细叶榕树提取物急性毒性及身体依赖性实验研究①

冯燕云，胡银婷，吴广勇，赖术

（1.右江民族医学院影像医学本科2010级学生，广西 百色 533000 E－mail：bswaterair＠163.com；2.右江民族医学院护理学本科2010级学生，广西 百色 533000；3.右江民族医学院临床医学本科2009级学生，广西 百色 533000；4.右江民族医学院药理学教研室，广西 百色 533000）

榕树是桑科（Moraceae）榕属（Ficus）植物的总称，全世界有1 200多种，主要分布在热带、南亚热带地区［1］，细叶榕（F.microcarpa）为其中之一。文献［2］记载，细叶榕为常用中草药，以气根、树皮、叶芽入药，具有祛风活络、除湿消肿、清热解毒、抗毒消炎功效，治支气管炎、痢疾、跌打损伤、风湿、骨折等，以民间应用为主。目前主要是细叶榕化学成分研究报道［3－4］，程辉等［5］报道细叶榕（叶、枝、气根混合水提物）有一定的抗炎镇痛作用，国外学者从小叶榕气生根中分离得到多种结构新颖的三萜类成分，并证明其具有一定的抗肿瘤活性［6］。这些研究表明细叶榕具有较好的开发利用价值，但细叶榕毒理学研究迄今尚未见报道。本课题对其水、醇提取物的急性毒性及身体依赖性进行动物实验研究，为进一步开发利用细叶榕提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 药物 新鲜细叶榕树枝及树叶、气根，2012年8月采自右江民族医学院院内，经我院韦斯军主任中药师鉴定。纳洛酮注射液（山东新华制药股份有限公司，批号：120526），95%乙醇溶液。

1.2 药物制备 细叶榕水提取物：新鲜细叶榕树枝、树叶、气根分别切细后水提取（煮沸1h，提取3次，过滤，合并滤液），加热浓缩至每1 ml溶液相当于5g生药。细叶榕醇提取物：用95%乙醇浸泡24h，滤液采用旋转蒸发仪减压浓缩，挥发至无乙醇味（检测不含乙醇），配成每1ml溶液相当于5g生药。实验时水、醇提物溶液浓度为1ml溶液相当于5g生药，能通过小鼠灌胃针头。

1.3 动物 清洁级昆明种小鼠210只，体质量（20±2）g，雌雄各半。动物及饲料均由右江民族医学院实验动物中心提供，动物许可证号为：SCXK 桂2012－003。

1.4 实验方法

1.4.1 预实验 在进行正式实验之前，进行预实验，为正式实验提供依据。将70 只小鼠随机分为7 组，每组10 只，雌雄各半，灌胃前禁食不禁水16h。给药组：以小鼠灌胃可承受的最大体积（每10g体质量0.4ml）1次灌胃给细叶榕水、醇提取物（共6组：细叶榕叶水及醇提取物、细叶榕枝水及醇提取物、细叶榕气根水及醇提取物），给药后常规饲养，观察3d。生理盐水对照组灌胃给予等量蒸馏水，方法同给药组。结果小鼠全部存活，因此，无法测出细叶榕提取物的LD50，提示各提取物毒性很低，是较安全的，故测定细叶榕水、醇提取物对小鼠的最大耐受量［7］。

1.4.2 最大耐受量测定［7］取小鼠70只，体质量（20±2）g，雌雄各半，随机分为给药组（共6 组：细叶榕叶水及醇提取物、细叶榕枝水及醇提取物、细叶榕气根水及醇提取物）和生理盐水对照组，每组10只。于禁食不禁水16h后灌胃给受试药物。给药组，每次每只小鼠按0.4ml／10g 分别灌胃给予细叶榕水、醇提取物，共给药2 次（间隔8h），每次用药剂量为200g／kg（生药），2次总剂量为400g／kg（生药）；生理盐水对照组，每次每只小鼠灌胃给予蒸馏水相同容积生理盐水，共给药2次（间隔8h）［8］，饲料喂养，自由饮水。

给药前称重，给药后立即观察动物反应情况，第1日观察3次，以后每日观察2次，连续观察14d，记录动物皮肤、毛色、呼吸、中枢神经系统、自主行为等，每隔两天称重一次。实验结束时对小鼠进行尸检，解剖观察其心、肝、脾、肺、肾等主要器官的组织变化。

1.4.3 小鼠催促戒断试验［9］取小鼠70 只，雌雄各半，随机分为给药组（共6组：细叶榕叶水及醇提取物、细叶榕枝水及醇提取物、细叶榕气根水及醇提取物）和生理盐水对照组，每组10只。细叶榕提取物组采用递增给药法（按0.2ml／10g，0.3ml／10g，0.4 ml／10g 递增给药）每日灌胃给药2 次（9：00，17：00），连续给药9d。空白对照组每天灌胃同容积的生理盐水。第10d仅在上午9：00给药1次，末次给药2h后给予纳洛酮（4 mg·kg－1，皮下注射）催促。观察60min内各组小鼠跳跃次数及催促前后体重变化情况。

1.5 统计学方法 采用SPSS 13.0统计软件进行分析，数据以（±s）表示，各组均数间比较采用t检验。P ＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 毒性反应情况 第1次给药后，立即观察，给药组小鼠在给药后4h内未出现叫声异常、震颤、惊厥、运动失调、流涎、呼吸困难、腹泻等现象；第2 次给药后给药组小鼠表现同上。对照组小鼠灌胃给予蒸馏水后无异常反应；继续观察14d，每天观察2次（08：00和20：00）。在观察的14d中两组小鼠均未出现叫声异常、震颤、惊厥、运动失调、流涎、呼吸困难、腹泻等现象，给药14d内小鼠未出现死亡情况。

2.2 给药前后体重变化情况 停药后各给药组小鼠的体重均正常逐渐增加，并且增加幅度与生理盐水对照组差异无统计学意义，见表1。说明细叶榕水及醇提取物急性毒性反应不明显。

表1 细叶榕水、醇提取物小鼠急性毒性试验给药前后动物体重变化 （±s，g）

表1 细叶榕水、醇提取物小鼠急性毒性试验给药前后动物体重变化 （±s，g）

组别 n 给药前 给药后第3d 给药后第6d 给药后第10d 给药后第14d细叶榕叶水提取物组 10 26.62±2.73 28.08±2.74 30.09±2.66 31.79±2.14 33.72±1.78细叶榕叶醇提取物组 10 26.50±2.21 28.27±2.86 30.65±2.74 32.43±2.37 34.14±1.95细叶榕枝水提取物组 10 27.25±2.81 30.51±3.06 32.22±2.75 33.79±2.31 35.21±2.19细叶榕枝醇提取物组 10 25.50±3.08 28.99±3.88 30.50±3.77 32.30±3.11 34.27±2.37细叶榕气根水提取物组 10 25.39±2.16 27.87±2.84 29.91±2.80 31.66±2.41 33.52±1.97细叶榕气根水提取物组 10 26.27±1.91 28.35±2.67 30.45±2.41 32.35±2.19 34.07±1.82细叶榕生理盐水对照组 10 25.26±2.44 28.57±2.87 30.71±2.76 32.49±2.28 34.46±1.92

2.3 内脏结构观察 实验第14d称重小鼠后逐只处死并解剖，肉眼观察肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、卵巢、子宫、精囊、前列腺、睾丸、胃、肠及胸腔、腹腔，各器官均未出现体积、颜色、质地明显改变，说明细叶榕水及醇提取物急性毒性反应不明显。

2.4 小鼠催促戒断试验结果 实验结果提示，用纳洛酮催促后各组小鼠均无跳跃反应，催促前后体重平均变化率与与生理盐水对照组比较，差异均无统计学意义（P 均＞0.05），见表2。说明细叶榕水及醇提取物本身无身体依赖性。

表2 小鼠催促戒断试验结果 （±s）

表2 小鼠催促戒断试验结果 （±s）

注：与生理盐水对照组比较，a：t＝1.17，b：t＝1.15，c：t＝1.70，d：t＝0.19，e：t＝0.11，f：t＝1.44，P 均＞0.05

组别 n 跳跃鼠数 跳跃次数 体重变化百分率细叶榕叶水提取物组 10 0 0－2.83±1.51 a细叶榕叶醇提取物组 10 0 0－1.36±1.90b细叶榕枝水提取物组 10 0 0－1.23±1.35c细叶榕枝醇提取物组 10 0 0－2.05±1.32d细叶榕气根水提取物组 10 0 0－2.20±0.99e细叶榕气根醇提取物组 10 0 0－1.41±1.24f 10 0 0－2.15±1.04细叶榕生理盐水对照组

3 讨论

以小鼠灌胃可承受的最大体积（每10g体质量0.4ml）1次灌给细叶榕水、醇提取物，给药后常规饲养，观察3d，结果小鼠全部存活，因此，无法测出细叶榕提取物的LD50。最大耐受量实验中细叶榕水、醇提取物每次用药剂量为400g／kg（生药），2次总剂量为800g／kg（生药），停药后各给药组小鼠的体重均正常逐渐增加，并且增加幅度与生理盐水对照组差异无统计学意义，亦未见实验小鼠有毒性反应，肉眼观察主要器官均未见明显异常，提示细叶榕水、醇提取物毒性低，安全性较高。纳洛酮催促后各组小鼠均无跳跃反应，催促前后体重平均变化率与与生理盐水对照组比较，差异均无统计学意义（P 均＞0.05），即纳洛酮不能引发细叶榕水、醇提取物组小鼠的戒断症状，提示细叶榕水、醇提取物本身无身体依赖性，即无成瘾性。初步研究表明细叶榕具有很好的开发利用前景。

［1］ 杨大荣，彭艳琼，张光明，等.西双版纳热带雨林榕树种群变化与环境的关系［J］.环境科学，2002，23（5）：29－34.

［2］ 张丽霞，管志斌.西双版纳药用榕树资源［J］.亚热带植物科学，2004，33（2）：60－62.

［3］ 牙启康，卢文杰，陈家源，等.榕树须活性部位的成分研究［J］.天然产物研究与开发，2010，22（6）：995－997.

［4］ 江蓓，韩伟立，张庆文，等.小叶榕气生根化学成分研究［J］.中药材，2012，35（6）：904－908.

［5］ 程辉，莫石林，韦春，等.细叶榕水提物镇痛抗炎作用的实验研究［J］.右江民族医学院学报，2007，29（5）：696－697.

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［7］ 陈奇.中药药理研究方法学［M］.北京：人民卫生出版社，1993：112.

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