哮喘患者痰液TSLP、IL－4、IL－5、IL－13及血清IgE水平的相关性研究

李克明，唐汉庆，窦锡彬，李晓华，朱晓莹，郑建宇

（右江民族医学院，广西 百色 533000 E－mail：4895235＠qq.com）

在哮喘炎症过程中，Th2 细胞起着重要的介导作用，其释放的IL－4、IL－5、IL－13等细胞因子与哮喘的炎症反应密切相关，胸腺基质淋巴细胞生成素 （thymic stromal lymphopoietin，TSLP）对Th2 细胞优势分化有调控作用［1］。本研究工作通过设立实验组和对照组，观察哮喘患者痰液TSLP、白细胞介素 （IL）－4、IL－5、IL－13及血清免疫球蛋白E （IgE）水平并研究其相关性，探讨TSLP调控Th2 细胞优势分化的效应。

1 资料

1.1 一般资料 30例病例为2011年10月～2013年4月在本院呼吸内科诊治的符合纳入标准的门诊或住院哮喘患者，作为实验组；另外通过健康体检中心选取近4周内无呼吸道感染、肺功能正常健康成年人30例作为对照组。实验组男17例，女13例，急性发作期8 例，慢性缓解期22 例，平均年龄（42.46±14.22）岁，平均病程 （7.65±4.56）年，对照组男16 例，女14 例，平均年龄 （45.88±11.65）岁，两组患者性别、年龄比较，差异无统计学意义 （P ＞0.05）。本研究告知研究对象并获得同意。

1.2 病例选择 ①纳入标准：符合中华医学会呼吸病学分会哮喘学组的支气管哮喘防治指南的诊断标准［2］，无吸烟史或至少戒烟2年以上，近4周内无呼吸道感染史和激素等哮喘药物使用史。②排除标准：支气管哮喘重度患者和哮喘持续状态者；合并变应性鼻炎者；合并有心血管、肝、肾、内分泌或造血系统等严重原发病及精神病患者；妊娠期或哺乳期妇女；口服激素患者；茶碱类制剂过敏患者。

1.3 主要试剂和仪器 IgE 检测试剂盒 （批号：ZP10911，R＆B公司，U.S.A）；IL－4检测试剂盒 （批号：2011021，北京博奥公司）、IL－5检测试剂盒 （批号：2011421，北京博奥公司）、IL－13检测试剂盒 （批号：4023A，Pierce，U.S.A）；TSLP检测试剂盒 （批号：211304A，BD，U.S.A）。酶标仪 （MK3型，Thermo Labsystem 公司）；高速低温离心机 （PK121R 型，ALC 公司）；超低温冰箱 （MDF－U72V型，日本三洋公司）。

2 方法

2.1 血清IgE水平检测 取实验组和对照组每位组员外周静脉血5ml，置于试管中，静置30min后，离心 （1 000r·min－1，6min），取血清并冻存于－70 ℃待检。采用ELISA法检测。按照试剂盒说明书进行操作。

2.2 TSLP、IL－4、IL－5、IL－13水平检测 实验组和对照组均使用超声雾化吸入4%高渗盐水，按常规方法收集痰液10ml，加入50ml 0.1%DTT 溶液，500r·min－1，摇床振荡6min，37 ℃温水孵育10min，再加入100 ml的PBS，500r·min－1，摇床振荡6 min，48μm 孔径滤网过滤，滤液离心，1000r·min－1，离心10min，取上清液于－70 ℃保存待测。采用ELISA 法检测。按照试剂盒说明书进行操作。

2.3 统计学处理 采用SPSS 13.0 统计软件进行，计量资料以 （±s）表示，t检验分析组间差异。采用Spearman方法分析相关性，以P ＜0.05为差异有统计学意义。

3 结果

3.1 两组痰液TSLP、IL－4、IL－5、IL－13及血清IgE水平 和对照组比较，实验组TSLP、IL－4及IgE 水平均显著升高 （P ＜0.01），实验组IL－5及IL－13水平升高，差异均有统计学意义 （P ＜0.05）。见表1。

表1 两组痰液TSLP、IL－4、IL－5、IL－13及血清IgE水平 （±s）

表1 两组痰液TSLP、IL－4、IL－5、IL－13及血清IgE水平 （±s）

注：与对照组比较：a：P ＜0.05，b：P ＜0.01

组别 n TSLP（ng·ml－1）IL－4（ng·ml－1）IL－5（ng·ml－1）IL－13（ng·ml－1）IgE（IU·ml－1）对照组 30 1.12±0.45 1.8±0.95 4.8±1.35 110.12±12.36 1.36±0.14实验组 30 2.82±0.92b 8.6±2.32b 14.8±2.14a 403.23±25.68a 281.06±22.14 b

3.2 实验组痰液TSLP、IL－4、IL－5、IL－13及血清IgE水平相关性 实验组TSLP与IL－4、IL－5、IL－13及血清IgE水平均存在正相关 （r 值分别为0.742，0.351，0.424，0.679，P ＜0.01）；IL－4与IgE 存在正相关 （r值为0.548，P ＜0.01），见表2。

表2 实验组TSLP、IL－4、IL－5、IL－13及血清IgE水平相关性 （n＝30）

4 讨论

关于哮喘的临床研究已有许多报道［3－4］，对于哮喘发病与TSLP关系的基础研究，国内外的研究尚不多见，已有研究显示，TSLP在不同的组织中着重表达于上皮细胞，在抗原呈递细胞触发Th2 在外周变态反应性疾病中起着关键作用［5－6］。TSLP通过树突状细胞引起Th2优势分化，Th2细胞分化后释放细胞因子IL－4、IL－5、IL－13引起肥大细胞、嗜酸性粒细胞浸润及系列变态炎性反应［7－9］，使气道发生病理改变导致哮喘发作［10］。IL－4、IL－5、IL－13可诱导B 细胞产生IgE，在过敏性疾病炎症反应中起着重要作用［11－12］。本研究观察哮喘患者痰液TSLP与IL－4、IL－5、IL－13及血清IgE 水平变化并讨论其相关性。

我们在前期对哮喘模型小鼠的动物实验研究中观察到，和对照组比较，哮喘模型组TSLP mRNA 相对表达量及IL－4水平均显著升高，差异有统计学意义 （P ＜0.01）；模型组的IL－5、IL－13水平也升高，差异有统计学意义 （P ＜0.05）。 ［上述研究结果将发表在 《中国中医急症》2014 年1期］。为探讨TSLP和IL－4、IL－5、IL－13及IgE水平是否存在正相关，我们回到临床研究上，对哮喘患者的TSLP、IL－4、IL－5、IL－13及IgE 水平进行检测并进行各指标的相关性分析，在本研究工作中观察到，哮喘患者的TSLP、IL－4、IL－5、IL－13及IgE 水平均升高，和对照组比较，差异有统计学意义 （P ＜0.01或P ＜0.05），这和我们前期的哮喘模型动物实验研究结果一致，也验证了报道结果［11］，提示我们TSLP的表达及含量在哮喘的发作中是一个关键因素，同时，通过对TSLP、IL－4、IL－5、IL－13及IgE水平的相关性分析，我们也注意到，哮喘患者TSLP与IL－4、IL－5、IL－13及血清IgE水平均存在正相关，IL－4与IgE也存在正相关，说明在哮喘中TSLP与IL－4、IL－5、IL－13及血清IgE的变化趋势是一致的，提示针对TSLP靶向治疗有可能减轻哮喘的炎症反应。

［1］ Lees Y，Kim SJ，Kwon SS，et al.Distribution and cytokine production of CD4and CD8T－lymphocyte subsets in patients with acute asthma attacks ［J］.Ann Allery Asthma Immuno，2001，86 （6）：659－661.

［2］ 中华医学会呼吸病学分会哮喘学组.支气管哮喘防治指南 ［J］.中华结核与呼吸杂志，2003，26 （3）：132－138.

［3］ 刘光武，李明.宣肺平喘汤治疗儿童哮喘64 例临床体会 ［J］.右江民族医学院学报，2010 （3）：377－378.

［4］ 吴剑.儿童支气管哮喘相关危险因素分析 ［J］.右江民族医学院学报，2010，32 （6）：904－905.

［5］ Zhou B，Comeau MR，De Smedt T，et al.Thymic stromal lymphopoietin as a key initiator of allergic airway inflammation in mice［J］.Nat Immunol，2005，6 （10）：1047－1053.

［6］ Rautajoki KJ，Kylaniemi MK，Raghav SK，et al.An insight into molecular mechanisms of human T helper cell differentiation［J］.Ann Med，2008，40 （5）：322－335.

［7］ Ito Y，Shigemori S，Sato T，et al.Class I／II hybrid inhibitory oligodeoxynucleotide exerts Th1and Th2double immunosuppression ［J］.FEBS Open Bio，2012，12（3）：41－45.

［8］ Du WY，Chen CW，Lin FK，et al.IL－33mediates the expressions of IL－5and IL－13in Angiostrongylus cantonensis－infected mice［J］.Exp Parasitol，2013，135 （3）：587－594.

［9］ Couto Alves A，Bruhn S，Ramasamy A，et al.Dysregulation of Complement System and CD4＋T Cell Activation Pathways Implicated in Allergic Response［J］.PLo S One，2013，8 （10）：e74821.

［10］ AL－Shami A，Spolski R，Kelly J，et al.A role for TSLP in the development of inflammation in an asthma medel［J］.J Exp Med，2005，202 （6）：829－839.

［11］ Schmidt S，Hoving JC，Horsnell WG，et al.Nippostrongylus－induced intestinal hypercontractility requires IL－4receptor alpha－responsiveness by T cells in mice［J］.PLoS One，2012，7 （12）：e52211.

［12］ Godava M，Vrtel R，Vodicka R.STAT6－polymorphisms，haplotypes and epistasis in relation to atopy and asthma［J］.Biomed Pap Med Fac Univ Palacky Olomouc Czech Repub，2013，157 （2）：172－180.