补肾活血法对单纯收缩期高血压大鼠NO、AngⅡ的影响

宋业琳卢 娜徐伟俊魏陵博于广宇聂颖颖迟伟峰李 洁

（1天津中医药大学，天津，300193；2青岛市海慈医疗集团，青岛，266033；3青岛阜外心血管病医院，青岛，266034）

实验研究

补肾活血法对单纯收缩期高血压大鼠NO、AngⅡ的影响

宋业琳1，2卢 娜3徐伟俊1魏陵博1于广宇1聂颖颖1迟伟峰1李 洁1

（1天津中医药大学，天津，300193；2青岛市海慈医疗集团，青岛，266033；3青岛阜外心血管病医院，青岛，266034）

目的：探讨补肾活血法对单纯收缩期高血压（Isolated Systolic Hypertension，ISH）模型大鼠血管重塑的影响。方法：采用法华林和维生素K诱导动脉中层钙化法（WVK）法复制ISH大鼠模型，分为补肾活血汤组、氨氯地平组、补肾活血汤与氨氯地平联用组（两药联用组）、空白对照组、模型对照组，予以相应的药物干预，8周后检测大鼠尾端血压、血清一氧化氮（Nitrogen Monoxide，NO）、血管紧张素Ⅱ（AngiotensinⅡ，AngⅡ）水平。结果：补肾活血法能够增加ISH大鼠血清NO水平，降低AngⅡ水平，较模型组均有统计学意义（P＜0.05），且中西药联用组效果更明显。结论：补肾活血法等够改善ISH大鼠的血管顺应性。

补肾活血法；单纯收缩期高血压；一氧化氮；血管紧张素Ⅱ；血管顺应性

ISH是指收缩压≥140mmHg，舒张压＜90mmHg，是高血压的一种特殊类型，常见于60岁以上的老年人，其发生常与血管重塑[1]有关，如动脉中层弹力纤维减少，血管僵硬度增加、弹性下降，血管顺应性降低等。本研究根据老年ISH患者“肾虚血瘀”的发病机制，探讨补肾活血法对单纯收缩期实验大鼠血管重塑之血管顺应性的影响。

1 材料

1.1 实验动物 选取健康6～7周龄Wistar-Kyoto大鼠（WKY）50只，SPF级，♂，体重175～200 g，由青岛市药物检验研究所提供，动物合格证号SCXK（鲁）20090007。大鼠饲养于青岛市海慈医疗集团动物房，金属鼠笼，分笼饲养，每笼5只，保持室内环境恒温（19 ±3）℃，湿度在50%～60%，通风良好，标准饲料，自由进食饮水。

1.2 药物 补肾活血汤（BSHXD）药物组成为生地黄20 g、熟地黄20 g、山茱萸15 g、茯苓15 g、泽泻30 g、牡丹皮12 g、菟丝子20 g、益母草15 g、当归15 g、钩藤15 g、淫羊藿6 g，由青岛海慈医疗集团药剂科中药制剂室制备，浓度为生药1.647 g／mL，质量标准按照2010版《中华人民共和国药典》；苯磺酸氨氯地平片，每片5 mg，大连辉瑞制药有限公司（国药准字号：H10950224）；华法林钠片，每片2.5 mg，山东齐鲁制药有限公司生产（国药准字号：H37021314）；维生素K1注射液，每支1 mL：10 mg，山东鲁抗辰欣药业有限公司生产（国药准字号：H37021988）。

1.3 试剂 大鼠用血清NO测定试剂盒，购自湖北武汉博士德试剂有限公司；大鼠用血清AngⅡ试剂盒（批号201007171），购自青岛市百瑞达医疗器械有限公司。

2 方法

2.1 模型制备 WVK法诱导动脉中层钙化法[2]。华法林钠片研成粉末，蒸馏水配成悬浊液，按照华法林钠片15 mg／（kg·d）灌胃，1次／d；予以维生素K1注射液，按10 mg／（kg·d）背部皮下注射，每天1次。维生素K1比华法林提前1周用药，每2周测量并记录血压1次，6周后判定造模结果。收缩压升高并持续大于18.67 kPa（140 mmHg）为造模成功。

2.2 分组及给药

2.2.1 分组 实验大鼠随机分为5组。随机选取其中的10只做空白对照组，其余40只进行高血压造模。按随机数字表法分为：补肾活血汤组、氨氯地平组、补肾活血汤与氨氯地平联用组（中西药联用组）、模型对照组，每组10只。

2.2.2 给药 根据人和动物间按体表面积折算的等效剂量分别灌胃给药：补肾活血汤组给予16.47 g／（kg ·d）；氨氯地平组给予0.45 mg／（kg·d）；中西药联用组给予BSHXD 16.47 g／（kg·d）和氨氯地平0.45 mg／（kg·d）；余组给予蒸馏水10 mL／（kg·d）；配制成10 mL／（kg·d），1次／d，给药8周。

2.3 指标检测 ELISA法检测大鼠血清NO、AngⅡ实验大鼠最后1次给药后，予以禁食12 h，用10%水合氯醛（0.2 mL／kg）腹腔注射麻醉大鼠，腹部正中切口，腹主动脉取血约5 mL，3 500 r／min离心10 min，将大鼠血清置于-70℃低温下冷冻备用；严格按照免疫组化试剂盒说明的操作步骤，测定血清AngⅡ含量。

2.4 统计学方法 应用SPSS 17.0统计学软件进行数据处理，所有结果以（±s）表示，数据之间比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD-t。

3 结果

3.1 各组大鼠血清NO水平 与空白对照组比较，模型对照组NO浓度较低，差异有统计学意义（P＜0.01）；与模型对照组比较，各治疗组NO浓度均增高，差异有统计学意义（P＜0.01）；两药联用组较氨氯地平组升高明显，差异有统计学意义（P＜0.01），见表1。

表1 各组大鼠血清NO、AngⅡ水平比较（±s）

表1 各组大鼠血清NO、AngⅡ水平比较（±s）

注：与空白对照组比较，**P＜0.01；与模型对照组比较，△△P＜0.01；与氨氯地平组比较，▲▲P＜0.01。

组别只数NO（μmol／L）AngⅡ（pg／m L）10 95.58±26.98 36.01±12.21模型对照组8 51.26±9.35**289.55±72.23**补肾活血汤组9 164.71±27.85△△140.23±10.71△△氨氯地平组10 98.54±6.23△△147.28±12.97△△两药联用组9 201.27±27.20**△△▲▲48.35±13.29空白对照组**△△▲▲

3.2 各组大鼠血清AngⅡ水平 与空白对照组比较，模型对照组AngⅡ升高，差异有统计学意义（P＜ 0.01）；与模型对照组比较，各治疗组AngⅡ均有所降低，其中两药联用组降低最为明显，与空白对照组比较无统计学意义（P＞0.05），见表1。

4 讨论

ISH的发生主要与动脉僵硬度增加有关[3]。随着年龄的增长，老年人大动脉的结构也发生了变化[4-5]：如动脉中层弹力纤维减少，血管僵硬度增加、弹性下降[6]，血管顺应性降低[7]等。老年ISH时肾素-血管紧张素系统等神经体液因子的激活促进了动脉僵硬程度的增加[8]和血管收缩功能紊乱。这与中医病机“肾虚血瘀”相辅相成。老年单纯收缩期高血压患者天癸衰竭[9-10]，虚则气血运行不畅，血留而不行致瘀，因此肾虚是形成血瘀的重要因素。肾虚和血瘀相互影响，肾虚为本，血瘀为标，由虚致瘀，血瘀是肾虚的必然结果，而血瘀的存在又加重了肾虚。因此，肾虚血瘀是老年人单纯收缩期高血压病的根本病机。

NO是调节血管顺应性的重要因子，通过对血管平滑肌细胞的调控作用调节机体器官的血流量，使其保持相对稳定，使血管自身调节作用得到发挥，可以调节机体的血压水平，NO缺乏时，这种调节作用减弱甚至缺失，导致血管顺应性下降，在某种程度上导致了高血压病的发病[11]。血清中的NO可以阻滞细胞生长[12]，高血压血管重塑是刺激因子和抑制因子间比例失衡的结果。在一般情况下，血管持续受到血流的冲击，由于某些原因导致血压突然的升高时，NO发挥其有效的调节血管作用[13]，保持机体各器官，尤其是心、脑、肾等重要脏器的血流量的相对稳定性，发挥血管自身调节血流量的作用，这不仅能够有效降低体循环血压水平[14]，还能改善局部血流分布，调节微循环的血流量，起到有效调节血压的作用。AngⅡ是潜在的促生长因子，分泌过多[15]，会导致血管平滑肌紧张度增高，血管强烈收缩，长期的刺激，血管壁的平滑肌细胞发生代偿性的增生，细胞肥大，其在高血压血管重塑[16-17]中发挥重要作用[18]。

本实验表明补肾活血汤能够提高血液中NO含量，从而起到调节血压，降低血管重塑的作用；且作用优于氨氯地平组药物，可能与方剂中含有的类内源NO物质有关[19]。补肾活血汤能够有效降低AngⅡ的水平，发挥其降压作用，由此推测，其降压作用可能与改善肾素-血管紧张素系统有关，同时能够减少血管重构，中西药物联用作用更强。综上所述，补肾活血法能够通过提高NO水平，减低AngⅡ的水平从而达到调节血管顺应性、改善血压的作用。

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（2013-06-19收稿 责任编辑：徐晖）

Effect of Bushen Huoxue Method on Expression of NO and AngⅡin Isolated Systolic Hypertension Rats

Song Yelin1，2，Lu Na3，Xu Weijun1，Wei Lingbo1，Yu Guangyu1，Nie Yingying1，Chi Weifeng1，Li Jie1
（1 Tianjin University of TCM，Tianjin 300193，China；2 Qingdao Hiser Medical Group，Qingdao 266033，China；2 Qingdao Fuwai Hospital，Qingdao 266033，China）

Objective：To explore effect of the Bushen Huoxue method on vascular remodeling of isolated systolic hypertension（ISH）rats.Methods：ISH rats model was established by WVK method，divided into Bushen Huoxue decoction group，amlodipine group，Bushen Huoxue decoction-amlodipine combination group，blank control group，and model control group，gave corresponding drug intervention，measured rat’s tail blood pressure，serum NO level，AngⅡlevel after 8-week treatment.Results：Bushen Huoxue decoction can significantly increase serum NO level and reduce the AngⅡlevel in ISH rats compared with model group（P＜0.05）.The Chinese and western medicine combination group was more effective.Conclusion：Bushen Huoxuemethod can improve vascular compliance in rats of isolated systolic hypertension.

Bushen Huoxue method；Isolated systolic hypertension；Nitric oxide；AngiotensinⅡ；Vascular compliance

R243；R259；R289.5

A

10.3969／j.issn.1673-7202.2014.02.024

2010年度青岛市公共领域科技支撑计划（编号：10-3-3-5-3-nsh）