藏药四臣方急毒性实验研究

格桑次仁 余日跃

(1.西藏藏医学院，西藏 拉萨 850000； 2.江西中医药大学，江西 南昌 330004)

藏药四臣是藏医名著中的经典处方，是由甘草、露尔木(又名螃蟹甲)、岩白菜等4 味藏药组成，具有非常显著的清热解毒、止咳平喘、润喉祛痰作用。长期的临床证实藏药四臣具有很好的止咳作用，对于多种咳嗽有很好的治疗作用，现拟开发其为治咳新药。

1 实验方法

1.1 动物分组: 取健康正常昆明种小白鼠，体重18 ～22g，雌雄各半，按体重随机分组。

1.2 药液配制: 水提液的制备: 将甘草、螃蟹甲、岩白菜、猪毛蒿制成饮片，恒温箱内(45℃)干燥4h，按1.0: 1.3: 1.2: 1.0 比例依次称取上述4 种生药(本试验取总生药量500g，依次为109.65g、145.85g、134.85g、109.65g)，加入10 倍生药量蒸馏水浸泡2h，回流提取2h，过滤，滤渣，加入8 倍生药量蒸馏水，继续回流2h，过滤;混合两次提取液，于旋转蒸发器内(60℃)蒸发浓缩至1g 生药/mL(本试验浓缩至500mL)。存冰箱备用。(醇提液提取工艺同上，提取溶剂为60%乙醇)。

1.3 正式实验—改良寇氏法［1-2］

醇提液: 按改良寇氏法设计，各剂量组随机分配小鼠10 只，雌雄各半，共6 组，以Dmax 为最高剂量组，组间剂量比值确定为1: 0.8。分组完毕和算出各组每只小鼠给药剂量后，按“低比稀释法”配药。分别按40mL/kg 灌胃给药1次(注: ①由于备用供试药液为1g/mL，将其至旋转蒸发器中蒸发浓缩至大于4g 生药/mL 时，药液已成糊状，不便灌胃给药，故高剂量组(前两组)均分2 次给药，每次给药浓度为原浓度的一半，2h 后第二次给药;②由于预先估计在给药剂量为320.0g 生药/kg(Dmax)和256.0g 生药/kg 可能同时出现100%死亡效应，故此试验中不对给药剂量为320.0g 生药/kg 进行试验)。

水提液: 水提液在预试验中显示毒性较醇提液低，预计不能测定LD50，此试验中尝试性设5 个剂量组，各剂量组随机分配小鼠10 只，雌雄各半。以280.0g 生药/kg 为最高剂量，组间剂量比值确定为1: 0.8。分组完毕和算出各组每只小鼠给药剂量后，按“低比稀释法”配药。分别按40mL/kg 灌胃给药1 次(注: 由于备用供试药液为1g/mL，将其至旋转蒸发器中蒸发浓缩至大于3.5g/mL 时，药液已成糊状，不便灌胃给药，故高剂量组(前两组)均分2 次给药，每次给药浓度为原浓度的一半，2h 后第二次给药)。

给药后逐日观察14d，并记录毒性反应，死亡数和死亡情况。试验完毕后统计各组死亡率，并进行统计计算。

2结 果

2.1 供试动物的主要表现: 醇提液和水提液，在给药后较长时间内，小鼠均表现嗜睡、活动减少、呼吸加快的症状，少数小鼠有腹泻症状，且雄性多于雌性。所测小鼠均在给药4h 后开始死亡，在48h 后死亡数基本固定。小鼠死亡前翻正反射消失，前后肢伸直，稍有抽搐。对濒临死亡或死亡不久的小鼠进行解剖，可见胃内有大量棕黑色药液，肝脏脏面光滑，暗红色。有少量死亡小鼠出现轻度肺部红肿。

2.2 藏药四臣60% 乙醇提取液对小白鼠灌胃给药的LD50: 四臣60%乙醇提取液对小鼠灌胃给药的LD50 为203.00g0.0064 生药/kg，95%可信限为197.24 ～208.93g生药/kg。

2.3 藏药四臣水提取液对小白鼠灌胃给药急性毒性试验结果: 水提液在最大给药剂量280.0g 生药/kg 时，对小鼠的死亡率仅为70%，224.0g 生药/kg 时仅为10%，从第3组小鼠，给药剂量为179.2g/kg 开始，即不出现小鼠死亡效应。故不能测定水提液对小白鼠的LD50，可对其做最大给药量试验进行安全性研究。

通过本实验测定不同工艺的藏药四臣(60%乙醇提取液及水提液)的急性毒性反应，从而判定其毒性和安全性，为深入研究藏药四臣工艺选择、药效研究、以及开发为新药提供实验依据。

［1］周立国.药物毒理学［M］. 北京： 中国医药科技出版服社，2003.146 ～161.

［2］陈 奇.中药药理研究方法学［M］. 北京： 人民卫生出版社，1993.112 ～115.