原发性干燥综合征B 细胞亚群与疾病活动性的相关性分析
2014-01-09邓代华邹晋梅李思吟
杨 静,邓代华,邹晋梅,张 羽,田 岚,李思吟
(四川省绵阳市中心医院风湿科,四川 绵阳621000)
干燥综合征Sjögren's syndrome 是一种破坏外分泌腺体,以累及唾液腺及泪腺为主的慢性自身免疫性疾病,可分为原发性及继发性,也可与其他结缔组织病相重叠。研究发现,原发性干燥综合征(primary Sjögren's syndrome,PSS)患者外周血B 细胞亚群与健康人存在明显差异,CD19+IgD+B 细胞比例明显增多,并且明显高于类风湿关节炎、系统性红斑狼疮及系统性硬化症患者,而CD19+CD38+B 细胞比例明显减少[1]。本研究对我科住院治疗的PSS 患者进行CD19+IgD+B 细胞亚群分析,探讨其对评价PSS疾病活动性的意义。
1 对象与方法
1.1 研究对象 2013 年1 月至2014 年1 月四川省绵阳市中心医院住院的原发性PSS 患者68 例,诊断均符合2012 年美国风湿病学会干燥综合征分类(诊断)标准[2],均为初次诊断,未经过任何激素及免疫抑制剂治疗。男8 例,女60 例;年龄(36.84±16.5)岁;病程(13.27±10.2)月。
1.2 方法 ①CDI9+IgD+B 细胞亚群检测:采用藻红蛋白花青苷(PECY5)标记的鼠抗人CDl9 单克隆抗体、藻红蛋白(PE)标记的鼠抗人IgD 单克隆抗体标记患者外周血B 细胞。应用金域检验中心Cytomics FC 500 流式细胞仪及其分析软件对CD19+IgD+B 细胞亚群比例进行分析。②临床资料收集:收集患者临床表现、实验室检测结果、唇腺病理检测结果,并根据全身症状、淋巴结、腺体、关节、皮肤、肺、肾脏、骨骼肌、周围神经系统、中枢神经系统、血液系统、血清学变化计算疾病活动指数(ESSDAI)[3]和唇腺浸润灶指数(FS)[2]。无淋巴细胞聚集灶形成的患者为FS(-),存在至少1 个淋巴细胞聚集灶的患者为FS(+)。
1.3 统计学方法 采用SPSS 17.0 统计软件进行数据处理。计量资料以均数±标准差表示,采用独立样本t检验;两变量间相关关系采用直线相关分析。P<0.05 为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 CD19+IgD+B 细胞亚群比例及ESSDAI 68例原发性PSS 患者ESSDAI 为(21.18±9.56)分,CD19+IgD+B 细胞比例为(3.2306±1.0418)% (图1)。CD19+IgD+B 细胞比例与ESSDAI 呈正相关(r=0.662,P<0.05),见图2。
图1 PSS 患者CD19+IgD+B 细胞亚群流式图
图2 CD19+IgD+B 细胞比例与ESSDAI 相关分析散点图
2.2 唇腺病理与CD19+IgD+B 细胞比例分析 FS(+)患者42 例,FS(-)患者26 例。FS(+)患者外周血CD19+IgD+B 细胞比例明显高于FS(-)患者(P<0.05);在FS(+)患者中生发中心(+)患者外周血CD19+IgD+B 细胞比例明显高于生发中心(-)患者(P<0.05),见表1。
表1 唇腺病理与CD19+IgD+B 细胞比例分析 (%)
3 讨论
PSS 病因和发病机制复杂,传统的观点认为在PSS 和其它风湿性疾病中,T 细胞耐受的丧失是导致疾病最主要的因素。但近期研究发现B 淋巴细胞刺激因子(BAFF)的产生与PSS 之间的紧密联系以及用B 细胞耗竭药物成功地治疗PSS 患者都说明B 细胞在PSS 疾病发生中的中心地位。因此B细胞功能紊乱是PSS 的重要特征,特别是B 细胞增殖异常导致高丙种球蛋白血症,大量自身抗体(抗RO/SSA 和抗-SSB、组蛋白、单链DNA、类风湿因子)及淋巴瘤的产生在PSS 的发病中起了重要作用。B细胞与PSS 的发病密切相关。
目前大多数研究表明,B 淋巴细胞功能的异常在PSS 的发病机制中起着重要的作用。B 淋巴细胞被异常活化后,产生多种自身抗体、多克隆的免疫球蛋白及免疫复合物,进而激活腺体局部炎症反应,最终导致涎腺和泪腺遭受破坏[4,5]。在唇腺病理活检中,可见到大量淋巴细胞浸润,包括B 淋巴细胞及T淋巴细胞,对唇腺B 淋巴细胞进行分类发现存在不同成熟状态的B 细胞,其中可见大量的浆细胞浸润。研究根据B 细胞表面IgD 及CD38 表达的不同及不同的成熟状态,可分为B1 到B5 不同类型的5种B 细胞亚群,即Bm1、Bm2、Bm3、Bm4、Bm5[6]。这些B 细胞均表达CD19,CD19+IgD+B 细胞在原发性PSS 外周血高表达,提示CD19+IgD+B 细胞与原发性PSS 发病密切相关[7,8]。
Binard 等[1]研究也发现,原发PSS 患者外周血中确实存在不同的B 淋巴细胞亚群,并且这些B 淋巴细胞亚群可作为诊断原发PSS 的一个可靠的免疫学依据。B5 细胞称为浆细胞,可产生大量的自身抗体,其中在PSS 外周血CD19+IgD+B 细胞比例是明显增高的。研究发现,原发性PSS 患者外周血CD19+IgD+B 细胞比例明显高于健康者、类风湿关节炎患者及系统性红斑狼疮患者[7~9]。说明B 细胞免疫在原发PSS 免疫紊乱中起着关键的作用。
唇腺活检是诊断PSS 的一个重要标准,淋巴细胞大量浸润腺体间质并形成浸润灶是患者腺体的主要病理学特点。国内学者研究发现,FS(+)患者的临床症状较FS(-)患者严重,而FS(+)患者中生发中心(+)患者的临床症状尤为严重,具有更高的疾病活动度[10]。PSS 患者淋巴细胞浸润灶及生发中心中存在大量的B 淋巴细胞,因此,B 淋巴细胞浸润及不同亚群的分布可能反映患者疾病的严重程度。本研究发现,FS(+)患者CD19+IgD+B 细胞的比例明显高于FS(-)患者,同时FS(+)患者具有更严重的系统损害及更高的疾病活动度。
2009 年欧洲风湿病联盟(EULAR)制定了对干燥综合征病情的ESSDAI,较为系统而全面地对活动指数的评估,具有较为肯定的有效性。ESSDAI 目前广泛用于临床疾病状态的评估,主要评估临床表现的严重程度及对治疗的反应性,因PSS 为B 细胞主导的自身免疫性疾病,同时也可能反映患者体内免疫紊乱的状态,特别是细胞免疫。本研究对患者CD19+IgD+B 细胞比例与患者ESSDAI 进行相关性分析发现,其与ESSDAI 表现出正相关关系,ESSDAI分数越高,患者CD19+IgD+B 细胞比例越高。羟氯喹联合激素治疗PSS 是被证明有效的治疗手段[11]。经糖皮质激素及羟氯喹治疗3 月后患者ESSDAI 分数明显下降,同时CD19+IgD+B 细胞比例也明显下降,与类风湿关节炎和健康对照组无明显差异。因此,检测CD19+IgD+B 细胞比例可以反映患者疾病活动程度,同时可作为疗效判断的敏感指标。
原发性PSS 患者B 细胞免疫存在紊乱,表现不同B 细胞亚群比例的失调,CD19+IgD+B 细胞作为原发性PSS 高表达的B 细胞亚群,对评价PSS 病情活动,指导治疗,乃至评估预后中有着重要的意义。
[1]Binard A,Le Pottier L,Devauchelle V,et al.Is the blood B-cell subset profile diagnostic for Sjögren syndrome[J]. Ann Rheum Dis,2009,68:1447-1452.
[2]Shiboski SC,Shiboski CH,Criswell LA,et al:American College o f Rheu matology classification criteria for Sjögren's syndrome:adatadriven,expert consensus approach in the Sjögren 's International Collaborative Clinical Alliance cohort[J].Arthritis Care Res,2012,64:475-487.
[3]Seror R,Ravaud P,Bowman S,et al. EULAR Sjögren's syndrome disease activity index:development of a consensus systemic disease activity index for primary Sjögren's syndrome[J].Ann Rheum Dis,2010,69:1103-1109.
[5]Cornec D,Devauchelle-Pensec V,Tobón GJ,Pers JO. B cells in Sjögren's syndrome:from pathophysiology to diagnosis and treatment[J].J Autoimmun,2012,39:161-167.
[6]A Pascual V,Liu YJ,Magalski A. Analysis of somatic mutation in five B cell subsets of human tonsil[J].J Exp Med,1994,180:329-339.
[7]Roguedas AM,Pers JO,Lemasson G. Memory B-cell aggregates in skin biopsy are diagnostic for primary Sjögren 's syndrome[J].J Autoimmun,2010,35:241-247.
[8]Divi C,Alain S,Jacques-Olivier P,et al,Diagnostic accuracy of blood B-cell subset profiling and autoimmunity markers in Sjögren 's syndrome[J].Arthritis Research & Therapy,2014,16:R15.
[9]Pierre Y,Valérie D-P,Jacques-Olivier P.Significance of B Cells and B Cell Clonality in Sjögren's Syndrome[J]. Arthritis & Rheum,2010,26:2605-2610.
[10]田真,周炜,郝燕捷,等. 干燥综合征患者唇腺病理特点与临床特征的相关性研究[J]. 中华风湿病杂志,2011,15(6):389-393.
[11]杨静,邓代华.基础羟氯喹及糖皮质激素联合环磷酰胺冲击治疗原发性干燥综合征肺间质病变的疗效与安全性分析[J]. 实用医院临床杂志,2013,10(6):121-123.