 ；微柱凝胶法 ；检测 ；效果

新生儿溶血病 (hemolytic disease of the newborn, HDN)黄疸可造成患儿大脑不可逆损害 , 生存质量降低 , 早期确诊对预后十分重要 , 微柱凝胶法血清学检测灵敏度高 , 结果稳定 , 2011 年 1 月 ～2013 年 11 月作者对 214 例新生儿溶血病疑似患儿采用微柱凝胶法检测 , 报告如下。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 214例患儿中男 136例 , 女 78例 , 出生日龄 12 h~7 d, 均为 ABO血型系统 , 临床主要表现为黄疸、贫血、高胆红素血症、肝脾肿大等 , 排除感染、葡萄糖 -6-磷酸脱氢酶缺乏等可致溶血之疾病 , 初诊疑似母婴血型不合新生儿溶血病。新生儿溶血病诊断标准：①患儿母亲血清中有免疫性血型抗体 ；②血清总胆红素 >229 μmol/L, 有贫血症状 ；③患儿血型与母亲血型免疫性抗体一致 , 抗体释放试验结果阳性 ；结合临床表现 , 可确诊新生儿溶血病。

1. 2 检测方法 微柱凝胶卡、专用孵育箱、专用离心机、抗人球蛋白检测卡等由达亚美公司提供；ABO血型鉴定及新生儿溶血病三项血清学检测严格执行相关标准［1］。

1. 2. 1 采用新生儿及母亲抗凝血做 ABO血型鉴定 , 微柱凝胶卡加患儿 0.8%红细胞悬液 50 μl, 离心 5 min后观察直接抗人球蛋白试验结果 , 红细胞聚集在凝胶卡上或中部者为阳性 ,红细胞沉积凝胶卡底部者为阴性。

1. 2. 2 游离抗体试验及抗体释放试验 在凝胶卡中分别加入患儿血清或红细胞放散液 50 μl, 患儿红细胞放散液按文献制备 , 按标记分别加入 0.8%A细胞、B细胞、O细胞悬液各50 μl, 置专用孵育器内 37℃孵育 15 min后 , 离心 5 min, 观察结果 , 阳性结果判断标准同上。

1. 3 检测结果判定标准 对三项试验同时阳性者可确诊新生儿溶血病；未同时出现阳性者以抗体释放试验阳性为诊断标准 ；直接抗人球蛋白试验和 (或 )游离抗体试验阳性而抗体释放试验阳性者 , 结合临床表现综合分析。

1. 4 统计学方法 采用 SPSS15.0统计软件处理数据 , 计量资料以均数 ± 标准差 ( x-±s)表示 , 采用 t检验 , 计数资料采用χ2检验。以 P＜0.05为有统计学意义。

2 结果

2. 1 214例患儿中直接抗人球蛋白试验阳性者 81例 (37.9%),抗 体 游 离 试 验 阳 性 170例 (79.4%), 抗 体 释 放 试 验 阳 性 193例 (90.2%)；抗体释放试验阳性与临床诊断符合率约 90.2% (193/214)。

2. 2 214例中三项试验均为阳性者 63例 , 约占 29.4%；游离、释放试验阳性 , 直抗试验阴性者 108例 , 约占 50.5%；直抗、释放试验阳性 , 游离试验阴性者 13例 , 约占 6.1%；直抗、游离试验阴性 , 释放试验阳性者 7例 , 约占 3.3%；三项试验均为阴性者 9.8%。

2. 3 214例中确诊新生儿溶血病 193例 , 确诊患儿抗体释放试验均为阳性 , 其中母、婴血型 O-A者 92例 (47.7%), 母、婴血型 O-B者 101例 (52.3%), 两者比较差异无统计学意义(P＞0.05)。

3 讨论

新生儿溶血病为患儿母体内存在与胎儿红细胞不相匹配的 IgG 血型抗体 , 引起同种被动免疫性疾病。母婴血型不合致母体内免疫系统被动激活 , 产生对应胎儿红细胞抗原的特异性同种免疫抗体 IgG, 经胎盘进入胎儿体内与其红细胞结合 , 引发同种免疫性溶血反应 , 为新生儿溶血病的主要原因 ,临床以 ABO 血型系统所致同种免疫性溶血病最常见 , 其次为 Rh 血型系统 , 多发于胎儿及新生儿 , 引起患儿高胆红素血症、贫血、水肿、肝脾肿大等临床表现 , 重者可致胆红素脑病 ,有一定的致残率和病死率［2］。

新生儿溶血病确诊依赖于直接抗人球蛋白试验、抗体游离试验及抗体释放试验 , 三项试验的临床意义不同 , 抗体释放试验、直接抗人球蛋白试验为新生儿溶血病确诊试验 , 而游离抗体试验检测患儿血清中血型抗体 , 检测结果有助于患儿预后评估 , 三项试验以抗体释放试验最具诊断价值 , 直接抗人球蛋白试验、抗体游离试验阴性者 , 抗体释放试验阳性即可诊断新生儿溶血病［3］。

患儿体内游离抗体及致敏红细胞随发病时间延长而减少 , 大部分血型抗体以抗原抗体复合物形式存在 , 失去免疫反应性 , 导致检出阳性率降低［4］, 检测越早者阳性率越高。新生儿溶血症状较重者 , 血中抗体滴度较高 , 直接抗人球蛋白试验多为强阳性 , 结合患儿临床表现等 , 有助于确诊新生儿同种免疫性溶血病 , 排除其他原因所致黄疸。

微柱凝胶法检测可调节凝胶浓度 , 控制凝胶间隙 , 离心后的抗体致敏红细胞存留于微柱上段 , 或分布于凝胶中 , 未致敏红细胞经凝胶间隙至微柱底部 , 形成不同强度凝集反应 ,离心效果使得凝集、未凝集细胞分层及阳性、阴性区分较为明显 , 对 ABO 血型系统新生儿溶血病检测灵敏度略高于试管法 , 凝集强度高于试管法 , 对 ABO 血型系统、Rh 血型系统新生儿溶血病患儿 IgG 抗体特异性检测与试管法检测结果一致［5］。与试管法检测比较 , 具有血清用量少 , 检测结果影响因素少 , 灵敏度高 , 结果易保存 , 步骤减少 , 操作简单等优点。

本研究中三项试验均为阳性者约占 29.4% ；游离、释放试验阳性 , 直抗试验阴性者约占 50.5%；直抗、释放试验阳性 ,游离试验阴性者约占 6.1% ；直抗、游离试验阴性 , 释放试验阳性者约占 3.3% ；确诊患儿抗体释放试验均为阳性 , 灵敏度及特异性良好 , 应用效果满意。

［1］叶应妩 ,王毓三 ,申子瑜 .全国临床检验操作规程 .第 3 版 .北京 : 中华人民共和国卫生部医政司 , 2006:267-268 .

［2］刘颖 .新生儿 Rh 血型不合溶血病基囚诊断及治疗进展 .中华新生儿科杂志 , 2012,27(6):428.

［3］柳美秀 ,陈超 ,华爱兰 .新生儿母婴血型不合溶血病的实验室诊断技术 .中国新生儿杂志 , 2011,26(3):204-205.

［4］吴红 ,熊莉 ,孙瑜 ,等 . 63 例新生儿溶血病血清学检测结果分析 .江西医学院学报 , 2009,49(1):124-126.

［5］张勇萍 ,安宁 ,李娜 ,等 .微柱凝胶法与试管法检测新生儿溶血病免疫性抗体的比较 .临床血液学杂志 , 2011,24(12):697-701.

2014-04-16］

464000 信阳市中心医院检验科