独一味化学成分的研究(Ⅰ)

梅之南，尹雪霏，丁 昕，熊 慧，郑亚男

(中南民族大学 药学院，武汉 430074)

独一味[Lamiophlomisrotata(Benth.) Kudo]为唇形科独一味属唯一物种，多年生草本植物，其性微寒，味苦，有小毒，有活血化瘀、消肿止痛、抗菌消炎、扶正固本和提高免疫力之功效[1].它是青藏高原特有，广泛分布于西藏，在青海、甘肃、四川和云南亦有分布.独一味中主要有效成分为环烯醚萜苷类、黄酮类和苯乙醇苷类化合物[2]，为了寻找新型抗炎镇痛类活性物质，进一步明确其药效基础，本文对其地上部分的乙酸乙酯部位进行了系统的化学成分研究.

1 材料与方法

1.1 仪器和试药

高效液相色谱仪(Ultimate 3000半制备型, 戴安中国有限公司)，分析型高效液相色谱柱(HC-C18, 4.6 mm×250.0 mm, 5 μm, Agilent)，制备型高效液相色谱柱(5U-C18-100A,10.0 mm×250.0 mm, 5 μm, Luna)，旋转蒸发器(RE-52型, 上海亚荣生化仪器厂)，循环水真空泵(SHZ-DIII型, 巩义市子华仪器有限公司)，三用紫外分析仪(ZF-I型, 上海顾村电光仪器厂)，摩尔超纯水机(分析型1015a, 上海摩勤科学仪器有限公司)，薄层色谱硅胶板G254、100～200目层析硅胶、200～300目层析硅胶(青岛海洋化工厂)，MCI色谱柱(CHP20P,120 μm, 日本三菱化学株式会社).甲醇、乙腈为色谱纯(美国天地试剂公司)，其他试剂均为分析纯(国药集团化学试剂有限公司)，试验用蒸馏水与超纯水为实验室自制.

独一味药材由西藏奇正藏药股份有限公司提供，由张樱山高级工程师鉴定为唇形科独一味属独一味[Lamiophlomisrotata(Benth.) kudo]的干燥地上部分.

1.2 提取和分离

取独一味地上部分19 kg，粉碎后放入容器中，以7倍量70%乙醇冷浸，室温放置48 h，取浸出液，再加入新的70%乙醇浸泡提取，共3次.过滤并合并浸出液，减压浓缩回收乙醇至浸膏(黑色粘稠状)，取浸膏的2/3用于化学成分测定，共4935 g.浸膏以水混悬，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，回收溶剂后得4个部分.取乙酸乙酯部位190 g，选用硅胶柱色谱(3000 g, 12 cm×120 cm)，以环己烷-乙酸乙酯梯度洗脱(20∶1，10∶1，5∶1，3∶1，1∶1，1∶3，1∶5，纯乙酸乙酯，纯甲醇)，通过薄层色谱分析合并相似组份，标记为A-R组.清洗O、N两组份沉淀，得到化合物1、2；纯化D组结晶得化合物3；O组除去沉淀部分经反复硅胶色谱(二氯甲烷-甲醇梯度洗脱)及HPLC得到化合物4、5；取H组，经MCI色谱(水-乙醇梯度洗脱)、重结晶、HPLC等方法进行分离，得到化合物6～10.

2 结构鉴定

化合物1：淡黄色粉末，m.p.250～253℃，UVλmax(MeOH，nm): 256，349.1H NMR(400 MHz，MeOD)δ: 12.97(1H，s，5-OH)，10.03(1H，s，3′-OH)，9.46(1H，s，4′-OH)，7.43(1H，dd，J= 8.4，2.0 Hz，H-6′)，7.40(1H，d，J= 1.9 Hz，H-2′)，6.88(1H，d，J= 8.4 Hz，H-5′)，6.77(1H，d，J= 1.9 Hz，H-8)，6.74(1H，s，H-3)，6.42(1H，d，J= 1.9 Hz，H-6)，5.06(1H，d，J= 7.3 Hz，Glu H-1).13C NMR(100 MHz，DMSO)δ: 181.9(C-4)，164.5(C-7)，163.0(C-2)，161.2(C-9)，157.0(C-5)，149.9(C-4′)，145.8(C-3′)，121.4(C-1′)，119.2(C-6′)，116.0(C-5′)，113.6(C-2′)，105.4(C-10)，103.2(C-3)，99.9(C-6)，99.5(Glu C-1)，94.7(C-8)，77.2(Glu C-5)，76.4(Glu C-3)，73.1(Glu C-2)，69.5(Glu C-4)，60.6(Glu C-6).以上数据与文献[3]报道对照基本一致，故鉴定化合物1为木犀草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(luteolin-7-O-β-D-glucoside).

化合物2：淡黄色粉末，m.p.180～181℃，UVλmax(MeOH，nm): 260，340.1H-NMR(500 MHz，MeOD)δ: 7.93(2H，d，J= 8.8 Hz，H-2′，6′)，6.96(2H，d，J= 8.8 Hz，H-3′，5′)，6.84(1H，d，J= 2.0 Hz，H-8)，6.71(1H，s，H-3)，6.51(1H，d，J= 2.1 Hz，H-6)，5.10(1H，d，J= 7.2 Hz，Glu-H-1).13C NMR(125 MHz，MeOD)δ: 183.9(C-4)，166.5(C-7)，164.7(C-2)，162.9(C-4′)，162.8(C-9)，158.9(C-5)，129.7(C-2′，6′)，123.0(C-1′)，117.2(C-3′，5′)，107.1(C-10)，104.3(C-3)，101.6(C-6)，101.1(Glu C-1)，96.1(C-8)，78.5(Glu C-5)，77.9(Glu C-3)，74.7(Glu C-2)，71.2(Glu C-4)，62.4(Glu C-6).以上数据与文献[4]报道对照基本一致，故鉴定化合物2为芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(apigenin-7-O-β-D-glucoside).

化合物3：白色针晶，m.p.137～139℃.13C NMR(126 MHz，MeOD)δ: 141.4(C-5)，121.9(C-6)，71.7(C-8)，57.3(C-14)，56.6(C-17)，50.7(C-9)，46.4(C-24)，42.8(C-13)，42.3(C-4)，40.2(C-16)，37.8(C-1)，37.0(C-10)，36.6(C-20)，34.4(C-22)，32.4(C-8)，32.3(C-7)，31.6(C-2)，29.6(C-25)，28.7(C-12)，26.5(C-23)，24.7(C-15)，23.5(C-28)，21.5(C-11)，20.0(C-27)，19.6(C-26)，19.3(C-19)，19.1(C-21)，12.2(C-18)，12.1(C-29).以上数据与文献[5]报道对照基本一致，故鉴定化合物3为β-谷甾醇(β-sitosterol).

化合物4：淡黄色粉末，m.p.232℃.1H NMR(400 MHz，MeOD)δ: aglycone moiety: 2.78(2H，t，J= 7.0 Hz，H-α)，3.91～4.04(2H，m，H-β)，6.55(1H，dd，J= 8.0 ，1.6 Hz，H-6)，6.66(1H，d，J= 8.4 Hz，H-5)，6.68(1H，d，J= 1.6 Hz，H-2); caffeic moiety: 6.27(1H，d，J= 15.9 Hz，H-β′ )，6.77(1H，d，J= 8.1 Hz，H-5) ，6.95(1H，d，J= 8.2 Hz，H-6) ，7.05(1H，s，H-2)，7.58(1H，d，J= 15.9 Hz，H-α); glucose moiety: 3.26 ～ 4.07(5H，m，H-2-6)，4.37(1H，d，J= 7.9 Hz，H-1); rhamnose moiety: 1.08(3H，d，J= 6.1 Hz，H-6)，3.26～4.04(5H，m，H-2-6)，5.18(1H，s，H-1).13C NMR(100 MHz，MeOD)δ: aglycone moiety: 36.6(C-7)，116.5(C-5)，116.3(C-2)，121.2(C-6)，131.4(C-1)，146.1(C-4)，144.7(C-3); caffeic moiety: 114.6(C-8)，115.2(C-2)，117.1(C-5)，123.2(C-6)，127.6(C-1)，146.8(C-3)，148.0(C-7)，149.8(C-4)，168.3(C-9); glucose moiety: 62.3(C-6)，70.4(C-4)，76.2(C-2)，76.0(C-5)，81.6(C-3)，103.1(C-1); rhamnose moiety: 18.4(C-6)，70.5(C-2)，72.0(C-5)，72.3(C-3)，72.3(C-4)，104.2(C-1).以上数据与文献[6]报道对照基本一致，故鉴定化合物4为毛蕊花糖苷(verbascoside).

化合物5：无色针晶(乙醇)，m.p.158～159 ℃.1H NMR(500 MHz，MeOD)δ: 7.08(2H，d，J= 8.4 Hz，H-2，6)，6.70(2H，d，J= 8.4 Hz，H-3，5)，4.29(1H，d，J= 7.8 Hz，H-1′)，2.83(2H，t，J=7.0 Hz，H-7)，3.67(2H，t，J= 7.0 Hz，H-8)，3.15～4.05(6H，m，H-2′～6′).13C NMR(125 MHz，MeOD)δ: 156.9(C-4)，131.0(C-2，6)，130.7(C-1)，116.2(C-3，5)，104.4(C-1′)，78.1(C-5′)，78.0(C-3′)，75.1(C-2′)，72.0(C-4′)，71.6(C-8)，62.7(C-6′)，36.4(C-7).以上数据与文献[7]报道对照基本一致，故鉴定化合物5为红景天苷(salidroside).

化合物6：淡蓝色晶体，m.p.191～193 ℃，UVλmax(MeOH，nm): 218，240，325.1H NMR(400 MHz，MeOD)δ: 7.53(1H，d，J= 15.9 Hz，H-7)，7.03(1H，d，J= 1.6 Hz，H-2)，6.93(1H，dd，J=8.1，1.6 Hz，H-6)，6.77(1H，d，J= 8.1 Hz，H-5)，6.21(1H，d，J= 15.8 Hz，H-8).13C NMR-DEPT(100 MHz，MeOD)δ: 171.1(C-9)，149.5(C-4)，147.1(C-7)，146.8(C-3)，127.8(C-1)，122.9(C-5)，116.5(C-2)，115.5(C-6)，115.1(C-8).以上数据与文献[8]报道对照基本一致，故鉴定化合物6为咖啡酸[3-(3,4-dihydroxy-phenyl)-acrylic acid].

化合物7：白色针晶，m.p.204～205 ℃，UVλmax(MeOH，nm): 205，217，260.1H NMR(400 MHz，MeOD)δ: 7.44～7.40(2H，m，H-2，6)，6.79(1H，d，J= 8.4 Hz，H-6).13C NMR-DEPT(100 MHz，MeOD)δ: 170.3(COOH)，151.5(C-4)，146.1(C-3)，123.9(C-1)，123.2(C-6)，117.7(C-2)，115.7(C-5). 以上数据与文献[8]报道对照基本一致，故鉴定化合物7为3,4-二羟基苯甲酸(3,4-dihydroxybenzoic acid).

化合物8：黄色结晶，m.p.204～205 ℃，UVλmax(MeOH，nm): 210，327.1H NMR(400 MHz，MeOD)δ: 7.24(1H，d，J= 3.0 Hz，H-6)，6.94(1H，dd，J= 8.9，3.0 Hz，H-4)，6.76(1H，d，J= 8.9 Hz，H-3).13C NMR-DEPT(100 MHz，MeOD)δ: 173.5(COOH)，156.4(C-2)，150.5(C-5)，124.5(C-4)，118.8(C-6)，116.0(C-3)，114.0(C-1).以上数据与文献[9]报道对照基本一致，故鉴定化合物8为龙胆酸(2,5-dihydroxy-benzoic acid).

化合物9：褐色油状，UVλmax(MeOH，nm): 197，282.1H NMR(400 MHz，MeOD)δ: 6.68(1H，d，J= 8.0 Hz，H-6)，6.64(1H，d，J= 1.6 Hz，H-2)，6.52(1H，dd，J= 7.9，1.8 Hz，H-5)，3.67(1H，t，J= 7.3 Hz，H-8)，2.66(2H，t，J= 7.3 Hz，H-7).13C NMR-DEPT(100 MHz，MeOD)δ: 146.1(C-4)，144.6(C-3)，131.7(C-1)，121.2(C-6)，117.0(C-5)，116.3(C-2)，64.6(C-8)，39.7(C-7).以上数据与文献[10]报道对照基本一致，故鉴定化合物9为3,4-二羟基苯乙醇(3,4-dihydroxyphenylethanol).

化合物10：灰色针晶，UVλmax(MeOH，nm): 203，227，345.1H NMR(400 MHz，MeOD)δ: 7.78(1H，d，J= 9.4 Hz，H-7)，6.93(1H，s，H-6)，6.75(1H，s，H-3)，6.18(1H，d，J= 9.4 Hz，H-8).13C NMR-DEPT(100 MHz，MeOD)δ: 164.3(COOH)，152.0(C-2)，150.5(C-4)，146.1(C-7)，144.6(C-5)，113.0(C-8)，112.8(C-1)，112.5(C-6)，103.6(C-3).以上数据与文献[11]报道基本一致，故鉴定化合物10为2,4,5-三羟基肉桂酸(2,4,5-trihydroxycinnamic acid).

化合物11：黄色油状，UVλmax(MeOH，nm): 208.1H NMR(400 MHz，MeOD)δ: 6.90(1H，dd，J= 15.6，5.0 Hz，H-3)，5.97(1H，dd，J= 15.6，1.0 Hz，H-2)，4.15(1H，q，J=5.6 Hz，H-4)，1.58(1H，m，H-5)，0.96(3H，t，J= 7.4 Hz，H-6).13C NMR-DEPT(100 MHz，MeOD)δ: 170.3(C-1)，152.2(C-3)，121.4(C-2)，72.9(C-4)，30.3(C-5)，10.3(C-6).以上数据与文献[12]对照基本一致，故鉴定化合物11为2E-4-羟基己烯酸[(E)-4-hydroxyhex-2-enoic acid].

3 结语

本文对独一味的乙酸乙酯部位的化学成分进行了分离，获得了11个化合物，分别鉴定为木犀草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(1)、芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(2)、β-谷甾醇(3)、毛蕊花糖苷(4)、红景天苷(5)、咖啡酸(6)、3,4-二羟基苯甲酸(7)、龙胆酸(8)、3,4-二羟基苯乙醇(9)、2,4,5-三羟基肉桂酸(10)、2E-4-羟基己烯酸(11).其中化合物5和8～11为首次从该植物中分离得到.此外，红景天苷(5)在独一味中的分离，为独一味的抗氧化功能[13]提供了一定的物质基础，说明独一味存在抗疲劳、抗氧化损伤的功效[14]，提示其进一步的研究开发方向.本课题组将继续深入分析独一味的化学成分，以期望分离获得更多新的有效成分，为独一味的药效基础及其作为主要原料的民族药物开发提供实验基础和理论依据.

参 考 文 献

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