紫草和川牛膝对中华绒鳌蟹生长及抗氧化指标的影响

陈成勋，陶宗龙，季延斌，魏君立，孙学亮，孙朦朦，张凤东

（1.天津农学院水产科学系，天津市水产生态及养殖重点实验室，天津 300384；2.天津市益利来养殖有限公司，天津 300380；3.天津市水产研究所，天津 300221；4.天津市地天亿水产养殖有限公司，天津 300134）

紫草和川牛膝对中华绒鳌蟹生长及抗氧化指标的影响

陈成勋1，陶宗龙2，季延斌1，魏君立3，孙学亮1，孙朦朦1，张凤东4

（1.天津农学院水产科学系，天津市水产生态及养殖重点实验室，天津 300384；2.天津市益利来养殖有限公司，天津 300380；3.天津市水产研究所，天津 300221；4.天津市地天亿水产养殖有限公司，天津 300134）

为研究紫草和川牛膝对中华绒螯蟹生长及抗氧化指标的影响，试验分为对照组、紫草添加0.5%组、紫草添加1.0%组，川牛膝添加0.5%组，川牛膝添加1.0%组，每组3个重复。分别在试验开始后第2周和第4周取肌肉和内脏团测定生长和相关健康指标。结果表明，一定范围内川牛膝添加量为0.5%时能提高中华绒鳌蟹T-SOD、CAT活力，降低MDA和NO含量；1.0%川牛膝能提高NO含量。一定范围内添加1.0%紫草能提高中华绒鳌蟹T-SOD、CAT活力，降低MDA和NO含量。添加川牛膝和紫草的浓度为1.0%和0.5%时对中华绒鳌蟹体重有促进作用，添加量为0.5%时对中华绒鳌蟹丰满度促进明显。

中华绒螯蟹；紫草；川牛膝；生长指标；健康指标

中华绒鳌蟹（Chinese mitten crab）俗称河蟹，具有生长快、肉质细嫩、味道鲜美等优点，经济价值高，其养殖业己成为水产业支柱产业之一。主要分布在长江中下游各地，在江苏、湖北、安徽和上海等地区已逐渐形成规模化养殖[1]。

伴随中华绒鳌蟹养殖规模扩大，过度密集养殖模式使病害问题日趋严重。当前，我国中华绒鳌蟹采用常规方法养殖，养殖过程中常出现不恰当使用抗生素和重金属药物，造成致病菌抗药性增强，导致蟹体免疫力下降[2]。中药材质中含增强免疫功能成分，能有效调节动物体内非特异性抗菌抗病毒因子[3-6]。Kim等对180种中药甲醇提取物进行试验，发现其中44种对油酸有强抗氧化能力[7]。翁新楚等对700余种中药及香辛料进行大规模抗氧化活性筛选，发现24种中药抗氧化活性很强，64种中药及香辛料有明显的抗氧化活性[8]。中草药除能提高鱼类非特异性免疫能力外，还能调整鱼体新陈代谢，提高抗应激能力，具有抗生素作用、营养与双向调节作用、诱食作用等功能[9]。江长优等研究发现，部分中药能有效提高SOD和CAT活力且在水质条件差时生长良好[10]。李廷友等研究发现，部分筛选中药能有效增加扣蟹组织中SOD和UL活力[2]。

本试验使用紫草（Lithospermum）和川牛膝（Cy⁃athula officinalis）与普通中华绒鳌蟹饲料混合制成中草药饲料，分组饲喂，测定试验组血清中与机体非特异免疫相关的重要酶类活性指标的免疫保护率，探讨中草药添加剂提高中华绒鳌蟹非特异免疫力的效果与影响途径，旨在建立评价中草药使用效果的生物学指标，为推广中草药免疫增强剂的应用提供理论指导。

1 材料与方法

1.1 试验材料

试验河蟹为健康中华绒螯蟹，取自天津市宁河县七里海中华绒鳌蟹种业基地，壳长（2.42±0.24）cm、壳宽（2.57±0.26）cm、壳高（1.23±0.12）cm，体重为（8.43±2.60）g。

1.2 试验设计

商品料（粗蛋白：≥34.0%，粗脂肪：≥3.0%，钙：1.00%～3.00%，总磷：≥1.00%）粉碎过80目筛。将中草药川牛膝和紫草用中药粉碎机粉碎后过80目筛，将其按0、0.5%和1.0%三个梯度添加到成品饲料中。每组随机挑选健康中华绒鳌蟹放在200 L（700 mm×510 mm×450 mm）的PE塑料箱内，每箱50只，雌雄比1∶1；箱内放入砖头瓦片提供中华绒鳌蟹躲避场所。用基础饲料驯化7 d后，待摄食正常开始试验。试验期间每天投喂试验饵料两次，每次投喂量为中华绒鳌蟹重量的4%，每天下午换水1次，连续充气，水温控制在24～28℃。本试验养殖阶段在天津农学院水产科学系循环水试验室完成。分别在第2周、第4周时进行采样，每箱随机抽取中华绒鳌蟹6只，雌雄各半。

1.3 样品制备

将中华绒鳌蟹于冰浴条件下进行解剖，剥去肌肉与内脏团，各组织再按质量比1∶9加入预冷生理盐水冰浴匀浆，之后用Thermo冷冻离心机在4℃、4 000 r·min-1离心15 min，提取上清液即为粗酶液。

1.4 抗氧化指标的测定

试验中各组织总超氧化物歧化酶（T-SOD）、过氧化氢酶（CAT）、丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）等指标采用南京建成生物工程技术研究所提供的试剂盒测定。

1.5 数据处理与分析

试验数据用平均值±标准误表示，数据分析采用SPSS 18.0中的单因素方差分析（One-way ANO⁃VA）处理，以P＜0.05作为差异显著性标准。

2 结果与分析

2.1 川牛膝和紫草对中华绒鳌蟹生长指标的影响

在试验初期，中华绒鳌蟹体重均约为8.43 g，由表1可知，2周和4周后1%川牛膝添加组中华绒鳌蟹体重与同时期对照组相比分别增加2.27%和5.14%，而0.5%添加组与同时期对照组相比体重降低。与对照相比，添加0.5%紫草组在2周后体重下降，4周后体重增加3.06%，添加1%紫草组在2周后4周时体重均增加，分别增加5.33%和6.37%。

由表2可知，添加川牛膝和紫草0.5%和1.0%组在投喂2周后与对照相比均极显著增加（P＜0.01），但在第2周两组中药不同添加量间差异不显著（P＞0.05）；第4周时两组中药组与对照组丰满度差异不显著（P＞0.05）。同梯度间第4周和第2周相比，0.5%川牛膝添加组第4周比第2周显著提高（P＜0.05），而1%添加组无显著差异（P＞0.05），0.1%紫草添加组第4周比第2周显著提高（P＜0.05），而0.5%添加组无显著差异（P＞0.05）。

川牛膝添加量为1.0%时中华绒鳌蟹平均增长最快，然而由于第2周丰满度已达到相对较高水平，到第4周时丰满度略有下降，但变动幅度不大；对照组虽有明显提升，但不如添加中药提升明显。紫草添加量为0.5%时中华绒鳌蟹体重增长最大，同时由于丰满度第2周达到较高水平，第4周时丰满度无变化；添加量为1.0%时平均体重和丰满度均有明显增长。

表1 中草药对中华绒鳌蟹体重的影响(平均值±标准误)Table 1 Effects of Chinese herbs on the Chinese mitten crab body weight(mean±standard error)

表2 中草药对中华绒鳌蟹丰满度的影响(平均值±标准误)Table 2 Effects of Chinese herbs on the Chinese mitten crab fullness(mean±standard error)

2.2 川牛膝对中华绒鳌蟹抗氧化指标的影响

2.2.1 川牛膝对中华绒鳌蟹体内总超氧化物歧化酶（T-SOD）活力的影响

由表3可知，饲料中添加川牛膝后，对中华绒鳌蟹肌肉和内脏团T-SOD活力作用表现为：第2、4周对照组、0.5%组和1.0%组中华绒鳌蟹肌肉中T-SOD差异不显著（P＞0.05）；同一添加量组，第4周T-SOD活力极显著低于第2周（P＜0.01）。2周和4周后0.5%组、1.0%组中华绒鳌蟹内脏团T-SOD活力与对照组相比无显著差异（P＞0.05）；同一添加量组，第4周T-SOD活力极显著低于第2周。对照组4周与第2周相比显著降低（P＜0.05）。在试验期间，饲料中添加川牛膝对中华绒鳌蟹T-SOD活力有促进作用，相对于对照组，0.5%组对T-SOD活力促进作用最大，但添加川牛膝0.5%和1.0%对肌肉中T-SOD活力影响无明显差异。第4周相对于第2周T-SOD活力大幅度减小。

2.2.2 川牛膝对中华绒鳌蟹体内过氧化氢酶（CAT）活力的影响

由表4可知，饲料中添加川牛膝后对中华绒鳌蟹肌肉和内脏团CAT活力影响表现为：第2周1.0%组中华绒鳌蟹肌肉中CAT与对照组相比极显著增加（P＜0.01），0.5%组与对照相比显著增加（P＜0.05）。第4周0.5%组、1.0%组中华绒鳌蟹肌肉中CAT与对照组相比都极显著增加（P＜0.01），0.5%组与1.0%组无显著差异（P＞0.05）；同一添加组，第4周CAT活力均显著低于第2周。第2周中华绒鳌蟹内脏团CAT活力比较，0.5%组极显著对照组和1.0%组（P＜0.01），对照组与1.0%组差异不显著（P＞0.05）。第4周中华绒鳌蟹内脏团CAT活力0.5%组、1.0%组、对照组差异不显著（P＞0.05）。同一添加组，0.5%组CAT活力第4周显著低于第2周，对照组和1%添加组第4周和第2周差异不显著（P＞0.05）。

2.2.3 川牛膝对中华绒鳌蟹体内丙二醛（MDA）含量的影响

由表5可知，饲料中添加川牛膝后，第2周0.5%组中华绒鳌蟹肌肉中MDA含量显著低于对照组（P＜0.05）；1%组极显著低于对照组（P＜0.01）。第4周1%组中华绒鳌蟹肌肉中MDA含量显著低于对照组（P＜0.05）；0.5%组极显著低于对照组（P＜0.01）。同一添加组第4周MDA含量显著低于第2周（P＜0.05）。

第2周中华绒鳌蟹内脏团MDA含量比较，0.5%组和1.0%组都显著低于对照组（P＜0.05），0.5%组与1.0%组无显著差异（P＞0.05）；第4周中华绒鳌蟹内脏团MDA含量0.5%组极显著低于对照组（P＜0.01）、1.0%组显著低于对照组（P＜0.05），0.5%组和1%组无显著差异。

表3 川牛膝对中华绒鳌蟹肌肉和内脏团T-SOD活力影响(平均值±标准误)Table 3 Effects of Cyathula officinalis on T-SOD activity of muscle and visceral mass of Chinese mitten crab(mean±standard error) (U·mgprot-1)

表4 川牛膝对中华绒鳌蟹肌肉和内脏团CAT活力影响(平均值±标准误)Table 4 Effects of Cyathula officinalis on CAT activity of muscle and visceral mass of Chinese mitten crab(mean±standard error) (U·mgprot-1)

表5 川牛膝对中华绒鳌蟹肌肉和内脏团MDA含量影响(平均值±标准误)Table 5 Effects of Cyathula officinalis on MDA content of muscle and visceral mass of Chinese mitten crab(mean±standard error) (nmol·mgprot-1)

2.2.4 川牛膝对中华绒鳌蟹体内一氧化氮（NO）含量的影响

由表6可知，饲料中添加川牛膝后，第2周0.5%组中华绒鳌蟹肌肉中NO含量极显著低于对照组和1.0%组（P＜0.01），对照组与1.0%组差异不显著（P＞0.05）；第4周对照组、0.5%组、1.0%组都差异不显著（P＞0.05）；试验组高于对照组。第4周和第2周同梯度比较NO含量，试验组第4周NO含量低于第2周，但差异不显著（P＞0.05）；对照组明显降低（P＜0.05）。

投喂2周中华绒鳌蟹内脏团NO含量比较，对照组与0.5%组、1.0%组相比极显著降低（P＜0.01），0.5%组与1.0%组无显著差异（P＞0.05），对照组NO含量达到最大值为8.54 μmol·L-1。第4周中华绒鳌蟹内脏团NO含量对照组、0.5%组、1.0%组都差异不显著（P＞0.05）。第4周和第2周同梯度比较NO含量，对照组第4周极显著低于2周（P＜0.01）；0.5%组第4周与第2周差异不显著（P＞0.05）；1.0%组第4周显著高于第2周（P＜0.05）。

2.3 紫草对中华绒鳌蟹抗氧化指标的影响

2.3.1 紫草对中华绒鳌蟹体内总超氧化物歧化酶（T-SOD）活力的影响

由表7可知，饲料中添加紫草后，对中华绒鳌蟹肌肉和内脏团T-SOD活力作用表现为：第2周中华绒鳌蟹肌肉中T-SOD对照组、0.5%组、1.0%组间差异不显著（P＞0.05）；0.5%组T-SOD活力达到最大值为67.41 U·mgprot-1，第4周0.5%组、1.0%组、对照组间差异不显著（P＞0.05）；与第2周同组相比第4周SOD活力极显著降低（P＜0.01）。

投喂2周后中华绒鳌蟹内脏团T-SOD活力比较，与对照组相比1.0%组极显著升高（P＜0.01），0.5%组差异不显著（P＞0.05），1.0%组T-SOD活力达到最大值为42.47 U·mgprot-1。第4周中华绒鳌蟹内脏团T-SOD活力0.5%组、1.0%组、对照组间差异不显著（P＞0.05）。第4周和第2周同组比较T-SOD活力明显降低，对照组第2周与第4周相比差异不显著（P＞0.05），第4周0.5%组、1.0%组T-SOD活性都极显著低于第2周（P＜0.01）。

表6 川牛膝对中华绒鳌蟹肌肉和内脏团NO含量影响(平均值±标准误)Table 6 Effects of Cyathula officinalis on NO content of muscle and visceral mass of Chinese mitten crab(mean±standard error) (μmol·L-1)

表7 紫草对中华绒鳌蟹肌肉和内脏团SOD活力影响(平均值±标准误)Table 7 Effects of lithospermum on SOD activity of muscle and visceral mass of Chinese mitten crab(mean±standard error) (U·mgprot-1)

2.3.2 紫草对中华绒鳌蟹体内过氧化氢酶（CAT）活力的影响

由表8可知，饲料中添加紫草后，对中华绒鳌蟹肌肉CAT活力有抑制作用。第2周对照组中华绒鳌蟹肌肉中的CAT活力极显著低于1.0%组（P＜0.01），对照组与0.5%组差异不显著（P＞0.05）；1.0%组CAT活力达到最大值为6.10 U·mgprot-1。第4周0.5%组、1.0%组中华绒鳌蟹肌肉中CAT与对照组相比差异不显著（P＞0.05）。第4周对照组、0.5%组、0.1%组CAT活力均极显著低于第2周（P＜0.01）。

投喂紫草2周后，对照组、0.5%组、1.0%组中华绒鳌蟹内脏团CAT活力均差异不显著（P＞0.05）。第4周1.0%组中华绒鳌蟹内脏团CAT活力显著高于对照组和0.5%组（P＜0.05）。第4周1.0%组中华绒鳌蟹内脏团CAT活力显著低于第2周（P＜0.05）。对照组和0.5%组与第2周相比差异不显著（P＞0.05）。

2.3.3 紫草对中华绒鳌蟹体内丙二醛（MDA）含量的影响

由表9可知，饲料中添加紫草后，第2周和第4周对照组、0.5%组、1.0%组中华绒鳌蟹肌肉中MDA含量均差异不显著（P＞0.05）。第4周和第2周同梯度相比，4周MDA含量低于2周，但差异不显著（P＞0.05）。

投喂2周后0.5%组中华绒鳌蟹内脏团MDA含量显著低于对照组和1%组（P＜0.05），对照组和1.0%组差异不显著（P＞0.05），第4周0.5%组、1.0%组和对照组之间差异不显著（P＞0.05）；第4周同梯度比较0.5%组MDA含量极显著高于第2周（P＜0.01），对照组和1.0%组与第2周相比差异不显著（P＞0.05）。

2.3.4 紫草对中华绒鳌蟹体内一氧化氮（NO）含量的影响

由表10可知，饲料中添加紫草后，第2周和第4周对照组、0.5%组、1.0%组中华绒鳌蟹肌肉中NO含量均差异不显著（P＞0.05）。第4周1%组NO含量极显著低于第2周（P＜0.01），对照组NO含量显著低于2周（P＜0.05）；0.5%组NO含量与第2周相比无显著差异（P＞0.05）。

投喂2周后，0.5%组中华绒鳌蟹内脏团NO含量显著高于对照组（P＜0.05），1.0%组与对照组和0.5%组差异不显著（P＞0.05），第4周0.5%组中华绒鳌蟹内脏团NO含量极显著高于对照组（P＜0.01）；显著高于1.0%组（P＜0.05）。第4周和第2周同梯度相比第4周对照组、0.5%组、1.0%组NO含量均极显著低于第2周（P＜0.01）。

表8 紫草对中华绒鳌蟹肌肉和内脏团CAT活力影响(平均值±标准误)Table 8 Effects of lithospermum on CAT activity of muscle and visceral mass of Chinese mitten crab(mean±standard error) (U·mgprot-1)

表9 紫草对中华绒鳌蟹肌肉和内脏团MDA含量影响(平均值±标准误)Table 9 Effects of lithospermum on MDA content of muscle and visceral mass of Chinese mitten crab(mean±standard error) (nmol·mgprot-1)

表10 紫草对中华绒鳌蟹肌肉和内脏团NO含量影响(平均值±标准误)Table 10 Effects of lithospermum on NO content of muscle and visceral mass of Chinese mitten crab(mean±standard error) (μmol·L-1)

3 讨论与结论

本试验结果表明，川牛膝2周时对中华绒鳌蟹丰满度的增加随添加浓度增加提高显著，对平均体重无显著影响，此结果可能和川牛膝药物本身有强筋健骨功效有关；第4周时添加川牛膝和紫草对平均体重和丰满度均无明显影响。添加紫草2周时对中华绒鳌蟹丰满度增加影响显著，且浓度为0.5%时效果最好。第4周时对照组平均体重和丰满度均接近试验组，这种情况有可能和中药本身或中华绒鳌蟹的生理性质有关，尚需进一步试验和研究。

SOD是机体免疫调节网络的重要组成部分，具有抗氧化作用[11]；是机体清除氧自由基的抗氧化物酶之一，与体内过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽还原酶（GSH-R）等结合，可有效清除体内O2-、H2O2及ROOH等活性氧[12]。SOD在清除氧自由基防止生物损伤方面起重要作用，减少细胞氧化产物产生，而MDA是机体被自由基氧化后的产物[13]。

本试验结果表明，川牛膝在短期内能提高中华绒鳌蟹体内T-SOD、CAT活力并减少MDA含量。川牛膝虽有免疫功能，但在水产养殖应用上研究鲜见。但在其药理学上，吴海燕研究发现，牛膝所含蜕皮甾酮具有较强的蛋白质合成促进作用，蔗糖密度梯度离心分析提示蜕皮甾酮的蛋白质合成效果至少伴有促进mRNA合成作用[5]。李祖伦等对川牛膝多糖促红细胞免疫功能进行研究[14]。孟大利研究发现，牛膝总皂苷25～50 mg·kg-1对二甲苯致小鼠耳肿胀有明显抑制作用；对慢性炎症模型-小鼠棉球肉芽肿增生有显著抑制作用；对其炎症后期的结缔组织增生有抑制作用[15]。

本文紫草短期内能提高中华绒鳌蟹体内T-SOD、CAT活力和减少MDA含量。此结果与紫草具有抗病毒和抗氧化作用有关。武瑞等研究指出[16-17]，紫草可使肝组织中超氧化物歧化酶（SOD）活力显著升高，而丙二醛（MDA）含量降低，并能明显减轻肝细胞变性、坏死等，与本文结论相符。罗雪娅等指出紫草素可能具有一定的抗脂质过氧化作用[18]；周廷萌等认为[19]，紫草多糖对机体具有增强特异性和非特异性免疫的作用，紫草水提物对四氯化碳诱导的动物肝细胞损伤有保护作用；徐萍研究表明[20]，紫草提取物具有强烈的抗氧化作用，随着紫草提取物用量的增加，抗氧化效果明显加强。与本试验结果一致。

一氧化氮（NO）是近年发现的重要细胞信使分子[21]。多种生物的多种细胞能合成和分泌NO。NO在生物体内参与神经系统、免疫系统和心血管系统的调节作用[22]。本文川牛膝添加量对中华绒鳌蟹NO含量影响为低浓度抑制、高浓度促进，随着养殖周期延长均起相对抑制作用。这可能与NO本身对内脏和免疫器官具有双向调节作用有关，也可能与中华绒鳌蟹本身生物特性有关，有待进一步研究。

紫草2周内使NO含量增加，在一定范围内紫草添加量为0.5%时对中华绒鳌蟹NO含量起极显著促进作用，与赵雪梅等研究结论相似[23]。但NO含量与紫草添加量呈负相关，结果与景玉霞紫草水提取物可提高小鼠免疫力一致[24]，但免疫调节可能存在双向性结论相似，尚需后续试验研究和考证。

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Effect of lithospermum andCyathula officinalison the growth of Chinese mitten crab and antioxidant indicators

CHENChengxun1,TAO Zonglong2,JI Yanbin1,WEI Junli3,SUN Xueliang1,SUN Mengmeng1,ZHANG Fengdong4
(1．Tianjin Key Laboratory of Aqua-Ecology and Aquaculture,Department of Fisheries Science,Tianjin Agricultural University,Tianjin 300384,China;2.Yililai Cultivation Development Co.,Ltd.,Tianjin 300380,China;3.Tianjin Fisheries Research Institute,Tianjin 300221,China;4.Ditianyi Aquaculture Development Co.,Ltd.,Tianjin 300134,China)

To study the effect of lithospermum andCyathula officinalison the growth and antioxidant incicators of Chinese mitten crab,the test was divided into five groups,which were control group,group with 0.5%lithospermum and 1.0%lithospermum,group with 0.5%Cyathula officinalisand 1.0%Cyathula officinalis.Each of these groups repeated three times.Then take the muscle and visceral mass to measure the growth and health indicators at second and fourth weeks after the trial,respectively.The results showed that at a certain range,0.5%Cyathula officinaliscould improve the Chinese mitten crab's T-SOD and CATactivities,decrease the cantents of MDA and NO;1.0%Cyathula officinaliscould increase the contents of NO.At a certain range,1.0%comfrey could improve Chinese mitten crab's T-SOD and CAT activities, decrease the contents of MDA and NO.1.0%Cyathula officinalisand 0.5%lithospermum could improve the weight of Chinese mitten crab,and 0.5%of both objects could obviously improve the fullness of it.

Chinese mitten crab;lithospermum;Cyathula officinalis;gowth index;health indicat

S981.22

A

1005-9369（2014）11-0076-07

2014-02-24

国家星火项目（2013GA610002）；天津市高等学校科技发展基金计划项目（20110621）；天津市农业科技示范推广项目（201101050）

陈成勋（1967-），男，研究员，硕士生导师，研究方向为水产养殖。E-mail:ccxnxy@163.com

时间2014-11-21 16:28:00[URL]http://www.cnki.net/kcms/detail/23.1391.S.20141121.1628.002.html

陈成勋,陶宗龙,季延斌,等.紫草和川牛膝对中华绒鳌蟹的生长及抗氧化指标的影响[J].东北农业大学学报,2014,45(11): 76-82.

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