多囊卵巢综合征患者血清中PEDF 和超敏C 反应蛋白的表达及其相关性研究

程芙蓉 叶小姣 施江平

多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome，PCOS)是最常见的妇科内分泌异常性疾病之一，也是导致女性不孕的主要因素，多见于青春期和育龄期女性(12 ～45 岁)，全世界发生率约为5% ～10%［1］。近年来，慢性炎症反应及代谢相关因子在PCOS 发病中的作用越来越多地引起研究者的重视。有资料显示，PCOS 患者体内慢性炎症因子水平有升高的趋势。

色素上皮衍生因子(PEDF)是一种分泌性糖蛋白，属于丝氨酸蛋白酶抑制基因超家族，具有抗新生血管生成、抗氧化、神经保护及抗炎等多种生物学功能［2］。已有报道发现PEDF 与代谢综合征密切相关;血清PEDF 在2 型糖尿病患者合并胰岛素抵抗时显著增高。而超敏C 反应蛋白(hs -CRP)作为C 反应蛋白的一种，在多种急慢性炎症性疾病的早期即有升高的表现。目前hs - CRP 已被认可作为敏感度指标，提示心肌梗死及组织损伤、感染等机体病理状态中的意义。国外已有研究发现hs -CRP 在PCOS 患者的表达高于健康妇女。但国内对PCOS 患者体内PEDF 和hs-CRP 相关性的报道较少，本试验主要研究PEDF 和hs-CRP 在PCOS 患者血清中的变化，并对这两项指标之间的相关性进行了探讨。

资料与方法

1.基本资料:选择2012 年6 月～2013 年6 月来笔者医院妇产科门诊就诊的PCOS 患者80 例，其中无肥胖PCOS 患者(BMI≤25kg/m2)40 例，为PCOS1 组;肥胖PCOS 患者(BMI ＞25kg/m2)40 例，为PCOS2 组。另外选取同时间段来笔者医院体检的健康女性60 例，其中30 例正常体质量者(BMI≤25kg/m2)，纳入对照1 组;30 例肥胖者(BMI ＞25kg/m2)，纳入对照2 组。所有入选的PCOS 患者及健康对照者均无其他内分泌疾病，无近期感染史，近3 个月内无激素类药物服用史。

2.方法:(1)诊断标准:根据2003 年欧洲人类生殖和胚胎与美国生殖医学学会共同推荐的标准:①稀发排卵或无排卵;②临床有高雄激素特征表现或实验室检查提示高雄激素血症;③B 超示一侧或双侧卵巢见≥12 个直径2 ～9mm 的未成熟卵泡。符合以上3 项中任何2 项者，即可诊断为PCOS。(2)标本收集和内分泌激素测定:所有试验对象于月经周期2～5 天，抽取空腹外周静脉血6ml。其中3ml 送笔者医院检验科，以化学发光法检测标本血清中促卵泡激素(FSH)、促黄体激素(LH)、雌二醇(E2)、睾酮(T)及空腹胰岛素(FINS)水平。另3ml 在室温条件下静置非抗凝管中，2000g 离心，取上层血清置于-80℃备用。(3)血清PEDF 和hs-CRP 的检测:采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定PCOS 患者及健康对照者血清中PEDF，试剂盒购自上海广锐生物公司。使用96 孔板，严格按照说明书要求的步骤进行操作。以酶联免疫检测仪(芬兰雷勃)在波长450nm 处读取标准品和标本各孔OD 值，对照标准曲线得到各标本PEDF 的浓度。使用全自动生化分析仪(美国贝克曼)，采用免疫比浊法检测血清中hs-CRP。

3.统计学方法:使用SPSS 14.0 软件包对数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差(±s)表示，以t 检验行样本均数间的比较，以Pearson 相关分析统计两变量间相关关系，以P ＜0. 05 为差异具有统计学意义。

结 果

1.一般情况和内分泌激素水平:入选的80 例PCOS 患者和60 例正常对照者，年龄18 ～39 岁，各组平均年龄比较无统计学差异(表1)。PCOS1 组和PCOS2 组与各自对应的对照组在BMI 值上也无统计学差异。如表1 所示，PCOS1 组和PCOS2 组患者体内的FINS、FSH、LH 和T 值均显著高于对照1 组和对照2 组，而E2水平在各组之间比较无统计学差异。

表1 各组一般情况和内分泌激素水平统计(±s)

表1 各组一般情况和内分泌激素水平统计(±s)

项目 PCOS1 组 对照1 组 P PCOS2 组 对照2 组P.05 BMI(kg/m2) 23.1 ±1.6 22.9 ±1.3 ＞0.05 26.3 ±1.1 26.5 ±1.5 ＞0.05 FINS(mIU/L) 10.6 ±2.7 6.4 ±3.1 ＜0.05 12.1 ±3.2 7.2 ±3.4 ＜0.05 FSH(mIU/ml) 28.4 ±1.7 17.9 ±1.7 ＜0.05 31.6 ±2.1 20.3 ±1.6 ＜0.05 LH(IU/L) 16.3 ±3.4 9.1 ±2.2 ＜0.05 19.2 ±3.6 10.1 ±3.1 ＜0.05 E2(ng/L) 59.2 ±14.3 65.9 ±17.2 ＞0.05 56.8 ±18.5 69.7 ±20.9 ＞0.05 T(ng/dl) 38.6 ±12.5 9.4 ±2.6 ＜0.05 43.2 ±14.2 10.3 ±4.1 ＜0.05年龄(岁) 25.2 ±3.8 26.1 ±4.0 ＞0.05 25.9 ±3.6 25.4 ±3.9 ＞0

2.各组血清中PEDF 和hs-CRP 水平:PCOS1 组和PCOS2 组血清中PEDF 表达增加，分别为20.2 ±5.8μg/ml 和25. 9 ±4. 2μg/ml，明显高于对照1 组(11.3 ±2.4μg/ml)和对照2 组(13.8 ±3.7μg/ml)(P ＜0.05);而PCOS1 组与PCOS2 组之间PEDF 水平无明显差异(P ＞0.05)。hs -CRP 在PCOS2 组血清中的表达明显高于PCOS1 组(P ＜0.05)，分别为43.6 ±6.1mg/L 和26.2 ±3.5mg/L;而两对照组hs-CRP 的表达均在正常范围内(＜10mg/L)，详见表2。

表2 各组血清中PEDF 和hs-CRP 的表达(±s，μg/ml)

表2 各组血清中PEDF 和hs-CRP 的表达(±s，μg/ml)

与PCOS 1 组比较，#P ＜0.05

项目 PCOS1 对照1 PCOS2 对照2 PEDF 20.2 ±5.8 11.3 ±2.4 25.9 ±4.2 13.8 ±3.7 hs-CRP 26.2 ±3.5 4.6 ±0.8 43.6 ±6.1#6.2 ±1.9

3.PCOS 患者体内PEDF 和hs -CRP 的相关性:为研究PCOS 患者体内PEDF 的升高是否与hs-CRP具有相关性，笔者分别对PCOS 1 组和PCOS 2 组的PEDF 和hs-CRP 之间做了Pearson 相关统计分析。笔者发现，在正常体质量的PCOS 患者(PCOS 1 组)和肥胖PCOS 患者(PCOS 2 组)，其PEDF 水平与hs-CRP 水平呈显著正相关，相关系数r 分别为0.452和0.478(P ＜0.05)。

讨 论

多囊卵巢综合征常合并有多种代谢综合征的表现，如肥胖、血脂异常、高胰岛素血症和胰岛素抵抗。目前认为PCOS 是一个复杂的多系统综合征，其发病由多种因素共同引起，包括内分泌及代谢紊乱引起激素水平异常、卵巢调节失控以及慢性炎症致患者体内炎症因子异常增高。hs-CRP 作为一种典型、敏感的炎症标志物，已经被证实可以用于心肌梗死、脑卒中和血管性疾病的早期预测。有研究发现，hs-CRP 在PCOS 患者体内的水平明显高于健康妇女，笔者的研究也证实了这一点，而且，笔者发现hs-CRP 在体质量异常(即肥胖)的PCOS 患者中增加更为明显(表2)［3］。

色素上皮衍生因子(PEDF)作为一种分泌型糖蛋白，含有418 个氨基酸残基，分子质量约为46.7kDa，其编码基因位于人第17 号染色体短臂末端。PEDF最早被认为是一种神经营养因子，由Tombran -Tink等首次从胎儿视网膜色素上皮细胞的体外条件培养液中分离得到。近年来，人们发现PEDF 也可由脂肪细胞分泌，并在1 型糖尿病和2 型糖尿病患者体内，其表达与甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白(LDL)水平呈正相关。动物实验发现，在单纯肥胖小鼠体内，PEDF 通过抗氧化应激促进脂肪组织的脂解，从而导致脂肪的异常沉积并降低小鼠对胰岛素的敏感度［4］。欧洲和日本的临床试验发现，在研究人群分别为白种人和黄种人的代谢综合征(MS)患者体内，PEDF 显著增高［5，6］。另外，国内及国外均有报道发现PEDF 在PCOS 患者的表达高于正常妇女，且与胰岛素抵抗呈正相关［7，8］。因此，有学者认为PEDF 可作为预测PCOS 患者胰岛素抵抗的亚临床指标之一。目前，国内对我国PCOS 患者体内PEDF 变化的报道十分有限，其与慢性炎症之间的关系也未十分清楚。笔者的研究发现，无论是在正常体质量的PCOS 还是BMI 异常的PCOS，PEDF 均有显著增高。Crowe［4］等认为，PEDF 的表达正相关于BMI。笔者的结果表明，虽然PEDF 的表达在肥胖PCOS 患者有增加的趋势，但与正常体质量的PCOS 患者相比无统计学差异(P ＞0.05)。笔者认为该结果的不一致性在于Crowe 等［4］实验小组是通过肥胖小鼠这一实验模型进行的研究，而笔者是直接对PCOS 患者进行的临床试验，这也是国内首次对PCOS 患者体内的PEDF 水平变化的报道。

PEDF 与hs-CRP 呈正相关揭示了PCOS 发病机制的复杂性。PEDF 可促进胰岛素抵抗的发生发展，hs-CRP 在PCOS 患者的持续升高又提示了慢性炎症的存在。目前认为，慢性炎症与胰岛素抵抗在PCOS 病情的发生与发展中相互促进，互为因果。总言之，PEDF 有望成为PCOS 病情评估的又一项重要指标;而对PEDF 和hs -CRP 之间关系的进一步研究，将有助于深化对PCOS 发病的认识。

1 乐杰. 妇产科学［M］.7 版.北京:人民卫生出版社，2008:256-261

2 Pek S，Tavintharan S，Woon K，et al. Associations between pigment epithelium-derived factor，insulin resistance and high density lipoprotein［J］. Diabet Med. 2013，30(9):1067 -1074

3 戴吉茹，王蕊，梁竹巍. 多囊卵巢综合征患者CRP、hsCRP 的变化与心血管疾病的相关性分析［J］. 中国妇幼保健，2009，6:756 -758

4 Crowe S，Wu LE，Economou C，et al. Pigment epithelium -derived factor contributes to insulin resistance in obesity［J］. Cell Metab，2009，10(1):40 -47

5 Stejskal D，Karpísek M，Svestak M，et al. Pigment epithelium -derived factor as a new marker of metabolic syndrome in Caucasian population［J］. J Clin Lab Anal，2010，24(1):17 -19

6 Yamagishi S，Adachi H，Abe A，et al. Elevated serum levels of pigment epithelium - derived factor (PEDF)in the metabolic syndrome［J］. J Clin Endocrin Metab，2006，91(6):2447 -2450

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8 刘朝霞，刘彩萍.炔雌醇环丙孕酮在降低多囊卵巢综合征合并念珠菌阴道病复发中的作用［J］.中国医刊，2012(12):67 -68