中药复方对蛋鸡肠道菌群和消化酶活性的影响

2014-01-22王立辛刘海东范正征

饲料工业 2014年15期

■王立辛刘海东范正征王雷

（1.辽宁医学院畜牧兽医学院，辽宁锦州 121001；2.沈阳市种畜禽监督管理站，辽宁沈阳 110033）

随着畜禽养殖业的集约化发展，出于疾病治疗及预防的目的，抗生素类饲料添加剂被大量使用，虽然其对促进畜禽生产具有一定作用，但是由于使用和管理不当，出现很多弊端，如产生耐药菌株、动物性产品药物残留和肠道菌群失调等，也引发了一系列食品安全等社会问题，严重影响了养殖经济的发展，因此，寻求安全、绿色、环保型饲料添加剂是当前重要工作之一[1]。中草药添加剂近年来成为动物营养学研究的热点，是可能代替传统抗生素添加剂的理想选择之一，中草药成分复杂、效应广泛，不但含有抗菌、抗病毒等治疗成分，还含有调节机体内环境、增强机体抵抗力的其它成分，而且毒副作用低、无抗药性、无残留，具有广阔的应用前景[2]。本试验以海兰褐蛋鸡为研究对象，探讨中草药复方制剂对肠道菌群和消化酶活性的影响，以期为中草药添加剂的广泛应用提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验药品及试剂

中药复方：黄芪15 g、党参5 g、炙甘草15 g、白术10 g、陈皮6 g、当归10 g、升麻6 g、柴胡12 g、生姜9片、大枣6枚，以上为1剂药量,烘干后粉碎，过500目筛，4℃保存备用，所有中草药购自锦州辽西国药；细菌培养基购自杭州天和微生物试剂有限公司；消化酶活检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所。

1.2 试验动物及处理方法

海兰褐蛋鸡30周龄200只，体重、产蛋量等尽量一致，随机分成4个处理组，每个处理组5个重复，每个重复10只。根据蛋鸡营养需要NRC（1994）配制基础日粮（见表1），空白对照组饲喂基础日粮，试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组，在基础日粮中分别添加上述0.5%、1.0%、1.5%的中药复方干粉，预试期7 d，正试期4周，4周后处死所有蛋鸡，进行肠道微生物和消化酶活性检测。

表1 基础日粮组成和营养水平

1.3 检测指标

1.3.1 盲肠微生物定量检测

蛋鸡处死后，无菌取盲肠内容物0.5 g，加入PBS 4.5 ml，用漩涡混合计混匀后稀释至10-6～10-9，每个稀释度3个重复，接种于各自培养基，细菌计数采用平板计数法进行统计，最终以每克肠道内容物中细菌个数的对数lg(CFU/g)表示。所用培养基及培养条件见表2。

表2 微生物检测用培养基及培养条件

1.3.2 小肠消化酶活性测定

蛋鸡在试验结束后处死，在超净工作台中快速解剖，自幽门口至回盲口截取肠段，刮取内容物，液氮保存。检测时加入4℃去离子水，低温匀浆后定容于50 ml容量瓶，摇匀后于4℃下保存，取上清液检测小肠消化酶的活性，具体方法如下。

淀粉酶活性检测：采用碘淀粉比色法。标准：1 g小肠内容物中的淀粉酶,在37℃条件下与底物作用30 min,水解10 mg淀粉为1个淀粉酶活性单位(U)。

胰蛋白酶活性检测：采用N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯(BAEE)法。标准：在pH值8.0、37℃条件下,1 ml小肠内容物中的胰蛋白酶1 min内使D253值升高0.003为1个酶活性单位(U)。

总蛋白酶活性的检测：采用福林酚法。标准：在pH值7.0、40℃条件下,1 min内水解酪蛋白产生l μg酪氨酸所需的酶量为1个活性单位(U)。

脂肪酶活性检测：采用比浊法测定。标准：在40 ℃条件下反应1 min,水解1 μmol基质(橄榄油)所需的酶量为1个活性单位(U)。

1.4 数据处理

试验数据以x±SD表示，采用spss13.0软件比较各组间的差异显著性。

2 结果与分析

2.1 中药复方对蛋鸡盲肠菌群的影响(见表3)

表3 中药复方对蛋鸡盲肠菌群的影响（n=10）lg[CFU/g]

由表3可见，中药复方添加效果明显，各组蛋鸡乳酸杆菌和双歧杆菌数量差异极显著（P＜0.01），试验组数量高于对照组；大肠杆菌和葡萄球菌数量差异显著（P＜0.05），试验组数量低于对照组；3个试验组中，试验Ⅱ组、Ⅲ组4项指标优于Ⅰ组。试验结果说明中药复方能够有效地调节肠道菌群区系平衡，增加有益菌含量，降低致病菌含量，在试验剂量范围内1.5%的添加量效果较好。

2.2 中药复方对蛋鸡小肠消化酶活性的影响(见表4)

表4 中药复方对蛋鸡小肠消化酶活性的影响（n=10）

由表4可见，与对照组相比，试验组胰脂肪酶活性降低，差异不显著（P＞0.05），淀粉酶、总蛋白酶和胰蛋白酶活性升高，差异不显著（P＞0.05）。3个试验组间未表现出明显的剂量关系，即4种酶的活性变化与中药添加剂量无相关性，试验结果说明中药复方对肠道消化酶活性无显著影响。

3 讨论

3.1 中药复方对蛋鸡盲肠微生物的影响

本研究显示，中药复方能够显著提高蛋鸡盲肠乳酸杆菌和双歧杆菌数量（P＜0.01），同时抑制大肠杆菌（P＜0.05）和葡萄球菌（P＜0.05）的生长，使菌群更加平衡，说明此中药复方可以发挥益生元的功能，调节菌群区系平衡。鞠宝玲等[3]以人参、茯苓、白术、甘草制成的方剂治疗林可霉素致菌群失调蛋鸡模型，发现中药复方可以修复损伤的肠黏膜，调节空肠、盲肠菌群平衡，增加有益菌数量；孙巍[4]以黄芪、人参、白术、当归等8味中草药制成补中益气汤，证明其对肠道益生菌的增益作用，并可提高机体的免疫力；刘君星等[5]以人参、茯苓、白术、甘草等中药复方调整衰老蛋鸡肠道菌群平衡，达到改善胃肠功能、提高免疫力、抗衰老等作用；孙耀贵等[6]在AA肉鸡日粮中添加300 mg/kg山楂叶总黄酮和150 mg/kg何首乌二苯乙烯苷,可以显著提高回肠和盲肠乳酸杆菌数，降低大肠杆菌数，改善消化功能，提高饲料利用率。以上报道及本研究所用组方皆为健脾益气的补益类方剂，现代中医研究表明，补益类中药含有黄酮、多糖和皂甙等成分，这些有效成分对微生物的繁殖有明显促进作用，而且对有益菌的扶植作用强于致病菌[7]。这种双向调节的内在机制在于细菌代谢产物的间接抑制作用，例如多糖等可以促进双歧杆菌、乳酸杆菌的繁殖，其代谢产生的酸性物质降低了肠道pH值，导致大肠杆菌繁殖受阻，黄酮、皂甙等也有类似功效[8]。

3.2 中药复方对蛋鸡小肠消化酶活性的影响

本研究显示,中药复方对消化酶活影响虽然不显著（P＞0.05），但与对照组相比，试验组蛋鸡小肠淀粉酶、胰蛋白酶和总蛋白酶的活性均有所提高，胰脂肪酶活性降低。国内有很多关于中草药对动物肠道消化酶活性影响的报道，张利娟等[9]研究表明，含黄芪多糖的中草药复合剂对蛋鸡盲肠各种微生物都有显著影响，有效地改善肠道微生态区系平衡，并增加肠道消化酶活。姚茂忠等[10]以神曲、大蒜、女贞子、淫羊藿等组成中药添加剂，添加与文昌鸡基础日粮，饲喂试验结果显示，0.2%的添加量可以显著提高十二指肠淀粉酶和胰蛋白酶活性。中草药对动物肠道消化酶活性影响的机制目前尚不十分明确，多数研究者认为中药的某些活性成分对肠粘膜有修复作用，使肠绒毛显著变粗、变长，排列更整齐紧密，并且上皮细胞间杯状细胞和黏膜下淋巴细胞增多，从而影响消化酶的合成与分泌，另外，中草药经微生物代谢转化后生成大量酸性物质，降低肠道内pH值，有利于酶的激活。中草药成分复杂，很多成分既可发挥调节作用又是营养成分，各报道所用组方也不尽相同，关于中草药对动物肠道消化酶活性影响机制有待更深入的研究。