三种人工栽培大黄的泻下作用比较研究*

马 丹，郭 玫，王志旺，刘雪枫，王瑞琼

（甘肃中医学院药学系，兰州730000）

唐古特大黄（Rheum.tanguticum Maxim.ex Balf.，RT）和掌叶大黄（Rheum palmatum L.，RP）均为 2010版《中国药典》收载的供药用的大黄［1］，其中RT主产于青海南部、甘肃南部和西藏偏东部［2，3］，西宁为其主要集散地。RP主产于甘肃东南部、四川西北部及西藏东南部。近年来RT的需求量稳步增加，为了发挥我国RT药材资源的优势，地处道地产区的甘南州建设了唐古特大黄GMP种植基地。本研究组在大黄“泻下攻积”功效的指导下，对比考察了甘南栽培RT、西宁栽培RT与甘肃礼县栽培RP的泻下作用，为甘南栽培RT的临床应用与出口评价提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 药品与试剂

复方地芬诺酯片，批准文号：H45020028，广西河丰药业有限责任公司生产，批号：130401；Na＋-K＋-ATP酶，南京建成生物工程研究所生产，生产批号：20140302；其余试剂为分析纯。甘南栽培唐古特大黄（RT-GN）、西宁栽培唐古特大黄（RT-XN）与礼县栽培掌叶大黄（RP-LX），人工栽培，第4年10月份采挖；经本校杨扶德教授鉴定；整形后纵切成厚片，阴干，粉碎即得生大黄粗粉。称取生大黄粗粉15 g，加蒸馏水100 ml，常温（20～24）℃浸泡 2.5 h后用武火煮开，文火煎煮10 min，过滤，得滤液约 30～35 ml，加 12.5 ml碳素墨汁，定容至50 ml，即得含生大黄、碳素墨汁分别为30%与25%的药液。另取蒸馏水加25%的碳素墨汁即得空白对照液，取上述药液用空白对照液稀释3倍即得含生大黄、碳素墨汁分别为10%与25%的药液。上述受试药冷藏，24 h内使用。

1.2 仪器

TGL-16G高速冷冻离心机，上海安亭科学仪器厂生产；BS1103 sartorius电子天平，北京赛多里斯有限公司；HH-S型恒温水浴锅，金坛市正基仪器有限公司生产；722型分光光度计，上海第三分析仪器厂生产。

1.3 实验动物与分组

KM小鼠，SPF级，雌雄各半，由甘肃中医学院实验动物中心提供，实验动物质量合格证号SCXK（甘）2011-0001。SPF级实验室，许可证号为SYXK（甘）2011－0001。取小鼠按性别体重分层随机分为8组，每组随机分为A、B、C三小组（n＝12）。

1.4 小鼠便秘模型的复制与给药

小鼠禁食不禁水8 h后，灌胃复方地芬诺酯50 mg／kg［4］，正常对照组蒸馏水灌胃20 ml／kg。造模1 h后，灌胃给药RTGN（6.0 g／kg、2.0 g／kg）、RT-XN（6.0 g／kg、2.0 g／kg）、RP-LX（6.0 g／kg、2.0 g／kg），正常对照组与模型对照组空白对照液灌胃 20 ml／kg。

1.5 观察指标

1.5.1 大黄对便秘小鼠的排便时间及次数 A组小鼠给药后分笼饲养，观察小鼠首次排出黑便的时间及5 h内的排便次数。

1.5.2 大黄对便秘小鼠肠道含水量的影响 B组小鼠给药1 h后脱颈椎处死，打开腹腔，结扎幽门下端与直肠末端，双向结扎回盲部，分离肠系膜，取出自幽门至回盲部的小肠以及自回盲部至直肠末端的大肠，称取湿重后将其置于56℃烘箱，干燥至衡重后称取干重，计算肠道的含水量肠道含水量（%）＝（湿重-干重）／湿重×100%。

1.5.3 大黄对便秘小鼠结肠Na＋-K＋-ATP酶活性影响 C组小鼠给药1 h后脱颈椎处死，打开腹腔，立即从回盲部下端开始剪取结肠，用预冷的生理盐水洗净粪便与血液，滤纸吸取多余水分，称取0.2 g制备10%的均浆，1 000 r／min离心10 min，取结肠均浆上清液按试剂盒说明书测定Na＋-K＋-ATP酶的活性。组织中Na＋-K＋-ATP酶活力计算公式：ATP酶活力（U／mg）＝｛［（A测定管－A对照管）÷A标准管］×标准管浓度×反应体系中样品稀释倍数×6｝÷蛋白含量

1.6 统计学的处理方法

2 结果

2.1 便秘小鼠的排便时间及次数

灌服复方地芬诺酯后，小鼠首次排出黑便的时间延长，5 h内排便次数减少，与正常对照组比较有统计学意义（P＜0.01），说明便秘小鼠模型复制成功；经三种大黄干预后，小鼠首次排出黑便的时间缩短，5 h内排便次数明显增多，与模型对照组比较有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）。与相同剂量礼县栽培掌叶大黄比较，甘南栽培唐古特大黄与西宁栽培唐古特大黄的泻下作用更强（表1）。

Tab.1 Comparative study on purgative effect of RT-GN in costive mice（，n＝12）

Tab.1 Comparative study on purgative effect of RT-GN in costive mice（，n＝12）

**P＜0.01 vs control group； ＃＃P＜0.01 vs model group；△P＜0.05，△△P＜0.01 vs RT-XN group

Group Dosage sg／kg Time of defecate in 5 hour Control - 116.3±28.3 4.9±1.8 Model - 240.4±30.6** 1.8±0.6**RP-LX High 6.0 202.0±29.9＃＃ 4.8±2.0＃＃RP-LX Low 2.0 211.5±32.3 3.6±1.6＃＃RT-GN High 6.0 176.9±31.0＃＃ 8.9±2.4＃＃△△RT-GN Low 2.0 181.4±35.0＃＃△ 9.0±3.8＃＃△△RT-XN High 6.0 178.7±33.0＃＃ 7.3±1.4＃＃△△RT-XN Low 2.0 182.6±30.7＃＃△ 7.7±2.6＃＃latency（min） Defecate time△△

2.2 便秘小鼠肠道含水量的变化

小鼠给予止泻药后，小肠湿重、小肠与大肠的含水量明显减少，与正常对照组比较有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）。经受试药干预后，甘南栽培唐古特大黄高剂量与西宁栽培唐古特大黄高剂量对便秘小鼠小肠湿重、小肠含水量有一定的提高作用（P＜0.05）。对大肠含水量，三种大黄均有显著的增加作用（P＜0.01），其中甘南栽培唐古特大黄与西宁栽培唐古特大黄的作用比礼县栽培掌叶大黄的作用更强（P＜0.01）；同时，实验数据显示甘南栽培唐古特大黄与西宁栽培唐古特大黄的作用显示出了一定的量效关系（P＜0.05）。由于大便的排泄对小鼠大肠干重的影响比较大，因此大肠干重、大肠湿重的组间差异没有实际意义（表2）。

2.3 便秘小鼠结肠Na-K-ATP酶活性的变化

模型对照组小鼠结肠Na＋-K＋-ATP酶的活性有所提高，与正常对照组比较有统计学意义（P＜0.05）。经药物干预后，三种大黄可明显抑制小鼠结肠Na＋-K＋-ATP酶的活性，与模型对照组比较有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01），且显示出一定的量效关系。与相同剂量礼县栽培掌叶大黄组比较，甘南栽培唐古特大黄与西宁栽培唐古特大黄的抑制作用更强（P＜0.05，表 3）。

Tab.2 Comparative study on small intestine’s and large intestine’s moisture content of RT-GN（，n＝12）

Tab.2 Comparative study on small intestine’s and large intestine’s moisture content of RT-GN（，n＝12）

*P＜0.05，**P＜0.01 vs control group；＃P＜0.05，＃＃P＜0.01 vs model group；△△P＜0.01 vs RT-XN group；▲P＜0.05 vs RTGN group

Group Dosage（g／kg ）Small intestine Wet weight（mg）dry weight（mg）Moisture content（%）Large intestine Wet weight（mg）dry weight（mg）Moisture content（%）Control - 1818.9±114.4 756.8±40.3 78.8±1.3 1257.9±140.6 658.8±35.7 77.7±1.4 Model - 1711.7±101.3*767.7±34.9 77.0±1.3* 1179.2±122.4 682.7±28.3 72.3±2.1**RP-LX High 6.0 1758.1±168.7 784.5±50.6 77.6±1.6 1280.0±275.6 667.7±50.0 77.6±2.5＃＃RP-LX Low 2.0 1724.8±205.9 776.6±77.2 77.5±1.4 1399.5±128.8 708.0±59.2 76.8±1.5＃＃RT-GN High 6.0 1877.7±222.8＃771.0±41.2 79.1±2.8＃ 1313.8±151.6 653.4±66.1 82.1±1.8＃＃△△RT-GN Low 2.0 1743.3±199.0 784.5±71.4 77.3±1.4 1451.0±179.7 689.2±66.8 80.2±1.5＃＃△△RT-XN High 6.0 1865.8±196.4＃794.0±51.0 81.1±6.7＃ 1209.2±103.0 628.5±28.9 82.4±2.8＃＃△△▲RT-XN Low 2.0 1732.2±270.7 769.6±56.0 78.4±3.3 1389.4±170.8 676.4±61.5 79.8±2.6＃＃△△▲

Tab.3 Comparative study on the colon’s Na／K ATPase of RT-GN in costive mice（，n＝12）

Tab.3 Comparative study on the colon’s Na／K ATPase of RT-GN in costive mice（，n＝12）

*P＜0.05 vs control group；＃P＜0.05，＃＃P＜0.01 vs model group；△P＜0.05 vs RT-LX group

Group Dosage（g／kg） Na＋／K＋ ATPase（U／mg ）Control - 5.166±0.559 Model - 5.710±0.581*RP-LX High 6.0 4.108±0.479＃＃RP-LX Low 2.0 4.571±0.503＃RT-GN High 6.0 3.607±0.448＃＃△RT-GN Low 2.0 4.006±0.458＃＃△RT-XN High 6.0 3.646±0.452＃＃△RT-XN Low 2.0 4.024±0.461＃＃△

3 讨论

唐古特大黄作为大黄的优质品种之一，国内使用与作为商品出口的需求量很大；为了发展生产、保护环境，大黄原产地的各省区相继建立了一批大黄生产基地，如四川的南川、甘肃的礼县、宕县等地，但从现有的基地布局来看，公认的唐古特大黄地道产区—青海南部、西藏偏东部、甘肃南部一带的生产基地发展缓慢，商品生产仍是以野生来源为主。因此，为保证我国唐古特大黄药材资源的优势，加快优质大黄产区的基地建设，甘南州建设了一批唐古特大黄生产基地。为了考察甘南州GMP基地所产唐古特大黄的质量，本研究组就甘南栽培唐古特大黄与西宁栽培唐古特大黄、甘肃礼县栽培掌叶大黄的有效成分、主要药理作用展开研究，为甘南州栽培唐古特大黄的临床应用与出口评价提供理论依据。

本次研究在大黄“泻下攻积，主治实热积滞便秘”的中医药理论指导下，通过灌胃复方地芬诺酯来复制便秘动物模型，观测甘南栽培唐古特大黄的泻下作用及其机制。实验结果显示，甘南栽培唐古特大黄、西宁栽培唐古特大黄及礼县栽培掌叶大黄具有明显的泻下作用，可缩短排便时间，增加排便次数。抑制肠道对水分的吸收、增加肠内容物的体积而刺激肠壁，使肠蠕动加快是泻下药作用机制之一［5］；实验结果显示，抑制结肠肠壁Na＋-K＋-ATP酶的活性而抑制肠道对水分的吸收是大黄泻下作用机制之一。本次实验结果显示，唐古特大黄的泻下作用及对肠肌Na＋-K＋-ATP酶和肠道水分吸收的抑制作用明显强于掌叶大黄，这与以前的研究相一致［6］；实验过程中发现，甘南栽培唐古特大黄与西宁栽培唐古特大黄的泻下作用及对肠肌Na＋-K＋-ATP酶和肠道水分吸收的抑制作用无明显差异。

总之，甘南栽培唐古特大黄有明显的泻下作用，其泻下强度与西宁栽培唐古特大黄无明显差异，而明显优于礼县栽培掌叶大黄；抑制结肠Na＋-K＋-ATP酶而抑制肠道水分的吸收是甘南栽培唐古特大黄泻下机制之一。

［1］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典［M］.北京：中国医药科技出版社，2010：22.

［2］ 焦东海，杜上鉴.大黄研究［M］.上海：上海科学技术出版社，2000：115.

［3］ 王 岩，宋良科，王小宁，等.大黄种质考证与资源分布［J］.中国药房，2013，24（11）：1040.

［4］ 李会芳，王伽伯，曲 毅，等.大黄炮制前后致泻效价的比较［J］.中国中药杂志，2012，37（3）：302.

［5］ 侯家玉.中药药理学［M］.北京：中国中医药出版社，2012：141.

［6］ 王家葵，李 傲，王 慧，等.正品大黄不同品种间泻下效价强度比较研究［J］.中国中药杂志，2006，31（23）：1987.